鹽酸法舒地爾注射液細菌內毒素的方法學驗證

劉麗英程延慶

1.哈爾濱樂泰藥業有限公司 150000；2.哈爾濱弗曼德生物科技有限公司 150000

鹽酸法舒地爾注射液細菌內毒素的方法學驗證

劉麗英1程延慶2

1.哈爾濱樂泰藥業有限公司 150000；2.哈爾濱弗曼德生物科技有限公司 150000

為了保證鹽酸法舒地爾注射液相應細菌內毒素試驗檢測方法具有良好的專屬性以及靈敏性，并且確保相應的檢測結果能夠具有較高的質量標準依據，特此進行了相關實驗研究。

鹽酸法；細菌；舒地爾注射液；肉毒素

1.實驗材料

鱟試劑：湛江市安度斯生物有限公司生產，批號1005240，規格5ml。

細菌內毒素相應檢查用水：批號201070，效價120EU/支，中國藥品生物制品檢定所生產。

供試品：自制，批號 20110301、20110302、20110303，規格：2ml：30mg。

旋渦混合器：XW-80A型，廠家：上海醫大儀器廠。

電熱恒溫水浴鍋：DK-98-Z型，廠家：天津泰斯特儀器有限公司。

2.靈敏度復核

在進行實驗的過程中要充分的重視相關操作規范，首先需要把細菌內毒素的相關檢查水當做溶劑，對細菌內毒素的相關工作標準品進行相應的溶解操作，在這個過程中為了能夠保證這一操作能夠具有良好的效果，還需要實驗人員能夠進行相應的搖勻操作，使得實驗藥品和實驗溶解劑能夠完全的融合，在完成了這一操作的基礎之后還需要實驗人員將這些藥劑制成2.0λ規格、1.0λ規格、0.5λ規格、0.25λ規格的細菌內毒素相關的工作標準規格的溶液，在實驗室各種實驗設備全面的情況下，每次在進行稀釋的過程中還需要將溶液放置到漩渦混合器上面進行混合操作，并且還要保證儀器的使用時間在三十秒以上。在后續的施工之中也要充分的遵照各環節的操作規范，一般情況下在使用細菌內毒素相應的檢查水作為溶劑，對內毒素進行相應稀釋操作的時候會采用以下的稀釋流程：120EU+1ml水—→120EU/ml—→2EU/ml—→1.0EU/ml（4λ）—→0.5EU/ml—→0.25EU/ml—→0.125EU/ml—→0.0625EU/ml

為了使實驗的結果能夠具有較強的說服力以及科學性，本次實驗在進行檢驗的過程中采用對照試驗的實驗方式，并且同時設置了四組對照實驗組，在每個實驗室管之都放滴入了零點一毫升的內毒素標準規格的溶液。與此同時，還要使用內毒素相應的檢查水制作出兩支陰性的對照試驗試試管。為了保證藥品能夠完全的融合，還需要在完成融合之后，將試管進行輕微的搖晃混勻。另外，還需要在試管的端口處使用相應的封口材料對試管口進行封口操作，之后將處理完畢的試管以垂直的角度，逐漸的放入到水溫為三十六攝氏度到三十八攝氏度之間的溫水中，維持這一溫度狀態五十八攝氏度到六十二攝氏度之間之后進行相應的觀察工作，實驗的詳細結果記錄如表.

表1 鱟試劑靈敏度復核結果（0.25EU/ml）

結果：根據公式λc=lg-1（∑X/4），計算出λc=0.210 EU/ml，λ c在0.5λ～2.0λ范圍內。因此該批號的鱟試劑靈敏度符合要求。

表2 鱟試劑靈敏度復核結果（0.125EU/ml）

結果：根據公式λc=lg-1（∑X/4），計算出λc=0.105 EU/ml。λ c在0.5λ～2.0λ范圍內。

3.限度的確定

采用公式 L＝K/M（M：以成人每公斤體重每小時給藥的最大劑量來計算），本品為注射劑，根據用法用量，成人一日2～3次，每次30mg，以 50～100ml的生理鹽水或葡萄糖注射液稀釋后靜脈滴注，每次靜滴時間約為30分鐘，注射時間不足1小時，按1小時計算。

