江蘇省泰州地區某醫院婦科就診患者HPV感染狀態分析

丁雪晴, 田 田, 劉俊慧

(江蘇省泰州第二人民醫院 檢驗科, 江蘇 泰州, 225500)

江蘇省泰州地區某醫院婦科就診患者HPV感染狀態分析

丁雪晴, 田 田, 劉俊慧

(江蘇省泰州第二人民醫院 檢驗科, 江蘇 泰州, 225500)

人乳頭狀瘤病毒; 亞型; 泰州地區

人乳頭狀瘤病毒(HPV)已被流行病學[1-2]證實是宮頸癌發生的主要致病因子，尤其是高危型HPV持續感染。宮頸癌患者的病理樣本中幾乎均能檢出高危型HPV。HPV感染的檢測已成為臨床篩查和預防宮頸癌的重要方法[3]。本研究使用流式點陣檢測試劑，采用xMap技術即液態芯片技術，對3 281例患者進行HPV感染的27種亞型分型進行檢測，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年5月—2016年6月婦科就診3 281例患者，年齡14～80歲，中位數43歲。所有樣本采集和診治過程均經患者同意。

1.2 儀器和試劑

一次性使用宮頸細胞采集器，DNA提取試劑和人乳頭狀瘤病毒核酸擴增分型檢測試劑均由上海透景生命科技股份有限公司提供。儀器為TIANLONGDTG-3型PCR擴增儀，透景Luminex200檢測儀。

1.3 檢測方法

1.3.1 標本的采集：由婦科醫生以擴陰器暴露宮頸口后，用棉試子擦去宮頸口的分泌物，將宮頸刷子伸入宮頸口處順時針輕柔旋轉4～5圈，然后將宮頸刷裝于有細胞保存液的樣本管中保存。在樣本管上貼有患者信息的條碼，送至檢驗科, 4 ℃保存, 1周內檢測。

1.3.2 HPVDNA的制備：取保存有宮頸細胞的細胞保存液400 μL, 14 000 r/min離心3 min, 棄去上清液，加入核酸釋放劑200 μL, 震蕩混勻，金屬浴100 ℃ 15 min, 14 000 r/min離心3 min。取5 μL DNA提取液用于PCR擴增。DNA的制備過程在生物安全柜內完成。

1.3.3 PCR擴增：使用透景HPVDNA擴增試劑盒進行擴增，具體布驟按試劑盒說明書進行。PCR反應條件: 95 ℃ 5 min, 1個循環, 95 ℃ 30 s, 58 ℃ 30 s, 72 ℃ 30 s, 5個循環; 95 ℃ 30 s, 60 ℃ 30 s, 72 ℃ 30 s, 35個循環, 72 ℃ 3 min, 1個循環。

1.3.4 雜交：取相應大小的微孔雜交板，將微球雜交液震動30 s, 每個雜交孔中加入22 μL微球雜交液及PCR擴增產物3 μL, 貼好封板紙，放置于TIANLONGDTG-3型PCR擴增儀。雜交運行程序: 95 ℃ 5 min變性, 48 ℃ 30 min雜交, 48 ℃ 15 min孵育。撕下封板紙，每孔加入鏈霉親和素-藻紅蛋白75 μL, 封板紙重新貼好, 48 ℃下孵育15 min。快速將微孔雜交板移至已預熱好的Luminex 200上進行檢測。

1.3.5 結果判讀：打開透景科技3.2計算軟件，軟件自動判斷樣本的檢測結果。每個樣本的Globin值>150, 微球數>50個為實驗結果有效, HPVDNA27種亞型檢測值>150為陽性, <150為陰性。

1.4 統計學分析

采用Microsoft Excel 2010和SPSS 10.0軟件進行數據處理和統計學分析，計數資料以陽性率表示，各年齡組HPV陽性率采用Pearson χ2檢驗,P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

檢測的3 281例婦科患者中，檢出陽性標本839例，陽性率為25.57%。檢測的27種亞型均有出現，陽性率的排序如下: HPV52(9.66%), HPV16(8.56%), HPV58(6.78%), HPV81(6.44%), HPV53(6.44%), HPV39(5.50%), HPV18(5.08%), HPV61(4.66%), HPV55(4.66%), HPV56(4.40%), HPV51(4.23%), HPV43(4.15%), HPV33(3.64%), HPV44 (3.56%), HPV35(3.39%),HPV66(2.88%), HPV11(2.46%), HPV42(2.37%), HPV59(2.29%), HPV31(1.52%), HPV45(1.52%), HPV6(1.44%), HPV68(1.44%), HPV82(1.12%), HPV83(1.01%), HPV40(0.67%), HPV26(0.13%)。

