妊娠合并糖尿病與母胎缺氧誘導因子HIF-1α的關系

連亞婉吳青顏建英

1.福建省惠安縣醫院婦產科 362100；2.福建省立醫院婦產科 350001；3.福建省婦幼保健院婦產科 350001

妊娠合并糖尿病與母胎缺氧誘導因子HIF-1α的關系

連亞婉1吳青2顏建英3*

1.福建省惠安縣醫院婦產科 362100；2.福建省立醫院婦產科 350001；3.福建省婦幼保健院婦產科 350001

目的：探討母血清HIF-1α、胎盤HIF-1α mRNA與妊娠合并糖尿病血糖控制情況的關系。方法：收集37ˉ40周孕產婦共75人，其中糖尿病合并妊娠組（n=15人），妊娠期糖尿病組（n=30人）和正常妊娠孕婦（n=30人），ELISA方法測定母血清HIF-1 α，RT-PCR法檢測胎盤HIF-1α mRNA水平。結果：3組患者年齡、孕周的比較無統計學差異。糖尿病合并妊娠組血清HIF-1α、胎盤HIF-1α mRNA為78.42±11.85pg/L、0.43±0.12，明顯大于妊娠期糖尿病組（58.68±18.10 pg/L，P=0.000、0.23±0.06，P=0.000）和正常糖耐量組（47.96±12.79 pg/L，P=0.000、0.19±0.08，P=0.000）。妊娠期糖尿病組血清HIF-1α、胎盤HIF-1α mRNA大于正常妊娠組，P值分別為0.01、0.021，差異有統計學意義。結論：糖尿病合并妊娠組血糖控制差，血清HIF-1α、胎盤HIF-1α mRNA最高，母血清HIF-1α能反映妊娠合并糖尿病的嚴重程度。

糖尿病合并妊娠；妊娠期糖尿病；缺氧誘導因子

妊娠合并糖尿病，包括糖尿病合并妊娠（Pregestational diabetes mellitus，PGDM）和妊娠期糖尿病（Gestational diabetes mellitus，GDM），前者為已有糖尿病的患者妊娠，而妊娠期糖尿病是指在妊娠期首次發生或發現的對葡萄糖的不耐受，其特征為高血糖，對母兒的危害程度與血糖水平密切相關[1]。

高血糖導致葡萄糖氧化及氧耗增加，進而導致胎兒體內血氧消耗過度而缺氧[2]。缺氧誘導因子（hypoxia inducible factor，HIF）是統屬bHLH.PAS家族，分為HIF-1、HIF-2、HIF-3，HIF-1是當前唯一發現在特異性缺氧狀態下發揮活性的敏感的轉錄因子，它與靶基因結合，如促紅細胞生成素、血管內皮生長因子、血紅素加氧酶-1等基因，通過促進靶基因轉錄，參與機體對缺氧的反應，引起多種病理生理反應[3，4]。

本文旨在研究母血清HIF-1α、胎盤HIF-1α mRNA與妊娠合并糖尿病血糖控制情況的關系，初探母血清HIF-1α能否反映妊娠合并糖尿病的嚴重程度，并為妊娠合并糖尿病的機制研究做鋪墊。

1.資料與方法

1.1 收集2014年6月至2015年3月到惠安縣醫院婦產科、福建

省立醫院婦產科就診的 37～40周孕產婦。所有研究對象孕周計算無誤。分組如下：

A組：糖尿病合并妊娠組（n=15人），孕前或早孕期診斷糖尿病，孕期未監控血糖者或者血糖控制不良者。

B組：妊娠期糖尿病組（n=30人），孕24-28周，糖耐量試驗診斷妊娠期糖尿病的患者；孕期嚴格監控血糖，血糖控制良好者。C組：正常妊娠孕婦（n=30人），正常糖耐量組。

1.2 納入標準和排除標準

①全部對象都是單胎自然妊娠。

②妊娠期糖尿病、糖尿病合并妊娠的診斷必須符合標準。糖尿病合并妊娠的診斷：早孕期或孕前行FPG檢查，禁食8-12小時，最后查空腹血糖如FPG≥7.0 mmol/L，或HbA1C≥6.5，或任意血糖≥11.1mmol/L，且有糖尿病癥狀。妊娠期糖尿病的診斷：孕24-28周，禁食8-12小時，次日晨在5分鐘內口服75 g葡萄糖，OGTT診斷界值為空腹、服糖后1h和2h的血糖值分別為5.1mmol/L，10.0mmol/L和8.5mmol/L。

③入院患者簽署知情同意書，遵循知情和自愿的原則。

④排除孕婦同時存在妊娠期或分娩期的并發癥，例如前置胎盤、胎盤早剝、胎兒窘迫等疾病。

⑤排除孕婦同時合并有外科的或內科其他疾病，如原發性高血壓、心臟病、腎炎、肝炎、貧血等。

1.3 血糖控制的評價

①血糖控制良好標準：孕28周以后監測血糖輪廓（三餐后2小時、睡前），血糖正常次數達 80%以上血糖控制標準：餐前血糖＜5.6mmol/L，餐后2小時血糖＜6.7mmol/L。

②血糖控制不良標準：在孕28周以后每周血糖輪廓（三餐后2小時、睡前）正常次數少于 80%；或孕期未監測血糖，入院時查監測血糖正常次數少于80%。

1.4 實驗方法

①血清 HIF-1α檢測 所有患者均于清晨空腹抽取外周靜脈血5ml，3000r/min，離心5min，取上層血清于試管中，-70℃保存。采用ELISA方法測定母血清 HIF-1α，試劑盒購自北京中杉金橋生物工程有限公司，嚴格按操作說明書測定。