按最大靜滴量100ml/小時計算，中國人平均體重60kg計算，則M＝100÷60÷1=1.67ml/kg/h，故本品的細菌內毒素的理論限值：L＝5÷1.67=3 Eu/ml。

4.預干擾試驗

4.1 供試品溶液的制備

以鱟試劑靈敏度0.125Eu/ml為基準，按MVD＝LC/λ＝0.5/0.125＝4倍（C按1.0ml/ml計算），當靈敏度為λ=0.25EU/ml時，供試品溶液的最大稀釋倍數為：2倍。

4.2 含供試品及內毒素混合溶液的制備

鱟試劑靈敏度為 0.25EU/ml：取供試品溶液 0.1ml與 1.0 EU/ml內毒素溶液0.1ml以1：1比例混合；依此方法依次制成供試品稀釋倍數為1、2、4、8分別與1.0EU/ml內毒素1：1的混合溶液作為供試品陽性對照溶液。

鱟試劑靈敏度為0.125EU/ml：取供試品溶液0.1ml與0.5 EU/ml內毒素溶液0.1ml以1：1比例混合；依此方法依次制成供試品稀釋倍數為1、2、4、8分別與0.5EU/ml內毒素1：1的混合溶液作為供試品陽性對照溶液。

5.干擾實驗的分析研究

為了保證對干擾實驗的相關研究的準確性，本次試驗采用二零一零年版本的中國藥典記錄中附錄所記載的實驗方式，對細菌內毒素相應的檢查法實施了干擾實驗。選λ=0.125EU/ml和λ=0.25EU/ml鱟試劑。將細菌內毒素工作標準品分別用細菌內毒素檢查用水稀釋至4λ、2λ、1λ、0.5λ內毒素標準對照溶液（Es）。分取細菌內毒素系列濃度分別與供試品溶液（稀釋倍數分別為4倍、2倍）按1：1的比例混合制成 2λ、1λ、0.5λ、0.25λ的含內毒素的供試品溶液（Et），并同時進行陰性對照及陽性對照，37℃±1℃保溫1小時，結果見表3以及表4。

供試品稀釋過程：1支供試品（2ml：30mg）—→15mg/ml—→7.5mg/ml

內毒素溶液的稀釋濃度：120EU+1ml水—→120 EU/ml—→2.0EU/ml—→1.0EU/ml—→0.5EU/ml—→0.25EU/ml—→0.125EU/ml

表3 干擾試驗結果（鱟試劑：湛江安度斯生物制品廠0.125EU/ml）

結果：ES在 0.5λ-2λ范圍內，且 Et也在 0.5ES-2λES之間，說明供試品稀釋4倍對檢測沒有干擾。

表4 干擾試驗結果（鱟試劑：湛江安度斯生物制品廠0.25EU/ml）

結果：ES在 0.5λ-2λ范圍內，且 Et也在 0.5ES-2λES之間，說明供試品稀釋2倍對檢測沒有干擾。

6.樣品的檢查

依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄XI E），觀察并記錄結果，結果見表5

表5 三批樣品細菌內毒素測定結果

7.結束語

本次實驗數據研究結果能夠看出，本品的細菌內毒素試驗檢測方法具有良好的專屬性以及靈敏性，因此本法可作為鹽酸法舒地爾注射液細菌內毒素的檢測方法。

[1] 孫菊元，顧炳仁.細菌內毒素檢查法檢測注射用鹽酸大觀霉素中細菌內毒素的研究[J].海峽藥學.1999（04）

[2] 張燦，劉文君，張明露，田芳，楊毅，安代志.水中細菌內毒素污染特性及檢測方法研究進展[J].環境科學.2014（04）

[3] 吳鑫，吳向群，周志良，朱碧君.鹽酸異丙嗪注射液細菌內毒素檢驗[J].齊魯藥事.2012（05）

R111.3

A

1672-5018（2017）02-020-1