單一亞型陽性例數為最多, 839例陽性標本中, 590例為單一亞型，占陽性例數的70.32%, 占受檢總人數的17.98%; 二重感染185例，占陽性例數的22.05%, 占受檢人數的5.64%; 三重感染49例，占陽性例數的5.84%, 占受檢人數的1.49%; 四重以上感染人數15例，占陽性例數的1.79%, 占受檢人數的0.45%。多重感染的樣本為249例，占陽性樣本的29.68%, 占受檢總人數的7.59%。多重感染的樣本中，高危混合型98例，高低危混合型134例，低危混合型17例，占多重感染樣本的比例分別為39.36%、53.82%、6.82%。占受檢人數的比例分別為2.99%, 4.08%, 0.5%。839例陽性樣本由于有多重感染的樣本共檢出1 172例HPV亞型，其中高危型804例，低危型368例，占受檢人數的比例分別是24.51%、11.12%, 占總檢出亞型的比例分別為68.60%、31.39%。

3 281例受檢患者年齡為14～80歲，以30～49歲受檢者居多，總共2 463例，占受檢人數的75.06%。30～49歲組陽性數占總陽性例數的72.71%。大于60歲組檢出陽性率最高為31.09%, 其次為14～29歲組檢出陽性率為28.06%。HPV感染各年齡組差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各年齡段就診患者HPV陽性率

3 討 論

在發展中國家宮頸癌的發病率位居婦科腫瘤的的首位。高危型HPV持續感染已被流行病學和生物學[4]證明，是引起宮頸上皮內瘤變(CIN)和宮頸癌的重要因素。HPV是一種具有種屬特異性的嗜上皮病毒，屬雙鏈閉環的小DNA病毒。1995年國際癌癥研究協會(IARC)根據HPV的致癌性將其分為高危型和低危型兩大類。高危性HPV檢測有效提高臨床對宮頸癌前病變的檢測靈敏度，降低了漏診率，已成為宮頸癌篩查的重要方法。

目前，國內關于HPV感染陽性率和型別的報道有著不同地域的差異。本研究中，泰州地區3 281例受檢患者共檢出HPV陽性樣本839例，陽性率為25.57%。2007年美國健康與營養調查研究發現, 14～59歲女性中HPV的陽性率為26.8%[3]。王艷等[5]報道的浙南地區陽性率為29.50%, 與本研究結果相近。本研究中, 27種亞型均有檢出。最常見的10種亞型及其所占陽性樣本的比例按由高到低的順序排列為HPV52(9.66%), HPV16(8.56%), HPV58(6.78% ), HPV81(6.44%), HPV53(6.44%), HPV39(5.50%), HPV18(5.08%), HPV61(4.66%), HPV55(4.66%), HPV56(4.40%)。大量的流行病學資料[6]表明，HPV基因型分布存在區域差異。本研究顯示泰州地區HPV高危型亞型的型別與國內的多數報道相一致[7-8], 以HPV52, HPV16, HPV58為主。HPV低危型亞型以HPV81, HPV55為主，與以往報道的HPV6, HPV11為主的結果不一致，可能是檢測方法和病例選擇的不同有關。

本研究中，以單一亞型陽性例數為最多, 839例陽性標本中590例為單一亞型，占陽性例數的70.32%, 占受檢總人數的17.98%。HPV感染型別以高危亞型為主。多重感染隨感染亞型數的增多比例逐漸下降，檢出合并感染亞型數最多是五重陽性。多重感染以高低危混合型為主，其次是高危混合型，低危混合型最少，所占多重感染的比例分別為53.82%、39.36%、6.82%, 與已有報道[9]多重感染以高低危混合型為主的研究結果相一致。

本研究結果顯示, HPV感染率在各年齡組間存在差異。最高值在>60歲組(31.09%), 其次為<30歲組(28.06%)。多重感染大于3種亞型的陽性樣本多數分布在這兩個年齡組。分析其原因為<30歲組年輕女性性活躍HPV感染率高，隨著年齡的增長而感染率下降, >60歲組感染率出現最高峰值，隨著女性卵巢功能低下，激素水平降低，機體的免疫功能下降，加之老年女性的健康意識不強而導致HPV的高感染率[10]。

定期的HPV的分型檢測可以了解機體的感染是一過性感染或持續性感染，還可用于宮頸病變患者療效的評估。美國癌癥協會和美國婦產科醫師學會[11]認為，在30歲以上的婦女中，聯合使用TCT和HPV檢測可提高宮頸癌的篩檢率，有效提高了宮頸癌前病變檢測的靈敏度，降低漏診率。

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2017-02-19

R 737.33

A

1672-2353(2017)15-223-02

10.7619/jcmp.201715080