影響PRF臨床療效的相關因素

辛酉鳳 趙金

【摘要】富血小板纖維蛋白（platelet-rich fibrin，PRF），是繼富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）后的第二代血小板濃縮物。因其特殊的三維立體結(jié)構(gòu)和其內(nèi)所含的多種生長因子，PRF在加速軟、硬組織愈合中發(fā)揮重要的作用已被國內(nèi)外廣大學者所認可。本文就影響PRF臨床療效的相關因素研究進展作一綜述。

【關鍵詞】PRF；富血小板血漿；制備方法；相關因素

【中圖分類號】R4 【文獻標識碼】A 【文章編號】ISSN.2095.6681.2018.06.17..02

1 PRF的基本制備方法

選擇健康人群對其進行血液的采集，其中參加研究的女性均不在月經(jīng)期，采集血液的量為10 ml，將抽取的靜脈血放置在試管內(nèi)，且保證試管內(nèi)不含抗凝劑，立即以一定轉(zhuǎn)速離心。經(jīng)過；離心處理后液體分為三層，其中最上層為不含細胞的血漿，最底層為紅細胞層，中間層即為PRF。大約97%的血小板和>50%的白細胞以一種特定的三維分布在PRF的纖維蛋白結(jié)構(gòu)中[1]。血小板中含有30多種生長因子，如血小板衍生生長因子（platelet-derived growth factor，PDGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）等[2]。這些生長因子還有其內(nèi)的白細胞釋放白細胞介素（IL-1、IL-4）、腫瘤壞死生長因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）和血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）等，各因子之間發(fā)揮著協(xié)同作用，并對組織細胞有著調(diào)控作用，主要表現(xiàn)為對其增殖分化有影響，對炎癥因子有介導作用，能夠幫助創(chuàng)口快速愈合。盡管血小板生長因子在PRF中發(fā)揮重要作用，白細胞含量和纖維蛋白結(jié)構(gòu)也是兩個關鍵參數(shù)[1]。

2 影響PRF臨床療效的相關因素

2.1 主要因素：相對離心力和離心時間

在制備PRF的時候最為重要的是選擇好離心處理的方法，離心方法受到相對離心力（relative centrifugal force，RCF）和離心時間的影響。PRF的纖維蛋白三維結(jié)構(gòu)與其內(nèi)的細胞分布取決于離心力[1]。血液中的細胞若是遭到了破壞，可能使離心力較高，且離心處理的時間較長。RCF受到離心轉(zhuǎn)速和離心半徑的影響，RCF=1.118×10-6×R×W2（其中R表示離心半徑，所用單位為cm，W表示離心轉(zhuǎn)速，所用單位為r/min）[2]。因此在RCF一定的情況下，由于不同品牌的離心機離心半徑不同，制備PRF的轉(zhuǎn)速應有所不同。（1）最早提出的PRF制備方案是Choukroun等在2001年提出。由于其內(nèi)含有大量的白細胞，又被命名為L-PRF（leukocyte-PRF，L-PRF）。當時用于制備PRF的離心機是法國Nice公司的PC-02臺式離心機[3]。（2）Shahram Ghanaati等在2014年使用同樣的離心機制備了標準PRF（standard PRF，S-PRF）：采集全血，采集量為9ml，將其放在不含有抗凝劑的塑料管中，且塑料管有無菌玻璃涂層，進行離心處理，轉(zhuǎn)速為2700 r/min，離心時間為12 min；改良型富血小板纖維蛋白（advance platelet-rich fibrin，A-PRF）：采集全血，采集量為10 ml，將其放在無菌純玻璃管中，且其中不含有抗凝劑，進行離心處理，轉(zhuǎn)速為1500 r/min，離心時間為14 min。得出：與S-PRF相比，A-PRF的纖維蛋白三維結(jié)構(gòu)更為松散，其內(nèi)的細胞數(shù)量更多，分布更為均勻。A-PRF似乎是自體細胞（特別是中性粒細胞和巨噬細胞）的理想供給者[4]。（3）2017年，Xuzhu Wang等制備i-PRF（injectable-platelet-rich fibrin， i-PRF）的方法如下：采集全血，采集量為10 ml，將其放在不含抗凝劑的試管內(nèi)，立即以700r/min（相對離心力大約60×g）離心3 min，上層的1 ml液體被稱為i-PRF（一種液體血小板濃縮物）。得出的結(jié)果為i-PRF對于更多的細胞有顯著的動員作用，能夠使得細胞進行遷移，產(chǎn)生更多的生長因子及纖維連接蛋白[5]。有實驗證明：A-PRF+（low-speed+time）將血液以1300r/min的速度離心8 min，與L-PRF相比，其內(nèi)的生長因子含量較高，其生物相容及成纖維細胞遷移和增殖水平較高[6]。

