蜂膠對宮頸癌Hela細胞作用的探索

李少叢 周杰 王玉桂 焦盈盈

·實驗研究·

蜂膠對宮頸癌Hela細胞作用的探索

李少叢 周杰 王玉桂 焦盈盈

目的 探討蜂膠成分咖啡酸苯乙酯(CAPE)對宮頸癌Hela細胞的作用。方法 選取對數生長期的Hela細胞, ①經0、6、10、20、30、40 μl/ml(0 μl/ml組、6 μl/ml組、10 μl/ml組、20 μl/ml組、30 μl/ml組、40 μl/ml組)的CAPE培養液作用24 h, 其中0 μl/ml組為參照對象；②細胞培養24 h后, 加入20 μl/ml的CAPE培養液。培養液與Hela細胞作用時間分別為0、12、24、48、72 h(0 h組、12 h組、24 h組、48 h組、72 h組), 其中0 h組為參照對象。采用唑鹽比色法(MTT法)檢測不同濃度和作用時間的CAPE對Hela細胞的抑制率。結果 經各濃度的CAPE培養液作用24 h, 不同CAPE濃度下Hela細胞的抑制率分別為0、1.05%、5.99%、18.92%、40.30%、47.05%, Hela細胞的抑制率隨CAPE培養液濃度的增大而增大, 差異具有統計學意義 (P＜0.05)。經20 μl/ml 的CAPE作用0、12、24、48、72 h, Hela細胞抑制率分別為0、3.76%、19.78%、22.23%、37.53%, Hela細胞抑制率隨CAPE培養液作用時間的延長而增大, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。結論 CAPE對宮頸癌Hela細胞具有抑制作用, 值得進一步研究。

蜂膠；咖啡酸苯乙酯；宮頸癌；Hela細胞

宮頸癌是一種嚴重危害女性健康的惡性腫瘤, 為女性第二大致死癌癥［1］, 其中發展中國家約占80%［2］。近年來, 我國宮頸癌的發病率明顯增高, 且發病年齡有減小趨勢［3,4］。蜂膠在我國是傳統的藥品和保健品。目前, 蜂膠中已分離出多種有效化學成分［5］, 其中, CAPE為蜂膠的主要有效成分,已被證明具有抗炎、抗氧化、免疫調節以及抗腫瘤等功能［6,7］。CAPE對多種腫瘤細胞有較強的誘導凋亡作用, 如胰腺癌、肝癌、膽管癌等［7,8］, 同時值得關注的是, 其對正常細胞幾乎沒有抑制作用。目前, 關于蜂膠對宮頸癌作用的報道較少見, 因此, 本文擬探討不同濃度和作用時間的蜂膠對宮頸癌Hela細胞的抑制作用。現報告如下。

1 材料與方法

1.1細胞培養 將宮頸癌Hela細胞置于37℃, 5 % CO2孵箱內, 使用含10% 胎牛血清的的DMEM培養基(內含100 U/ml青霉素和鏈霉素)培養。根據細胞生長情況, 每1～2天換液。于細胞進入對數生長期時, 進行傳代, 傳代數<20。

1.2MTT法細胞檢測

1.2.1CAPE濃度對Hela細胞的抑制效應 將對數生長期的Hela細胞消化, 取200 μl濃度為3×104/ml Hela細胞接種于96孔板, 培養24 h后, 分別加入0、6、10、20、30、40 μl/ml的CAPE(sigma公司, 美國)培養液, 作為0 μl/ml組、6 μl/ml組、10 μl/ml組、20 μl/ml組、30 μl/ml組、40 μl/ml組,其中0 μl/ml組為參照對象, 各組設4個平行樣。20 h后每孔加入20 μl濃度為5 mg/ml 的MTT, 再孵育4 h后, 棄去上清液,每孔加入150 μl 二甲基亞砜(DMSO), 振蕩5 min后, 使用酶標儀(參考波長630 nm、背景波長570 nm)測量各組吸光度(A)值。按以下公式計算細胞抑制率：抑制率(%)=(1-各組平均吸光度值/0 μl/ml組平均吸光度值)×100%。

1.2.2CAPE作用時間對Hela細胞的抑制效應 方法同上,細胞培養24 h后, 加入20 μl/ml的CAPE培養液。培養液與Hela細胞作用時間分別為0、12、24、48、72 h, 作為0 h組、12 h組、24 h組、48 h組、72 h組, 其中0 h組為參照對象,各組設4個平行樣, 檢測吸光度(A)值和細胞抑制率。

1.3統計學方法 采用SPSS20.0統計學軟件對研究數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差表示, 采用t檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1CAPE濃度對Hela細胞的抑制效應 經各濃度的CAPE培養液作用24 h, 不同CAPE濃度下Hela細胞的抑制率分別為0、1.05%、5.99%、18.92%、40.30%、47.05%, Hela細胞的抑制率隨CAPE培養液濃度的增大而增大, 差異具有統計學意義 (P＜0.05)。見表1。

表1 MTT法檢測CAPE濃度對Hela細胞的抑制效應

表1 MTT法檢測CAPE濃度對Hela細胞的抑制效應

注：與0 μl/ml組比較,aP＜0.05

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2.2CAPE作用時間對Hela細胞的抑制效應 經20 μl/ml的CAPE作用0、12、24、48、72 h, Hela細胞抑制率分別為0、3.76%、19.78%、22.23%、37.53%, Hela細胞抑制率隨CAPE培養液作用時間的延長而增大, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 MTT法檢測CAPE作用時間對Hela細胞的抑制效應

表2 MTT法檢測CAPE作用時間對Hela細胞的抑制效應

注：與0 h組比較,aP＜0.05

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3 討論

宮頸癌是女性僅次于乳腺癌的惡性腫瘤, 為女性第二大致死癌癥［1］, 發病率和死亡率都較高。早期宮頸癌患者無特異性癥狀和體征, 大部分患者確診時已為中晚期, 錯失了手術時機, 多以放、化療延緩病情進展。但放、化療均存在副作用, 在殺滅腫瘤細胞的同時可能對正常細胞產生損害。因此探求無毒副作用治療宮頸癌的藥物, 是影響婦女健康和生活質量的重大課題。

本研究表明, 在研究所處的范圍內, Hela細胞的抑制率隨CAPE培養液濃度的增大而增大, Hela細胞抑制率隨CAPE培養液作用時間的延長而增大, 差異具有統計學意義(P＜0.05), 可見CAPE對宮頸癌Hela細胞的增殖有明顯的抑制作用。

綜上所述, 蜂膠對宮頸癌具有潛在治療功能, 值得進一步研究。

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［3］ 王愛麗.扶正固本湯聯合化療用于宮頸癌患者臨床療效及安全性分析.中國現代醫學雜志, 2014, 24(22):51-53.

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.17.114

2017-07-05］

252000 山東省聊城市人民醫院婦產科(李少叢王玉桂 焦盈盈)；聊城職業技術學院護理學院(周杰)