大孔樹脂結合蛋白純化對金銀花化學成分研究的可行性分析

黃廣君，梁錦添

(1.南寧學院 機電與質量技術工程學院，廣西 南寧 530200；2.廣西大學 生命與科學技術學院，廣西 南寧 530004)

大孔樹脂結合蛋白純化對金銀花化學成分研究的可行性分析

黃廣君1*，梁錦添2

(1.南寧學院 機電與質量技術工程學院，廣西 南寧 530200；2.廣西大學 生命與科學技術學院，廣西 南寧 530004)

在對金銀花研究現狀和價值進行剖析的基礎上，提出以大孔樹脂結合蛋白純化技術，探索分離純化金銀花中綠原酸的工藝條件，并給出了綠原酸提取工藝流程圖。通過對金銀花化學成分及藥理價值研究的不斷深入，對增加金銀花的附加值，促進當地村民脫貧致富的步伐以及地方經濟發展具有重要的現實意義和市場應用價值。

金銀花；大孔樹脂；提取工藝

2010年新版《中華人民共和國藥典》中對金銀花和山銀花進行了明確區分。按照2010版藥典規范，“忍冬科灰氈毛忍冬、紅腺忍冬、華南忍冬或黃褐毛忍冬的干燥花蕾或帶初開的花”被稱為山銀花。只有忍冬科植物忍冬的花才能稱金銀花，山銀花不能入藥[1]。

然而，市場上受利益驅使，仍有部分不法分子和“黑心”商戶以次充好，以山銀花代替金銀花，有的是在金銀花里面添加了山銀花。如在2013年上半年，廣西醫藥食品行業風波不斷的兩起事件：首先，廣藥集團子公司廣西盈康藥業的供應商廣東寶山堂制藥有限公司，硫磺熏制山銀花枝葉入藥事件被曝光；隨后，涼茶行業人士披露，采用山銀花代替金銀花實際上是涼茶行業中通行的慣例。這是因為金銀花的價格出現一路飆升的狀態，而且一直居高不下，相比金銀花來說，山銀花的產量較多，價錢也十分便宜，很多不法廠家和商販正是看重了這其中的巨大利潤，在售藥品時用山銀花代替金銀花，但兩者之間的差異使得它們入藥后的藥效有很大的差別[2-3]。

1 金銀花的研究價值剖析

金銀花集觀賞、藥用、保健、經濟和生態價值于一身，市場對于金銀花的需求不斷加大，科研人員對金銀花的研究范疇也不斷擴大，農業人口特別是貧困山區人民更是將金銀花種植及加工產業作為改善家庭及區域經濟條件的主要經濟樹種，但由于各種原因的影響，在金銀花的生產加工中仍存在如下問題：①產品加工水平低下：金銀花加工農戶以家庭作坊式的手工生產為主，加工方法原始，加工水平低下；②質量難保證：金銀花加工人員大多是種植農民，這部分人對金銀花生產加工專業知識知之甚少，加上文化水平有限，他們只能從事簡單操作加工，產品質量很難保證；③種植方式不科學，繁殖主要采用種子播種和枝條扦插繁殖，不僅種子萌發率和枝條成活率低，且易攜帶病毒細菌，引起金銀花生產性能下降、生長不良、有效成分積累減少、植株及產品品質降低。

金銀花的植物有多種，均來源于忍冬科忍冬屬的不同植物，目前國內的主栽品種為忍冬與灰氈毛忍冬。長期從事金銀花研究的王冶教授認為，忍冬的主要化學成份之一木犀草苷能顯著提高活性氧自由基水平，而灰氈毛忍冬中綠原酸含量高，能顯著清除體內自由基，這就意味著金銀花的藥材道地性若干年后有可能要發生變化，意即南方的忍冬將成為金銀花的道地藥材。對金銀花的研究藥理活性成分的提取分離與結構鑒定具有較高的理論科研價值和市場應用價值。

2 國內外研究現狀

國內外研究人員在對金銀花中活性成分進行研究的基礎上，開展以金銀花為主要原料的日用品、保健食品研究[4-6]，歐洲已有把金銀花的主要活性成分綠原酸用于防止頭發損傷的染發劑和洗發液的專利產品，日本同樣利用綠原酸奇跡衍生物的抗氧化特性研制出了抗衰老的護膚用品。綠原酸在某些食品中取代或部分取代目前常用的人工合成的抗氧化劑；Hirazawa等人將綠原酸用于魚片的保鮮[7]，其效果要優于茶葉提取物和 a-生育酸；添加了綠原酸的保健藥品具有清熱解毒養顏潤膚、解除煙酒過多等特點；德國 E.Eich 教授在研究有些植物次生代謝物作為抗逆轉錄病毒劑時，認為綠原酸是最有希望成為抗艾滋病毒(HIV)的先導化合物[8]，同時病毒敏感性試驗表明：金銀花醇提取液、水提取液、水超聲提取液均能顯著增強體外細胞抗腺病毒感染的能力，其中醇提取物抗病毒感染能力最強；體外實驗表明，花和藤均對多種致病菌如金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌等均有一定抑制作用，對肺炎球菌、腦膜炎雙球菌、綠膿桿菌，結核桿菌亦有效。水浸劑比煎劑作用強，葉煎劑比花煎劑作用強。若和連翹合用，抗菌范圍還可互補；與青霉素合用，能加強青霉素對耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌作用，這可能是在抑制細菌體內蛋白質合成上有協同的作用。

