T—SPOT.TB在艾滋病合并肺結核診斷中的臨床應用價值

王宇++潘燕妮++梁道斌++江淵++黃芩

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2017.16.032

[摘要] 目的 對結核感染T細胞斑點試驗（T-SPOT.TB）在艾滋病合并肺結核感染診斷中的價值分析。 方法 整群選擇2014年1月—2016年7月間，廣西玉林市紅十字會醫院收治并診斷為艾滋病疑似合并肺結核患者206例作為研究對象，最終確診結核患者76例和非結核患者130例。對兩組展開T-SPOT.TB檢測，同時行結核抗體（Tb-Ab）檢查。結果 結核感染組患者T-SPOT.TB陽性率為84.21%，明顯高于非結核感染組16.15%（P<0.05）；艾滋病合并肺結核患者T-SPOT.TB檢測靈敏度84.21%高于結核抗體36.84%，對比差異有統計學意義（P<0.05）；特異度兩種方法分別為83.84%、85.38%，差異無統計學意義（P>0.05）。結核感染組CD4+T淋巴細胞計數≥200 cell/μL及CD4+T淋巴細胞計數<200 cell/μL患者T-SPOT.TB檢測陽性率分別為93.75%、76.56%，差異無統計學意義；T-SPOT.TB檢測陽性結果，A孔/B孔特異性斑點>100的結核診斷率高于A孔/B孔特異性斑點<100的患者（P<0.05）。 結論 T-SPOT.TB技術對艾滋病合并結核感染進行診斷的準確性、敏感性均較高。

[關鍵詞] 結核感染T細胞斑點試驗；艾滋病；結核感染

[中圖分類號] R446.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）06（a）-0032-03

Clinical Application Value of T-SPOT.TB in the Diagnosis of AIDS and Tuberculosis

WANG Yu， PAN Yan-ni， LIANG Dao-bin， JIANG Yuan， HUANG qin

Department of Infection， Yulin Red Cross Hospital， Yulin， Guangxi， 537000 China

[Abstract] Objective To analyze the value of T-SPOT.TB in the diagnosis of AIDS and tuberculosis. Methods 206 cases of patients suspected with AIDS and tuberculosis in our hospital from January 2014 to July 2016 were selected and 76 cases were diagnosed with tuberculosis and 130 cases were not the tuberculosis patients， and both groups were given T-SPOT.TB test and Tb-Ab examination. Results The T-SPOT.TB positive rate in the tuberculosis group was obviously higher than that of non-tuberculosis group， （84.21% vs 36.84%）， and the difference was statistically significant（P<0.05）， and the difference in the specificity between the two groups was not statistically significant， （83.84% vs 85.38%），（P>0.05）， and the T-SPOT.TB positive rate in patients whose CD4+T lymphocyte count ≥200 cell/μL and CD4+T lymphocyte count <200 cell/μL was respectively 93.75% and 76.56%， and the difference was not statistically significant， and the diagnosis rate of patients whose A hole/B hole specific spot>100 was higher than that of patients whose A hole/B hole specific spot <100（P<0.05）. Conclusion The accuracy and sensitivity of T-SPOT.TB in the diagnosis of AIDS and tuberculosis are high.

[Key words] T.SPOT-TB test； AIDS； Tuberculosis infection

近幾年，隨著檢測技術的不斷發展和日漸成熟，結核感染T細胞斑點實驗在結核感染診斷中逐漸被廣泛應用[1]。這項新技術的問世與應用，使得艾滋病合并結核感染的診斷效果得到明顯改善。該研究對2014年1月—2016年7月間該院收治的艾滋病合并肺結核感染患者76例和非合并結核感染患者130例展開了T-SPOT.TB檢測，并對檢測結果進行了統計分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究資料來源于整群選取該院在2014年1月—2016年7月這段時間內收治的，獲得明確診斷的艾滋病患者，并疑似肺結核感染，共計206例作為研究對象。經檢查確診肺結核患者76例，非結核患者130例，將其分成兩組：結核感染組和非結核感染組。結核感染組中，患者年齡區間為25～78歲，中位年齡為48歲，平均年齡為（45.9±12.3）歲，包括有男性57例，女性19例；非結核感染組中，患者年齡區間為20～75歲，中位年齡為45歲，平均年齡為（42.7±14.6）歲，包括有男性92例，女性38例。兩組患者的年齡、性別等指標比較，差異無統計學意義（P>0.05），存在可比性，所有肺結核患者均符合臨床診斷標準[2]，自愿接受臨床檢查，并簽署了知情同意書。

