金葉紫穗槐組織培養研究

石進朝++陳蘭芬++李彥俠

摘要：以金葉紫穗槐（Amorpha fruticosa ‘Jinye）為外植體，探討了不同生長調節對外植體分化、增殖和生根的影響。結果表明，①金葉紫穗槐組織培養最適宜的外植體是半木質化帶芽莖段，以70%乙醇30 s+0.1%升汞（HgCl2）消毒4～5 min為最好，外植體發芽率可達66.7%～70.0%。②適宜的增殖培養基為MS+ 6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L，適宜的生根培養基為1/2MS+IBA 0.5 mg/L。③生根試管苗適宜的開瓶煉苗時間為2～3 d，在一年中的3～5月，選擇基徑≥0.3 mm的試管苗移栽到蛭石培養基上能夠獲得93.3%的成活率。

關鍵詞：組織培養；外植體；增殖；生根；金葉紫穗槐（Amorpha fruticosa ‘Jinye）

中圖分類號：S793.203 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2017）16-3148-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.16.038

Tissue Culture of the Amorpha fruticosa ‘Jinye

SHI Jin-chao， CHEN Lan-fen， LI Yan-xia

（Beijing Agricultural Vocation College， Beijing 102442， China）

Abstract： Using Amorpha fruticosa ‘Jinye as explants， influences of different plant growth hormones on differentiation，multiplication and rooting were examined. The results showed that①the optimal explant material was tender stem with single bud，sterilized 30 s in 70% ethanol and 4～5 min in 0.1% HgCl2，the germination rate of explants was 66.7%～70.0%.②The optimal subculture was MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L，and rooting media was 1/2MS+IBA 0.5 mg/L.③the glass seedling rooting condign open the glass bottle hardened times was 2～3 d，than the diameter ≥0.3 mm glass seedling was transplanted on vermiculite，the survive rates of glass seedling were 93.3% in march and may of a year.

Key words： tissue culture； explant； proliferation； rooting； Amorpha fruticosa ‘Jinye

紫穗槐（Amorpha fruticosa L.）屬于蝶形花科（Papilionaceae）紫穗槐屬（Amorpha）多年生落葉叢生灌木，高達4 m，枝條直伸，樹皮暗灰色。喜光，耐寒、耐旱、耐貧瘠、耐鹽堿、較耐濕、適應性強。根系發達，根部有根瘤菌，具有固氮能力。紫穗槐是城鄉綠化、水土保持、改良土壤的主要樹種之一[1-4]。金葉紫穗槐是2013年在北京地區發現的紫穗槐實生苗變種，為落葉叢生灌木。新梢金黃色，基部黃綠色，一年生冬枝深紫色。春芽金黃色，新展葉金黃色，老葉漸變綠。總狀花序頂生或枝端腋生，花軸密生黃色短柔毛，為北京地區一個良好的鄉土彩色觀賞樹種，鮮見金葉紫穗槐相關組織培養方面的研究報道。為科學合理利用北京地區這一彩色植物新材料，2015年4月至2016年12月對金葉紫穗槐進行了組織培養研究，培養金葉紫穗槐適宜的外植體材料，篩選適宜的分化及生根培養基及栽培基后，探索了煉苗栽培技術，為大規模快速繁殖金葉紫穗槐奠定了基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗選取北京農業職業學院院內金葉紫穗槐（Amorpha fruticosa ‘Jinye）半木質化莖段作為外植體材料。

1.2 方法

1.2.1 適宜外植體消毒方法的篩選 2015年4月，從北京農業職業學院彩林示范基地露地栽培的金葉紫穗槐上選取當年生半木質化枝條，截取帶芽莖段作為外植體，自來水沖洗1 h，洗滌靈水溶液清洗30 min。將外植體轉入超凈工作臺，70%乙醇清洗30 s，無菌水清洗1～2次，然后分別設置0.1%的升汞（HgCl2）消毒4、5、6、7 min，無菌水清洗5～6次。消毒后接種在MS培養基上進行初代培養，培養溫度（25±1） ℃，光照度2 000 lx，光照時間12 h/d，每個處理30個帶芽莖段。

1.2.2 適宜增殖分化培養基的篩選 以MS為基本培養基，添加不同濃度的細胞分裂素（6-BA）及萘乙酸（NAA），對金葉紫穗槐組培苗進行增殖，30 d后記錄接種處理后的苗木高度、增殖系數及生長勢，確定金葉紫穗槐適宜的增殖分化培養基。

