2015年珠三角某市沙門菌監(jiān)測及其病原學(xué)特征分析

鄭悅康　區(qū)金結(jié)

[摘要]目的 了解珠三角某市腹瀉患者沙門菌感染情況，分析沙門菌菌株的血清型分布、耐藥性和分子特征。方法 2015年全年對珠三角某市內(nèi)哨點醫(yī)院的腹瀉患者的糞便標本進行沙門菌監(jiān)測，對分離到的沙門菌進行血清分型、藥物敏感試驗和PFGE分子分型。結(jié)果 2015年珠三角某市內(nèi)哨點醫(yī)院共檢出沙門菌365株，男女比例為1.52∶1（220/145）；各年齡段均可感染沙門菌，以嬰幼兒為主，<1歲占42.2%。血清型以鼠傷寒沙門菌及其變種為主，分子分型表現(xiàn)較大的遺傳多樣性。結(jié)論 在珠三角某市引起感染性腹瀉的沙門菌主要為鼠傷寒沙門菌及其變種，沙門菌耐藥譜和PFGE圖譜無明顯關(guān)聯(lián)。

[關(guān)鍵詞]沙門菌；腹瀉；血清分型；脈沖場凝膠電泳；耐藥性

[中圖分類號] R378.2+2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）08（a）-0148-04

[Abstract]Objective To understand the situation of Salmonella infection in diarrhea patients in a city of Pearl River Delta，to analyze the serotype distribution，drug resistance and molecular characterization of Salmonella strains.Methods Salmonella surveillance was conducted for the fecal specimen of the diarrhea patients in a sentinel hospital in a city in earl River Delta in 2015，and the isolated Salmonella strains were further given serotyping，antimicrobial susceptibility testing，and PFGE typing.Results In 2015，there were 365 strains of Salmonella detected in sentinel hospital in a city of Pearl River Delta.The ratio of male and female was 1.52∶1 （220/145）.Salmonella could infect all ages which mainly on infants，and 42.2% were less than 1 year old.There was Salmonella Typhimurium and its variants were the main serotype，while all the molecular typing showed great genetic diversity.Conclusion Salmonella typhimurium and its variants were the dominant serotype causing infectious diarrhea in a city of Pearl River Delta.There was no significant correlation between Salmonella resistance patterns and PFGE typing.

[Key words]Salmonella；Diarrhea；Serotype；Pulsed field gel electrophoresis；Drug resistance

沙門菌廣泛分布于自然界，寄生于人和動物體內(nèi)，亦常見于污染的蛋、奶及其制品、肉類、食品、飼料、水產(chǎn)品和污水等外環(huán)境[1]。2000～2009年，我國每年非傷寒沙門菌發(fā)病約900萬人次[2]。據(jù)統(tǒng)計在世界各國細菌性食物中毒中，沙門菌引起的食物中毒常列榜首。全球每年約有1600萬沙門菌感染病例[3-4]。本文為了解2015年珠三角某市腹瀉患者沙門菌感染的情況，對該市哨點醫(yī)院監(jiān)測所得沙門菌菌株進行血清分型、藥物敏感試驗和PFGE分子分型，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

2015年1月1日～12月31日，珠三角某市各哨點醫(yī)院從患者糞便標本中分離并經(jīng)生化鑒定后上送的沙門菌菌株共365株。

1.2 試劑和儀器

SBG肉湯、沙門菌顯色培養(yǎng)基、XLD平板均購自廣東迪景微生物科技有限公司；診斷血清購自丹麥SSI公司；XbaⅠ限制性內(nèi)切酶、D Buffer購自美國Promega公司，蛋白酶K購自MercK公司；PFGE分型專用瓊脂糖Seakem Gold購自瑞士Lonza公司；脈沖場電泳儀、凝膠成像儀均購自美國Bio-Rad公司，VITEK-2 compact購自法國生物梅里埃公司。

1.3 分離培養(yǎng)及鑒定

醫(yī)院上送的菌株經(jīng)營養(yǎng)肉湯復(fù)蘇，接種XLD平板，37℃培養(yǎng)過夜。挑取菌株進行血清學(xué)分型。

1.4 藥物敏感試驗

采用VITEK-2 compact及其配套藥敏試劑。結(jié)果判斷參照美國臨床實驗室標準化研究所（CLSI）出版的藥物敏感試驗指南（2015版）[5]。

1.5 PFGE實驗

參照美國PulseNet的標準操作方法[6]，將實驗菌株進行脈沖場電泳后產(chǎn)生的DNA圖譜，根據(jù)成像設(shè)備要求保存圖像為*.img或*.1sc文件，轉(zhuǎn)換成*.tif文件，用于Bionumerics軟件進行聚類分析，輸出親緣關(guān)系樹狀圖譜。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析endprint

