金蟬止癢顆粒質量標準分析與研究

賈琳　江龍

[摘要] 目的 對金蟬止癢顆粒建立質量標準。 方法 對金蟬止癢顆粒中梔子、苦參、黃柏藥材采用薄層色譜法進行鑒別；對鹽酸小檗堿、蛇床子素采用高效液相色譜法進行含量測定。 結果 薄層色譜專屬性強，分離度高，陰性對照無干擾；高效液相色譜法測得鹽酸小檗堿、蛇床子素分別在0.00648～0.1296 μg（r=0.9996）、0.0045～0.1125 μg（r=0.9996）范圍內進樣量與峰面積之間存在良好的線性關系，平均加樣回收率分別為99.16%、99.22%，RSD分別為1.21%、1.33%，測得含量分別為0.1135、0.0310 mg/g。 結論 該方法準確、簡便，能夠很好地對金蟬止癢顆粒進行質量控制。

[關鍵詞] 金蟬止癢顆粒；質量標準；梔子；苦參；黃柏；鹽酸小檗堿；蛇床子素

[中圖分類號] R961 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）08（a）-0042-05

[Abstract] Objective To establish the quality standard of Jinchanzhiyang Granules. Methods The contents of Gardenia jasminoides Ellis， Sophora flavescens， Phellodendron amurense Rupr. in Jinchanzhiyang Granules were identified by using thin layer chromatography （TLC） method. The contents of Berberine， Osthole were determined by high performance liquid chromatography （HPLC） method. Results TLC had strong specificity and high separation. Negative control without interference. The linear range was 0.00648-0.1296 μg for Berberine （r=0.9996） and 0.0045-0.1125 μg for Osthole （r=0.9996） respectively. The average recovery was 99.16% （RSD=1.21%）， 99.22% （RSD=1.33%） respectively. the content of Berberine and Osthol was 0.1135， 0.0310 mg/g respectively. Conclusion The method is accurate and simple， and can be used for the quality control of Jinchanzhiyang Granules.

[Key words] Jinchanzhiyang Granules； Quality standard； Gardenia jasminoides Ellis； Sophora flavescens； Phellodendron amurense Rupr.； Berberine； Osthole

金蟬止癢顆粒由金銀花、黃柏、蛇床子、梔子、苦參、黃芩等十六味中藥組成。適用于夏季皮炎，丘疹性蕁麻疹等皮膚瘙癢癥狀的治療，具有清熱解毒、燥濕止癢的功效。在其含量測定方面，未見高效液相色譜法同時測定鹽酸小檗堿、蛇床子素的報道。本文采用高效液相色譜法測定金蟬止癢顆粒中鹽酸小檗堿、蛇床子素的含量。結合薄層色譜法對組方中梔子、苦參、黃柏進行定性鑒別。進一步提高金蟬止癢顆粒的質量控制。

1 儀器與試藥

日本島津SCL-10AVP，LC-10ATVP高效液相色譜儀，Welchrom C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，Waters C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；KQ5200B超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司），TDD5m多管低速離心機（長沙平凡儀器儀表有限公司）。梔子苷、苦參對照品、鹽酸小檗堿、蛇床子素（均由中國食品藥品檢定研究院提供，批號分別為110749-200714、121019-200605、 110713-200911、110822-200407）。金蟬止癢顆粒（重慶希爾安藥業有限公司；規格：8 g/袋，批號：130102、130301、130401、130404）。試劑（成都科龍化工試劑廠）：乙腈、甲醇均為色譜純試劑，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 梔子的薄層色譜鑒別 供試品溶液：取樣品20 g，加水40 mL使溶解，用乙醚提取2次，每次20 mL，棄去乙醚液，水溶液用氫氧化鈉試液調pH值至8～9，用正丁醇提取3次，每次10 mL，合并提取液，每次用10 mL含量為0.1 mol/L氫氧化鈉溶液洗滌共2次，棄去洗滌液，蒸干正丁醇提取液，加甲醇1 mL使殘渣溶解。對照品溶液：取梔子苷對照品，加甲醇制成每毫升含2 mg的溶液。根據薄層色譜法[1]，將上述兩種溶液分別取10 μL，分別點在同一硅膠G薄層板上，正丁醇-醋酸-水（6∶2∶0.25）作為展開劑，展開，取出，晾干，用5%香草醛硫酸溶液噴霧，吹熱空氣[2-3]。相同顏色的斑點顯示在供試品與對照品色譜相應的位置上（圖1）。