1.2.3 適宜生根培養基的篩選 以1/2MS培養基為基本培養基，添加不同濃度的吲哚丁酸（IBA）及萘乙酸（NAA），接種20 d后記錄各處理的試管苗生根情況，確定金葉紫穗槐適宜的生根培養基。

1.2.4 不同配比栽培基質的篩選 將金葉紫穗槐生根苗移栽到不同配比的栽培基質中，30 d后調查生根苗成活率和生長勢，確定金葉紫穗槐生根苗移栽最適培養基。endprint

2 結果與分析

2.1 不同消毒方法對外植體污染率的影響

2.1.1 不同消毒方法對外植體發芽率的影響 不同消毒方法對金葉紫穗槐外植體發芽率的影響見表1。由表1可以看出，4月從室外采集的半木質金葉紫穗槐帶芽莖段進行的8個處理消毒試驗，0.1%升汞處理4～5 min時外植體污染率、殺死率、芽萌發率分別為53.3%～66.7%、0～10.0%、70.0%，以外植體芽萌發率最高為依據，單一0.1%升汞處理外植體的適宜時間為4～5 min。選擇用70%乙醇處理30 s，再用0.1%升汞處理4～7 min，結果表明，70%乙醇處理后，外植體污染率明顯降低，芽萌發率和外植體殺死率的影響不大。因此，在進行金葉紫穗槐外植體消毒時，用70%乙醇處理30 s，再用0.1%升汞處理4～5 min，芽萌發率可達66.7%～70.0%。

2.1.2 適宜外植體采集時期篩選 分別在2月16日、4月18日、6月15日、8月20日、10月15日、12月16日采集金葉紫穗槐半木質化帶芽莖段30個，按表1處理5、處理6對外植體消毒，結果見表2。由表2可以看出，1年中從不同月份采集的金葉紫穗槐外植體發芽率在41.1%～85.2%之間變化，4月采集的新萌發的半木質化外植體污染率最低（26.7%），發芽率最高，達85.2%。外植體污染率由低到高的月份為4月、2月、12月、10月、6月、8月，發芽率由高到低的月份為4月、6月、10月、8月、12月、2月。夏季采集的污染率較高，主要是因為夏季溫度高，濕度大，雜菌活躍。因此，在采集外植體時要盡量避開夏季高溫高濕季節，綜合污染率和發芽率，在進行金葉紫穗槐外植體采集時，以春季4～5月萌芽后采集半木質化的帶芽莖段為宜。

2.2 適宜增殖培養基的篩選

在繼代30 d時，在增殖培養基中添加不同濃度6-BA及NAA，依據增殖苗生長高度、增殖系數、生長勢3項指標確定金葉紫穗槐適宜的增殖培養基，結果見表3。由表3可以看出，處理1～處理4雖然苗木高生長量最大，叢生芽較多，增殖系數高（7.9～8.1），但長勢弱；處理11、處理12苗木高生長量最小，生長勢緩慢，增殖系數低（2.1～2.6）。生長素的濃度高，可以促進苗木的高生長，但苗木變得細弱。從增殖苗生長高度及生長勢綜合分析，適宜的增殖培養基為處理7（MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L），增殖系數可達6.9。

2.3 適宜生根培養基的篩選

在1/2MS生根培養基中加入不同濃度的IBA及NAA，生根培養20 d后，記錄6種生根培養基試管苗的開始生根時間、生根數量、根長度、根生長勢4項指標，依此確定適宜的IBA及NAA添加濃度，結果見表4。綜合分析6種生根培養基在生根時間、生根數量、根生長量及生長勢的調查結果，處理4雖然開始生根時間較短，為8 d，但有少量愈傷出現，不利于移栽成活；處理2開始生根時間為10 d，平均根數5條，平均根長為2.5 cm，為金葉紫穗槐試管苗生根最好。適宜的生根培養基為1/2MS+IBA 0.5 mg/L。

2.4 金葉紫穗槐試管苗移植關鍵環節與成活率

2.4.1 在溫室的開瓶煉苗天數與試管苗移栽成活率 試驗中選取長勢、根數、苗高等相對整齊的金葉紫穗槐瓶苗，設計在溫室中進行瓶苗煉苗0、2～3 d及4～5 d后移栽，根據瓶苗移栽成活率，確定在溫室中進行瓶苗煉苗的適宜天數，結果見表5。由表5可以看出，直接從培養室出瓶，而不經過溫室整瓶煉苗的金葉紫穗槐瓶苗的移栽成活率僅為66.7%，而打開瓶口4～5 d，移栽成活率為60.0%，并且移栽出來的苗出現了長菌現象，影響了瓶苗成活率。只有開瓶2～3 d的試管苗移栽成活率最高，達96.7%。因此，開瓶2～3 d后進行金葉紫穗槐試管苗移栽能夠獲得較高的成活率。