采用基于條帶比較的Dice系數(shù)衡量PFGE帶型之間的相似度，相似度為100%者視為同一PFGE型。采用基于藥敏比較的Categorical（value）系數(shù)衡量藥敏之間的相似度。

2結(jié)果

2.1不同性別檢出沙門菌數(shù)量的比較

男性患者沙門菌的檢出率高于女性（表1）。

2.2不同年齡段檢出沙門菌數(shù)量的比較

<1歲年齡段患者沙門菌的檢出率較高（表2）。

2.3 全年各個月份檢出沙門菌數(shù)量的比較

5～11月份菌株數(shù)量占比較高（表3）。

2.4不同血清型沙門菌檢出數(shù)的比較

血清型I4，5，12：i：-檢出數(shù)占比最高（表4）。

2.5鼠傷寒及其變種沙門菌的PFGE聚類分析和藥敏聚類分析

鼠傷寒及其變種沙門菌在2015年全年數(shù)量較多，對其中的51株鼠傷寒及其變種沙門菌進行PFGE和藥敏試驗，其PFGE聚類分析見圖1，藥敏聚類分析見圖2。

藥敏結(jié)果中黑色框代表耐藥，灰色框代表中度敏感，白色框代表敏感AMP為氨芐西林，SAM為氨芐青霉素/舒巴坦，TZP為哌拉西林，TAZ為哌拉西林/他唑巴坦，CFZ為頭孢唑林，CXM為頭孢呋辛，CTT為頭孢替坦，CAZ為頭孢他啶，CRO為頭孢曲松，CTX為頭孢噻肟，F(xiàn)EP為頭孢吡肟，ATM為氨曲南，IPM為亞胺培南，MEM為美羅培南，AMK為阿米卡星，GEN為慶大霉素，TOB為妥布霉素，CIP為環(huán)丙沙星，LEV為左氧氟沙星，F(xiàn)為呋喃妥因，SXT為復(fù)方新諾明，AMX為阿莫西林，TIC為替卡西林，CFR為頭孢氨芐，CEC為頭孢克羅，CMZ為頭孢美唑，F(xiàn)OX為頭孢西丁，OFLX為氧氟沙星，ETP為厄他培南，MXF為莫西沙星。

3討論

本研究感染沙門菌病例中，男女比例為1.52∶1（220/145），男性患者比女性多，與相關(guān)報道相符[7]。其中2/3以上的病例發(fā)生在3歲以下兒童，而1歲以內(nèi)兒童占比更達42.2%，提示兒童的免疫力弱，極易受到沙門菌的感染，由于全年樣品量低，尚不能說明年齡與沙門菌之間所存在的關(guān)系，但人群對沙門菌普遍易感，這與相關(guān)報道相符[8-9]，因此應(yīng)引起重視。沙門菌在5～11月檢出較多，這與本地區(qū)地處熱帶北緣，光照充足，熱量豐富，夏秋季氣溫高濕度大導(dǎo)致食物易受細菌污染有關(guān)。

血清分型中，365株沙門菌分成48個血清型，沙門菌前4位血清型構(gòu)成比從高到低為鼠傷寒變種沙門菌[I4，5，12：i：-]占比47.2%，斯坦利沙門菌占比11.2%，腸炎沙門菌占比10.7%，鼠傷寒沙門菌占比5.2%。鼠傷寒沙門菌及其變種共占比達52.4%，與省內(nèi)報道基本相同[10-11]。

鼠傷寒及其變種沙門菌檢出率在2015年占比最高，因此對同時做了PFGE和藥敏試驗的51株鼠傷寒及其變種沙門菌進行聚類分析。根據(jù)藥敏結(jié)果，將51株鼠傷寒及其變種沙門菌分成個24耐藥譜型。PFGE采用XbaⅠ酶切，將51株鼠傷寒及其變種沙門菌分成34個PFGE型，在分子水平上表現(xiàn)較大的遺傳多樣性。通過對PFGE圖譜和耐藥譜的對比，PFGE圖譜相同可有不同耐藥譜，反之亦然，推斷兩者之間沒有明顯的關(guān)聯(lián)[11]。

2009～2013年，珠三角某市某醫(yī)院未檢測到對亞胺培南耐藥的沙門菌菌株[12]。而在2015年的鼠傷寒沙門菌中發(fā)現(xiàn)有3株菌對亞胺培南中度敏感，表明鼠傷寒沙門菌對某些藥物逐漸產(chǎn)生耐藥，因此應(yīng)加強細菌的耐藥監(jiān)測[13]。

