肺癌組織標本庫的創建與管理

劉得水，岳麗玲，陳德慶，李祖彬，鮑紅光，溫憲春，劉吉成

1.齊齊哈爾醫學院，黑龍江齊齊哈爾 161006；2.齊齊哈爾市第一醫院，黑龍江齊齊哈爾 161005；3.齊齊哈爾醫學院附屬第三醫院，黑龍江齊齊哈爾 161000；4.齊齊哈爾醫學院附屬第二醫院，黑龍江齊齊哈爾 161000

肺癌組織標本庫的創建與管理

劉得水1，岳麗玲1，陳德慶2，李祖彬3，鮑紅光4，溫憲春1，劉吉成1

1.齊齊哈爾醫學院，黑龍江齊齊哈爾 161006；2.齊齊哈爾市第一醫院，黑龍江齊齊哈爾 161005；3.齊齊哈爾醫學院附屬第三醫院，黑龍江齊齊哈爾 161000；4.齊齊哈爾醫學院附屬第二醫院，黑龍江齊齊哈爾 161000

目的探索肺癌組織標本庫的創建和管理措施。方法收集肺癌組織腫瘤、癌旁和切緣遠端非腫瘤組織和血液標本，采用統一的采集和標本管理辦法，建立肺癌標本庫。結果截至2017年1月，該組織標本庫共收集肺癌組織標本307例，男性209例，女性98例，右側171例，左側136例，其中腺癌119例，鱗癌103例，小細胞癌77例，腺鱗癌8例，其中全套標本219例，經科學管理經6個月存放后，全血和血清存放符合率較高，與存放前差異無統計學意義，血漿和淋巴細胞存6個月后存放差異有統計學意義。結論肺癌組織標本庫的創建及系統化管理有助于為肺癌的基礎研究和臨床研究提供保障。

肺癌；標本庫；創建；管理

肺癌是目前危害我國人民生命和健康的最大威脅的惡性腫瘤，肺癌已經成為我國排名首位的惡性腫瘤，其死亡率超過惡性腫瘤死亡率的20%，每年新增病例超過50萬，預計未來我國將成為肺癌第一大國[1]。因此，目前大量的肺癌研究集中于臨床病例分析、血液學分析和組織病理學分析，不合理的采集和保存管理措施都極大地影響了實驗結果[2]。因此，建立合理的數據庫和組織標本庫的建立，有利于整合各方面資源，能夠為肺癌的研究提供及時、快速、準確和高效的組織標本[3]。該研究針對肺癌組織標本庫和數據庫進行建立，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2013年1月—2016年6月就診于齊齊醫學院三所附屬醫院以及齊齊哈爾市第一醫院的肺癌病例資料。患者的納入標準為：①經病理學診斷，確診為肺癌的患者；②經細胞學檢測，確診為肺癌的患者；③所有患者均符合知情同意原則，并簽署知情同意書。排除標準：①發生多發腫瘤；②腫瘤發病灶不能明確是來源于肺腫瘤；③其他器官腫瘤轉移至肺部者。該研究經齊齊哈爾醫學院倫理委員會批準，同意進行該次研究。

1.2 主要設備

電子天平；普通臺式低速離心機，-80℃冰箱，-150℃超低溫冰箱，恒溫水浴箱，低溫高速離心機，臺式電腦；數碼相機等辦公器材與設備。

1.3 標本的收集

1.3.1 組織標本的收集 組織標本選取者均經培訓合格的臨床醫生完成，腫瘤組織離體后，按照腫瘤、癌旁和切緣遠端非腫瘤組織3部分取材，每部分取材至少1塊組織，并且組織大小直徑不小于0.5 cm，在組織離體的30 min內，經液氮處理30 min后，切取小塊用石蠟包埋，分類存放于-80℃超低溫冰箱中儲存。

1.3.2 血液標本的收集 采血前先核對患者信息，記錄臨床數據庫，選取肘窩采血部位進行常規采血。取不添加抗凝劑真空采血管收集靜脈血和添加EDTA抗凝劑真空采血管收集靜脈血10 mL，每份5 mL。血液標本依據患者個人信息，二維碼打印機標記，存放于-80℃超低溫冰箱儲存。

1.4 血清及血細胞標本的保存

1.4.1血清標本的保存 收集不加抗凝劑的血液標本5 mL，室溫條件下放置3 h左右，采用普通臺式低速離心機離心10 min（2 000 r/min），所得血清標本分為6份保存于200 uL凍存管中，打印二維碼放置于-80℃超低溫冰箱儲存。

1.4.2 血漿、淋巴細胞的保存 收集經EDTA抗凝劑真空采血管中的血液標本5 mL，采用普通臺式低速離心機離心10 min（2 000 r/min），所得血漿標本分為6份保存于200 uL凍存管中，打印二維碼放置于-80℃超低溫冰箱儲存。將抗凝劑血漿后剩余血液采用0.01 g/L的PBS溶液稀釋2倍后混勻，取等量淋巴細胞分離液平均分配至15 mL離心管中，將稀釋血樣輕放置分離液上離心20 min（1 500 r/min），收集第二層細胞加入 0.01 g/L的PBS溶液5 mL的離心管中離心10 min（1 500 r/min），去上清液，再加0.01 g/L的PBS沖洗數次后離心10 min（1 500 r/min）后去上清液，最終沉淀物為淋巴細胞。取DMSO、1 640培養液、小牛血清比例為1:4:5配置成凍存液，將淋巴細胞放置于凍存液（3 mL）中，分4份分裝，每支0.8 mL[4]。經二維碼打印粘貼，放入-4℃0.5 h，再放入-20℃2 h，最后放入-80℃低溫保存。