2.1.2 黃柏的薄層色譜鑒別 供試品溶液：取樣品10 g，加水20 mL使溶解，加濃氨溶液0.3 mL，用氯仿提取3次，每次10 mL，將提取液蒸干，殘渣加1 mL甲醇溶解。對照品溶液：取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成含量為0.1 mg/L的溶液。根據薄層色譜法[1]，將上述兩種溶液分別取5 μL，分別點在同一硅膠G薄層板上，正丁醇-醋酸-水（6∶2∶0.25）作為展開劑，展開，取出，晾干，置UV光（波長365 nm）下檢視[4]。相同顏色的黃色熒光斑點顯示在供試品與對照品色譜相應的位置上（圖2）。endprint

2.1.3 苦參的薄層色譜鑒別 供試品溶液：取鑒別“2.1.2”項下的供試品溶液。對照藥材溶液：取苦參對照藥材0.5 g，加濃氨試液0.3 mL，氯仿25 mL，振搖提取4 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解[5]。根據薄層色譜法[1]，將上述兩種溶液分別取10 μL，分別點在同一硅膠G薄層板上，苯-丙酮-醋酸乙酯-濃氨試液（2∶3∶4∶0.2）作為展開劑，展開，取出，晾干，用稀碘化鉍鉀試液噴霧。相同顏色的橘黃色斑點顯示在供試品與對照藥材色譜相應的位置上（圖3）。

2.2 鹽酸小檗堿含量測定

2.2.1 高效液相色譜條件 Welchrom C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；流動相：甲醇-乙腈-水（50∶20∶30）（內含0.1%十二烷基磺酸鈉及0.1%磷酸溶液）；流速為1.0 mL/min，檢測波長為265 nm，柱溫為32℃。

2.2.2 溶液的制備 對照品溶液：將鹽酸小檗堿對照品精密稱取適量置50 mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解，恒定體積（0.00648 mg/mL）。供試品溶液：精密稱取樣品約2 g置錐形瓶中，精密加入含量60%甲醇50 mL，稱重，超聲波處理30 min（不低于200 W），取出，放冷，用60%甲醇補足減失的重量，搖勻，高速離心（10 000 r/min）10 min，上清液用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續濾液[6-7]。

2.2.3 專屬性試驗 取缺黃柏的陰性樣品約2 g，陰性供試品溶液按“2.2.2”項方法制備。在“2.2.1”項下色譜條件測定，陰性樣品色譜圖中無相應特征峰，方法專屬性良好[8]。鹽酸小檗堿分離度>1.5，拖尾因子在0.95～1.05之間，理論塔板數不低于5000，滿足定量分析要求（圖4）。

2.2.4 線性關系考察 吸取對照品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件，分別進樣1、5、10、15、20 μL，記錄色譜圖。以進樣量X（μg）為橫坐標，峰面積Y（mAU·min）為縱坐標，進行線性回歸。結果鹽酸小檗堿進樣量在0.00648～0.1296 μg范圍內與峰面積之間線性關系良好[9-10]。回歸方程為Y=2495021.87X-7705.76，r=0.9999（n=7）。

2.2.5 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液，每次10 μL，按“2.2.1”項下色譜條件，重復進樣6次，測得峰面積分別為250583、252411、249662、251269、248975、 251351，RSD為0.50% 。

2.2.6 穩定性試驗 取同一供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件，在室溫下放置0、3、5、7、9、12 h，每次進樣10 μL，測得鹽酸小檗堿峰面積分別為256874、258340、269465、253215、265422，RSD為2.54%，說明在12 h內供試品溶液基本穩定。

2.2.7 重復性試驗 精密稱取同一批號（批號：130403）樣品6份，供試品溶液按照“2.2.2”項下方法制備，在“2.2.1”項下色譜條件依法測定，記錄峰面積，測得鹽酸小檗堿含量分別為0.1447、0.1508、0.1469、0.1483、0.1434、0.1468 mg/g，RSD為1.78%。

2.2.8 回收率試驗 精密稱取同一批號（批號：130403）已知含量樣品9份，分成3組，每組分別添加低、中、高濃度鹽酸小檗堿對照品，供試品溶液按照“2.2.2”項下方法制備，在“2.2.1”項色譜條件下依法測定，記錄峰面積，計算回收率[11]，結果見表1。