15304，15308兩個菌株均來源自同一患者，而糞便樣品相隔4 d采集，其分子分型、血清型和耐藥譜均完全相同，應(yīng)該是同一克隆的菌株，可說明第二次采樣時該患者體內(nèi)病原菌尚未清除完全，醫(yī)院需及時并有針對性地給患者用藥。

15144，15162，15164，15165這4個菌株來源不同的患者，年齡段在1歲以下，患者居住在不同的鎮(zhèn)區(qū)，采集時間均在7月份，并且在同一家醫(yī)院采集。該4株菌的PFGE型、血清型和耐藥譜均完全相同，為鼠傷寒沙門菌及其變種的優(yōu)勢PFGE型別，有可能是同一克隆的菌株，至于是否暴發(fā)或院內(nèi)感染，我們需對患者、可疑食品、居住地等環(huán)境標本中分離的沙門菌進行溯源分析。在今后工作中，還需不斷加大監(jiān)測力度，搜集更多菌株以充實數(shù)據(jù)庫，探索PFGE型別和耐藥譜的關(guān)聯(lián)性。同時我們也要認識到只有結(jié)合病原學(xué)和流行病學(xué)信息，才能更好地把握疾病傳播特點和發(fā)揮PFGE技術(shù)在疾病防控、突發(fā)公衛(wèi)事件/疫情處置中的作用[14-15]。

[參考文獻]

[1]朱超，許學(xué)斌.沙門菌屬血清型診斷[M].上海：同濟大學(xué)出版社，2009：1.

[2]毛雪丹，胡俊峰，劉秀梅.用文獻綜述法估計我國食源性非傷寒沙門氏菌病疾病負擔(dān)[J].中華疾病控制雜志，2011， 15（7）：622-625.

[3]Gunagydin E，Eyigor A，carli KT.A capillary polymerase chain reaction for Salmonella detection from poultry meat[J].Appl Microbiol，2007，44（1）：24-29.

[4]Garaizar J，López-Molina N，Laconcha I，et al.Suitability of PCR fingerprinting，infrequent restriction-site PCR and pulsed-fieldgel electrophoresis，combined with computerized gel analysis，in library typing of Salmonella enterica serovar enteritidis[J].Appl Environ Microbiol，2000，66（12）：5273-5281.endprint

[5]Clinical and Laboratory Standards Institute.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing[Z] .M100-S25，CLSI，2015：44-50.

[6]Ribot EM，F(xiàn)air MA，Gautom R，et al.Standardization of pulsedfield gel electrophoresis protocols for the subtyping of Escherichia coli O157：H7，Salmonella，and Shigella for PulseNet[J].Foodborne Pathog Dis，2006，3（1）：59-67.

[7]王愛民，何磊燕，許學(xué)斌，等.2010年夏季急性細菌感染性腹瀉患兒沙門菌感染分析[J].微生物與感染，2011，6（3）：139-143.

[8]譚南，汪偉山，林愛心.6417例感染性腹瀉患者沙門氏菌感染情況分析[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2014，35（15）：2049-2050.

[9]李志鋒，王文斟，王紅，等.2007年重慶市人群沙門菌監(jiān)測分析[J].疾病監(jiān)測，2009，24（5）：325-328.

[10]何冬梅，柯碧霞，鄧小玲，等.2010年廣東省沙門菌監(jiān)測及其病原學(xué)特征分析[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志.2012，46（5）：424-429.

[11]蘭海麗，馮雪琴，嚴海忠，等.綜合醫(yī)院非傷寒沙門菌感染腹瀉患者病原學(xué)分析[J].中國醫(yī)院感染學(xué)雜志，2014， 24（8）：1874-1876.

[12]楊曉華，譚南，林愛心.小兒沙門菌腸炎344例病原菌分布及藥敏試驗結(jié)果[J].中國感染與化療雜志，2014，14（2）：149-152.

[13]柯碧霞，何冬梅，譚海玲，等.廣東省2013-2014年食源性疾病主動監(jiān)測的病原學(xué)特征分析[J].中國流行病學(xué)雜志，2016，37（10）：1373-1378.

[14]楊毅，王超，巴特爾，等.沙門氏菌的PFGE分型和耐藥分析[J].醫(yī)學(xué)動物防制，2016，32（10）：1134-1136.

[15]趙嘉詠，黃麗莉，穆玉姣，等.2011-2013年河南省鼠傷寒沙門菌耐藥與分子分型研究[J].中國人獸共患病學(xué)報，2016，32（1）：56-60.

（收稿日期：2017-07-05 本文編輯：許俊琴）endprint