1.5 組織標本與血液標本的質量控制與管理

1.5.1 組織標本的質量控制與管理 所有標本均經過病例技術人員檢查，符合腫瘤組織、癌旁組織和切緣遠端非腫瘤組織的組織要求，離體時間控制在30 min之內，轉運期間符合病理轉運要求，轉運過程中單獨存放3種組織，避免相互污染[5]。

1.5.2 血液標本的質量控制與管理 同一患者血液標本放入同一EP管盒中依據二維碼記錄。將兩份血液標本分別放置于兩臺-80℃超低溫冰箱儲存，避免因冰箱故障導致血液標本的損壞。全血標本進行肉眼觀察其顏色和外露情況。血清標本入庫6個月采用電化學發光法對腫瘤標記物CEA進行檢測，觀察其變化情況，確保血清標本的存儲質量，淋巴細胞在入庫時進行染色，計算存活率，在入庫后6個月再次染色，計算存活率，檢測淋巴細胞保存情況。

2 結果

2.1 組織標本采集情況

截至2017年1月，該組織標本庫共收集肺癌組織標本307例，男性209例，女性98例，右側171例，左側136例，其中腺癌119例，鱗癌103例，小細胞癌77例，腺鱗癌8例，其中全套標本219例（含所有組織標本和血液標本），占89.58%。詳見表1

表1肺癌組織標本庫構成

2.2 血液標本采集情況

經6個月存放后，全血和血清存放符合率較高，與存放前差異無統計學意義，血漿和淋巴細胞存放6個月后差異有統計學意義，但經CEA檢測，入庫前CEA（13.04±0.143），和 6 個月后 CEA（13.56±0.240）差異無統計學意義（t=0.995，P=0.573），血清標本在存放6個月后質量差異無統計學意義。在淋巴細胞存活率方面，6個月后平均存活率均大約90%，符合細胞存放生存標準。

表2肺癌數據庫血液標本有效6個月后合格情況

3 討論

隨著臨床醫學、病理學和分子生物學的發展，針對腫瘤組織分析和血液樣本的分析已經成為腫瘤基礎研究、臨床診斷和療效評估的重點領域。腫瘤標本庫的建立能夠對所有研究提供充足的標本資源和信息提供[6]。以往數據庫的建立，優于缺乏系統化管理，僅僅低溫保存，沒有對血細胞及腫瘤組織標本成分進行檢測，缺乏了科研的前瞻性，也在一定程度上造成了科研的損失[7]。

該次研究，針對肺癌組織標本進行采集，嚴格的按照采集標準進行操作，規范了信息的全面性，基礎信息采集做能夠幫助腫瘤臨床工作的流行病學采集，信息全面準確，標本采集經過前期質量控制，保障了3個部分組織標本的質量。建立了規范的血液標本庫，在采血，保存和使用過程進行規范化管理，嚴格遵循了科學的管理模式。該次研究顯示，經6個月存放后，全血和血清存放符合率較高，保障了血液的存放質量，這也得益于嚴格控制標本離體時間和嚴格的管理措施。

綜上所述，肺癌組織標本庫已經初步建立，通過全面的，科學化和系統化的管理，保障了組織和血液標本的質量，為肺癌的科學研究提供了物質保障。

[1]Siegel R,Naishadham D,Jemal A.Cancer statistics,2013[J].CA:a cancer journal for clinicians，2013（63）:11-30.

[2]段劉劍，張杰，周曉光.腫瘤組織庫規范化操作程序的探討[J].醫學與哲學，2010，31(5)：28-30.

[3]陸曉芳，馬欣，周駿群，等.肝臟組織樣本庫的建立及管理[J].世界華人消化雜志，2011，19(11)：1187-1190.

[4]Mager SR,Oomen MH,Morente MM,et al.Standard operating procedure for the collection of fresh frozen tissue samples[J].Eur J Cancer，2007（43）:828-834.

[5]Hawkins AK.Biobanks:importance,implications and opportunities for genetic counselors[J].J Genet Couns，2010（19）:423-429.

[6]Reis ST,Feitosa EB,Pontes-Junior J,et al.Tumor banks:the cornerstone of basic research in urology[J].Int Braz J Urol，2010（36）:348-354.

[7]Yu-Lei Hou,Juan-Juan Chen,Yan-Feng Wu,et al.Clinical significance of serum mitochondrial DNA in lung cancer[J]Clinical Biochemistry，2013（46）:1473-1477.

R73

A

1672-5654（2017）08（b）-0105-02

2017-05-08）

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.23.105

國家自然科學基金項目（No.81202084）；齊齊哈爾市科學技術項目（No.SFGG-201201）。

劉得水（1981-），男，遼寧撫順人，碩士，助理實驗師，研究方向：腫瘤基礎研究。

劉吉成（1958-），男，黑龍江勃利人，博士，教授，研究方向：腫瘤發病機制研究，E-mail：qqybliu@126.com。