2.2.9 含量測定 供試品溶液按“2.2.2”項下方法制備，在“2.2.1”項下色譜條件，對3批金蟬止癢顆粒樣品測定分析，根據峰面積計算每批樣品中鹽酸小檗堿含量分別為0.1077、0.1312、0.1016 mg/g，即測得鹽酸小檗堿含量為0.1135 mg/g。

2.3 蛇床子素含量測定

2.3.1 高效液相色譜條件 Waters C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；流動相：乙腈-水（49∶51）；流速為1.0 mL/min，檢測波長為322 nm，柱溫為25℃。

2.3.2 溶液的制備 對照品溶液：將蛇床子素對照品精密稱定0.0045 g至100 mL棕色量瓶，加甲醇稀釋至刻度（0.045 mg/mL）。供試品溶液：取樣品約2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入無水乙醇25 mL，超聲提取30 min（不低于200 W），過濾，濾液揮干，加甲醇5 mL，完全溶解，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過[12-13]，取續濾液。

2.3.3 專屬性試驗 取缺蛇床子的陰性樣品約2 g，陰性供試品溶液按“2.3.2”項方法制備，在“2.3.1”項下色譜條件測定，陰性樣品色譜圖中無相應特征峰，方法專屬性良好。蛇床子素分離度>1.5，拖尾因子在0.95～1.05之間，理論塔板數不低于4000，滿足定量分析要求（圖5）。

2.3.4 線性關系考察 吸取對照品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件，分別進樣1、5、10、15、20 μL，記錄色譜圖。以進樣量X（μg）為橫坐標，峰面積Y（mAU·min）為縱坐標，進行線性回歸。結果蛇床子素進樣量在0.0045～0.1125 μg范圍內與峰面積線性關系良好[14]。回歸方程為Y=22956.74X-8165.36，r=0.9999（n=7）。

2.3.5 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液，每次10 μL，按“2.3.1”項下色譜條件，重復進樣6次，測得峰面積分別為503945、506527、505570、504399、504268、 501947，RSD為0.31%。

2.3.6 穩定性試驗 取同一供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件，在室溫下放置0、3、5、7、9、12 h，每次進樣10 μL，測得蛇床子素峰面積分別為452087、456390、454766、455378、455065、453786，RSD為0.33%。說明在12 h內供試品溶液基本穩定。endprint

2.3.7 重復性試驗 精密稱取同一批號（批號：130403）樣品6份，供試品溶液按照“2.3.2”項下方法制備，在“2.3.1”項下色譜條件依法測定，記錄峰面積，測得蛇床子素分別為0.0319、0.0306、0.0299、0.0286、0.0311、0.0304 mg/g，RSD為3.67%。

2.3.8 回收率試驗 精密稱取同一批號（批號：130403）已知含量樣品9份，分成3組，每組分別添加低、中、高濃度蛇床子素對照品，供試品溶液按“2.3.2”項下方法制備，在“2.3.1”項下色譜條件依法測定，記錄峰面積，計算回收率[15]。結果見表2。

2.3.9 含量測定 供試品溶液按“2.3.2”項下方法制備，在“2.3.1”項下色譜條件，對3批金蟬止癢顆粒樣品測定分析，根據峰面積計算每批樣品中蛇床子素含量分別為0.0313、0.0299、0.0319 mg/g，即測得蛇床子素含量為0.0310 mg/g。

3 討論

鹽酸小檗堿在標準方法色譜條件下的峰型存在拖尾現象[16-17]。鹽酸小檗堿作為堿性季銨型類生物堿，通過調節流動相中水相和有機相的比例，并加入緩沖溶液在流動相中，可以解決峰型拖尾問題；故本試驗調整流動相為：甲醇-乙腈-水（50∶20∶30）（內含0.1%十二烷基磺酸鈉及0.1%磷酸溶液）；配合色譜柱、柱溫、流速等條件，鹽酸小檗堿的峰型較好，其理論塔板數和分離度均良好。

本試驗對蛇床子素在200～400 nm進行全掃描，在203、322 nm波長處蛇床子素有較強的紫外吸收，經比較采用322 nm時，雜質峰數量較少，基線較好，對測定無干擾，故選用322 nm作為檢測波長。有文獻[18]報道，蛇床子素見光易分解，其分解速度在避光保存的情況下顯著減慢，因此本試驗的樣品在試驗前臨時處理，并對蛇床子素采用避光操作。

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（收稿日期：2017-04-25 本文編輯：李亞聰）endprint