國內雖對綠原酸的提取工藝有研究，但工藝過程繁瑣，產率低，作為醫藥中間體食品添加劑綠原酸市售價格1500～2000元/kg，一定程度上阻礙了其在藥品、保健品、花卉、飼料、化妝品和食品等行業的廣泛應用[9-12]。因此通過對提取工藝、大孔樹脂型號、洗滌溶劑、萃取條件進行研究，篩選獲得新的提純工藝，提高綠原酸純度及產量，以適合工業化大生產是非常必要而且可行的。

3 金銀花研究關鍵點

采用高效液相色譜法分離測定金銀花中活性成分-綠原酸、異綠原酸、黃酮含量，探索樣品中綠原酸、黃酮提取分離及定量條件；采用原子吸收光譜法測定金銀花中主要微量元素，探索樣品消化及測定條件；

以綠原酸為目標成分，對金銀花的提取純化工藝進行優化，對提取工藝、大孔樹脂型號、洗滌溶劑、萃取條件進行研究，篩選獲得新的提純工藝，提高綠原酸純度及產量，以適合工業化大生產；

對綠原酸進行抑菌特性研究，研究其對金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌等抑制作用。

深入調查廣西地區金銀花的生產、深加工現狀，初步探討與地方政府、企業合作進行集金銀花種植、培育、收購、有效成分提取、深加工、銷售一體化經營模式，促進生態文明建設，將科技成果進一步轉化為生產力的可行性研究。

以大孔樹脂結合蛋白純化技術，探索分離純化金銀花中綠原酸的工藝條件，大孔樹脂結合蛋白純化技術分離純化金銀花中綠原酸的工藝未見報導。擬解決的關鍵科學問題：金銀花中微量元素的消化條件，確定主要實驗參數；優化金銀花中綠原酸的提取純化條件，摸索利用大孔樹脂純化綠原酸的工藝；確定金銀花中綠原酸類物質的抑菌特性及規律。

圖1 綠原酸提取工藝流程圖

4 可行性分析

近年金銀花的市場行情穩步上升，市場上出現了越來越多的金銀花產品，主要集中在藥品產業、保健品產業、花卉產業、飼料產業、化妝品產業和食品產業等六個方面。對金銀花化學成分及藥理價值研究的不斷深入，對增加金銀花的附加值，促進當地村民脫貧致富的步伐以及地方經濟發展具有重要的現實意義和市場應用價值。

[1] 方利娟. 藥用植物金銀花的研究現狀與發展趨勢探討[J].寧夏農林科技，2013，54 (5)：27-28，114.

[2] 徐 永.金銀花與山銀花的鑒別[J].中醫中藥，2013(5)：173.

[3] 陳雅文. 淺談金銀花的化學成分、藥理作用和實用價值中藥研究[J].中國民間療法,2013,21(5):70-71.

[4] 李 捷. 綠原酸抗病毒研究進展[J].畜牧獸醫科技信息,2013(4):6-7.

[5] 杜延兵，慕鴻雁,何忠寶，等. D101大孔吸附樹脂純化葵花籽粕綠原酸研究[J]. 糧食與油脂，2013，26(6)：50-52.

[6] 羅世江，陸崢琳，黃瑞松，等.壯藥水銀花中綠原酸含量測定方法的建立[J].廣西醫學，2013，35(5)：541.

[7] Wang G F.Anti-hepatitis B virus activity of chloro-genic acid，quinic acid and cafeic acid in vivo and in vitro[J].Antiviral Res,2009,83(2)：186-190.

[8] Keiko Ikeda,Kazuko Tsujimoto,Misao Uozaki,et al.Inhibition of multiplication of hepes simplex virus by cafeic acid[J].International J Molecular medicine,2011,28(4):595-598.

[9] 程 瑞，王 燕.金銀花的生物學功能及其在畜牧獸醫上的應用前景[J].廣東飼料，2013，23(3)：42-44.

[10] 王蔚新，祝艷梅.桑葉金銀花復合保健飲料的研制[J].食品研究與開發,2013,34 (7)：65.

[11] 王迎菊，王 凱，梁文紅.金銀花在口腔醫學中的應用[J].中國醫藥指南，2013，11(14)：68-71.

[12] 魯 斌，林 冰.金銀花口含片制備工藝及藥效研究[J].山地農業生物學報，2013,32(2)：150-152.

(本文文獻格式：黃廣君，梁錦添.大孔樹脂結合蛋白純化對金銀花化學成分研究的可行性分析[J].山東化工,2017,46(11):76-77,79.)

Feasibility Analysis of Chemical Constituents of Honeysuckle by Macroporous Resin-binding Protein Purification

HuangGuangjun1*,LiangJintian2

(1.School of Mechanical-Electronic and Quality Engineering,Nanning University,Nanning 530200,China; 2.College of Life Science and Technology,Guangxi University,Nanning 530004,China)

Based on the analysis of the present situation and the value of honeysuckle,the technological conditions of separation and purification of chlorogenic acid from honeysuckle were explored by macroporous resin binding protein purification technology,and the chlorogenic acid extraction process flow chart was given. Through the deepening of the research on the chemical composition and pharmacological value of honeysuckle,it has important practical significance and market application value to increase the added value of honeysuckle,to promote the pace of local villagers' poverty alleviation and local economic development.

honeysuckle; macroporous resin; extracting technology

2016-12-01

南寧學院2013年度校級教授培育工程項目(2013JSGC-7)；南寧學院教學質量與教學改革工程項目(2014XJZDZY05)

黃廣君(1982—)，碩士，講師，研究方向：天然產物化學。

R284.2

A

1008-021X(2017)11-0076-02