②胎盤 HIF-1α mRNA檢測 從胎盤母體面臍帶對側取約100mg胎盤組織，采用RNA抽提及逆轉錄試劑盒（Invitrogen，USA），并且檢測RNA的完整性及純度。構建熒光PCR反應體系25μL，含2×Power SYBR? Green PCR Master Mix 12.5μL、上游引物 F（10pmol/ μL）0.5μL、下游引物 R（10pmol/μL）0.5μL（和HIF-1α引物：5 ’ CCATTAGAAAGCAGTTCCGC3 ’ ， 5 ’TGGGTAGGAGATGGAGATGC3’；產物194bp；β-actin引物：5’TTCCAGCCTTCCTTCCTGG3’，5’TTGCGCTCAGGAGGAGCAAT3’產物224 bp）（引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成）、cDNA模板2μL、ddH2O 9.5μL。反應條件為：95℃3分鐘，然后 94℃50秒，55℃45 秒，72℃1分鐘共 45 循環。采用BIO-RAD全定量PCR儀檢測。以β-actin基因作為內參照，分析各反應的熒光強度得出CT值，并繪制β-actin 基因的標準曲線，參照標準曲線，得出目的基因的相對反應起始拷貝數。陰性對照以蒸餾水加入擴增體系，以β-actin基因作為內參照進行 PCR，用分析各反應的熒光強度得出CT值，并繪制 β-actin基因的標準曲線，得出目的基因的相對反應起始拷貝數。

1.5 統計學方法

應用 SPSS統計軟件，正態分布數據以 x ± s表示，糖尿病合并妊娠組、妊娠期糖尿病組和正常糖耐量組兩兩比較用兩獨立樣本的t檢驗，P ＜ 0.05為差異有統計學意義

2.結果

3組患者年齡、孕周的比較無統計學差異，P＞0.05。糖尿病合并妊娠組血清HIF-1α、胎盤HIF-1α mRNA為78.42±11.85pg/L、0.43±0.12，明顯大于妊娠期糖尿病組（58.68±18.10 pg/L，P=0.000、0.23±0.06，P=0.000）和正常糖耐量組（47.96±12.79 pg/L，P=0.000、0.19±0.08，P=0.000）。妊娠期糖尿病組血清 HIF-1α、胎盤 HIF-1 α mRNA大于正常糖耐量組，P值分別為0.01、0.021，差異有統計學意義。見表1。

表1 3組一般資料及血清HIF-1α、胎盤HIF-1α mRNA的比較

3.討論

妊娠期糖尿病孕婦發生死胎風險是正常孕婦的 4-6倍，新生兒死亡的風險是正常孕婦的 2-4倍。大多數圍生兒死亡的原因不明，臨床及實驗研究均認為高胰島素、高血糖導致胎兒宮內缺氧，可能是妊娠期糖尿病不良圍生結局的原因[5，6]。

對于宮內缺氧狀況的評估有多種方法，胎盤組織缺氧病理改變、EPO、HIF-1α，VEGF等均被認為是胎盤胎兒宮內缺氧的標志物或方法，但是沒有統一的金標準。缺氧誘導因子（hypoxia inducible factor，HIF）是統屬 bHLH.PAS家族，根據不同的亞單位結構分為HIF-1、HIF-2、HIF-3，目前 HIF-1是國內外研究的熱點。HIF-1是當前唯一發現在特異性缺氧狀態下發揮活性的敏感的轉錄因子，因此其較EPO具有更高的研究價值；其廣泛表達于哺乳動物及人體各種組織細胞，妊娠期滋養細胞和胎盤也存在 HIF-1表達和分泌。HIF-1由α亞基和β亞基組成，HIF-1α是主要活性調節因子，它與靶基因結合，如促紅細胞生成素（EPO）、血管內皮生長因子（VEGF）、血紅素加氧酶（HO）-1等基因，通過促進靶基因轉錄，參與機體對缺氧的反應，引起多種病理生理反應[3，4]。

HIF-1作為轉錄因子，調控多種基因的表達，進而參與多項生理過程包括EPO的生成、鐵轉運、血管生成（VEGF的表達）和糖代謝等等，HIF是胚胎發育的重要調控因子。妊娠期母體高血糖狀態導致氧耗增加，胎兒高血糖、高胰島素狀態，使葡萄糖氧化代謝增多，ROS相應增多，進而觸發HIF的產生[7，8]。所以，高血糖、高胰島素血癥導致缺氧狀態，進而對胎兒產生一系列圍生期的多臟器影響，而HIF可能是這些病理生理改變的重要路徑。

本實驗糖尿病合并妊娠組血清 HIF-1α、胎盤 HIF-1α mRNA為明顯大于妊娠期糖尿病組和正常糖耐量組。妊娠期糖尿病組血清HIF-1α、胎盤 HIF-1α mRNA大于正常糖耐量組，且差異有統計學意義。可見糖尿病合并妊娠組血糖控制最差，其血清HIF-1α、胎盤HIF-1α mRNA最高，母血清HIF-1α能反映妊娠合并糖尿病的嚴重程度，且與胎盤HIF-1α mRNA具有較好的一致性。

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1672-5018（2017）02-017-2