2.4.2 金葉紫穗槐試管苗基徑與移栽成活率 將 <0.1 mm、0.1～0.3 mm及0.3～0.5 mm 3種規格基徑的金葉紫穗槐試管苗移植在蛭石中培養時，成活率見表6。由表6可以看出，金葉紫穗槐試管苗基徑與移栽成活率呈正相關。基徑為0.3～0.5 mm的金葉紫穗槐試管苗移栽后，不僅生長快，而且有大量根毛生長。選用基徑為<0.1 mm的金葉紫穗槐試管苗移栽后，生長慢，緩苗期長，成活率低，根毛少。因此，在進行金葉紫穗槐試管苗移栽時，選用基徑≥0.3 mm的金葉紫穗槐試管苗能夠獲得93.3%的成活率。

2.4.3 移栽基質與金葉紫穗槐試管苗移栽成活率 將金葉紫穗槐試管苗移栽到不同基質中培養時，成活率見表7。由表7可以看出，金葉紫穗槐生根苗移栽到保水、透氣性好的蛭石上，成活率在90.0%以上，移栽到透氣性較差的河沙與腐殖質土混合物（3∶1）中，成活率僅為63.3%。因此，移栽金葉紫穗槐試管苗時，選擇蛭石作培養基質較好。

試管苗移栽成活率受多種因素影響。從試管苗基莖、移栽基質等方面進行的研究表明，試管苗越粗壯，木質化程度越高，移栽成活率越高，根系生長越好。在溫室中對瓶苗進行煉苗時間長短對試管苗移栽成活率的影響也很大。移栽前整瓶煉苗可使苗木粗壯，增強對水分脅迫和病害的抗性，能夠提高移栽成活率。

2.4.4 移栽時期與金葉紫穗槐試管苗移栽成活率 將金葉紫穗槐試管苗在不同季節進行移栽，成活率見表8。由表8可以看出，金葉紫穗槐試管苗移植成活率最高在3月，7月移植時成活率最低。3月氣溫逐漸回升，到5月，日光溫室中的溫度很容易控制在20～25 ℃，適于試管苗生長。隨著氣溫升高，到7月達到一年中的最高溫度30 ℃左右。因此，在一年中的3～5月為金葉紫穗槐試管苗移植的最佳時期。

3 小結與討論

3.1 小結

金葉紫穗槐組織培養時，適宜的外植體材料為當年生木質化或半木質化帶芽枝段作為外植體，誘導出不定芽的發生。適于金葉紫穗槐外植體消毒方法是用70%乙醇處理30 s，再用0.1%升汞處理4～5 min，外植體發芽率最高可達66.7%～70.0%。采集外植體的適宜時間為春季萌芽前。適宜的增殖培養基為MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L。適宜的生根培養基為1/2MS+IBA 0.5 mg/L。endprint

3.2 討論

關于外植體選擇問題，李衛等[5]以子葉節為外植體直接分化芽，建立了紫穗槐的快速離體繁殖技術，分化率為100%，增殖率為5.21；管清杰等[6]以紫穗槐不帶芽莖段為研究對象，以愈傷組織誘導不定芽分化，實現了100%的誘導率和96.2%的分化率。對于組織培養生根困難的樹種如杜仲（Eucommia ulmoides）等選用半木質化的帶芽莖段組培獲得成功[7，8]。本研究以半木質化金葉紫穗槐帶芽莖段做外植體，誘導不定芽的發生，分化率為100%，增殖系數為6.8。試驗曾選用木質化的金葉紫穗槐帶芽莖段作為外植體，能夠誘導不定芽的發生，但污染率比較高，達68.2%。因此，選擇金葉紫穗槐外植體時，先把未發芽的金葉紫穗槐枝段在室內進行水培培養或扦插，當萌發枝高15～20 cm時，采集帶芽萌發枝作為外植體，能夠獲得90%以上的萌發率，污染率降低到27%以下，這與長綠期金銀木組織培養繁育外植體的選擇相似[9]。

參考文獻：

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[9] 石進朝，陳蘭芬.長綠期金銀木的組織培養研究[J].西北林學院學報，2009，24（4）：97-100.endprint