2.2 其他因素

（1）試管材質(zhì)：李龍等證明用玻璃管制備的PRF比用塑料管制備的釋放VEGF含量高[7]。Mustafa等用鈦試管制備T-PRF（titanium-prepared，platelet-rich fibrin）。其血小板聚集與PRF在玻璃管內(nèi)制備的情況有相似之處，其生物相容性更好。試管類型（干玻璃或玻璃涂層塑料管），似乎沒有影響這種自體生物材料的結(jié)構(gòu)。（2）除水方式：對PRF凝膠進行脫水處理，按照速度的快慢分為緩慢脫水和快速脫水，在釋放生長因子的含量上差異不顯著[8]。（3）儲存方法：李龍等的實驗證明4℃比37℃培養(yǎng)條件下PRF釋放的VEGF含量更高。

3 小 結(jié)

雖然國內(nèi)關于PRF生長因子含量的測定實驗有很多，但是其制備沒有一個標準的流程，導致生長因子含量不穩(wěn)定，從而影響了其臨床療效。因此， 將離心轉(zhuǎn)速換算成相對離心力，能夠大幅度減小實驗誤差，為臨床工作提供更可靠的制備方法。

參考文獻

[1] Dohan Ehrenfest D M，Del Corso M， Diss A， et al. Three-Dimensional Architecture and Cell Composition of a Choukroun's Platelet-Rich Fibrin Clot and Membrane[J]. Journal of Periodontology，2010，81（4）：546-555.

[2] 毛俊麗，王 拓，孫 勇，等.PRF的制備及保存方法的研究進展[J].西南國防醫(yī)藥，2016（03）：326-327.

[3] Dohan D M，Choukroun J，Diss A，et al.Platelet-rich fibrin （PRF）： a second-generation platelet concentrate.Part I： technological concepts and evolution[J]. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod，2006，101（3）：e37-e44.

[4] Ghanaati S，Booms P，Orlowska A，et al.Advanced Platelet-Rich Fibrin： A New Concept for Cell-Based Tissue Engineering by Means of Inflammatory Cells[J].Journal of Oral Implantology， 2014，40（6）：679-689.

[5] Wang X，Zhang Y，Choukroun J，et al.Behavior of Gingival Fibroblasts on Titanium Implant Surfaces in Combination with either Injectable-PRF or PRP[J].Int J Mol Sci， 2017，18（2）.

[6] Fujioka-Kobayashi M， Miron R J， Hernandez M，et al.Optimized Platelet-Rich Fibrin With the Low-Speed Concept：Growth Factor Release，Biocompatibility，and Cellular Response[J].J Periodontol，2017，88（1）：112-121.

[7] 李 龍，趙建輝，劉 斌，等.富血小板纖維蛋白體外釋放VEGF影響因素的探討[J].中國美容醫(yī)學，2012（03）：427-430.

[8] 李艷秋，周延民，孫曉琳，等.富血小板纖維蛋白體外釋放TGF-β和PDGF-AB影響因素的探討[J].現(xiàn)代口腔醫(yī)學雜志，2012（06）：404-407.

本文編輯：吳 衛(wèi)