1.2 方法

T-SPOT.TB檢測試劑盒由金域公司提供，英國牛津原裝進口試劑，獲得資質的專業技術人員檢測。方法：使用肝素抗凝管收集住院患者清晨空腹外周血6 mL，按T-SPOT操作方法實驗室分離外周血單個核細胞（PBMCS），調整細胞懸液濃度至2.5≤105 cell/μL加入至4個微孔培養板（分別為陰性對照孔、A孔：ESAT-6、B孔：CFP-10和陽性對照孔），微孔里預包被γ干擾素抗體，微孔中分別加入陰性對照的淋巴細胞無血清培養基、結核特異性抗原ESAT-6、CFP-10、作為陽性對照的植物血凝素；置入37°含有5%的CO2培養箱中培養16～24 h，洗板，加入標記抗體工作液，2～8°孵育1 h后洗板，每個反應孔加入底物顯色溶液室溫孵育7 min，通風處干燥培養板，記數每個反應孔內深藍色清晰斑點。結果判定：根據抗原A或抗原B孔的反應判斷結果，陰性對照孔數為0～5，陽性樣本應為：抗原A或抗原B斑點數減去陰性對照孔斑點數≥6；當陰性對照孔斑點數≥6，陽性樣本應為抗原A或抗原B斑點數≥2倍陰性對照孔斑點數。

1.3 觀察指標

記錄兩組患者T-SPOT.TB、結核抗體檢測結果；分析不同方法檢測的靈敏度及特異度；結核感染組不同CD4+T細胞計數條件下T-SPOT.TB檢測陽性率；T-SPOT.TB陽性結果不同數值結核的診斷率。

1.4 統計方法

數據處理方法統計學分析均經SPSS 17.0統計學軟件進行處理，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，并采用 t 檢驗，計數資料采用[n（%）]表示，采用χ2檢驗， P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者T-SPOT.TB檢測結果及與結核抗體檢測結果比較

結核感染組患者T-SPOT.TB檢測陽性者64例，陽性率為84.21%，非結核感染組患者T-SPOT.TB檢測陽性者21例，陽性率為16.15%；結核感染組陽性率明顯高于非結核感染組（χ2=91.656，P<0.01）；結核抗體在兩組間的陽性率分別為36.84%、14.62%（χ2=13.455，P<0.01）。T-SPOT.TB檢測結核感染的敏感度（84.21%）高于結核抗體（36.84%），差異有統計學意義（χ2=35.687、P< 0.01），特異性兩者分別為83.84%、85.38%，兩者比較差異無統計學意義（χ2=0.118、P= 0.731），見表1。

2.2 CD4+T淋巴細胞計數在艾滋病結核感染組T-SPOT.TB檢測陽性率

艾滋病結核感染組患者在CD4+T淋巴細胞計數≥200 cell/μL條件下T-SPOT.TB檢測陽性率（93.75%）高于CD4+T淋巴細胞計數<200 cell/μL組（76.56%），但兩組差異無統計學意義（χ2=0.627、P=0.428），見表2。

2.3 T-SPOT.TB檢測陽性不同結果結核診斷率

T-SPOT.TB檢測陽性患者中，A孔或B孔檢測值≤100的結核診斷率為90.24%，高于6≥A孔或B孔檢測值<100的結核診斷率（61.36%），差異有統計學意義（χ2=9.516、P=0.002）。見表3。

3 討論

近幾年隨著酶聯免疫技術的不斷發展和日漸完善，T-SPOT.TB檢測問世，并在臨床結核感染診斷中發揮了重要作用。這項新技術的原理主要為，人體在感染結核分支桿菌后，會形成記憶性T淋巴細胞，再次受到結核分支桿菌相關抗原的刺激后，會造成記憶性T淋巴細胞迅速增殖成效應性T淋巴細胞，同時會分泌出INF-γ，對分泌INF-γ的淋巴細胞數目進行測定，便可以實現對機體是否感染結核分枝桿菌進行判定[3]。其特點是靈敏度高，幾乎不受個體免疫功能低下影響；特異性好，不受卡介苗接種與非結核分枝桿菌影響。

在該研究中，結核感染組患者T-SPOT.TB陽性率為84.21%，明顯高于非結核感染組16.15%，與文獻報道一致[4]；艾滋病合并肺結核患者T-SPOT.TB檢測靈敏度84.21%高于結核抗體36.84%，對比差異有統計學意義，與國外對HIV陽性、陰性結核感染T-SPOT.TB檢測結果的相關報道差別不大[5]，說明免疫功能對T-SPOT.TB檢測結果影響有限。但也有研究[6]顯示T-SPOT.TB檢測結果和外周血CD4+T淋巴細胞數量有關；從表2可以看出，T-SPOT.TB檢測陽性率隨CD4+T淋巴細胞計數升高而有所升高，但差異無統計學意義，這可能和χ2檢驗無法完全滿足條件有關；也說明在嚴重免疫缺陷患者中，T-SPOT.TB檢測假陰性結果增多，但結果影響有限。而對T-SPOT.TB陽性結果分析顯示，A、B孔效應性T淋巴細胞越多，說明機體受到結核分枝桿菌抗原的刺激也越強烈，相應結核的確診率也越高（P<0.01）[7]。由此證實，經T-SPOT.TB技術對艾滋病合并肺結核感染進行診斷的準確性、敏感性均較高，對臨床診斷工作具有重要輔助作用；但需要注意的是T-SPOT.TB檢測目前尚無統一的界值用來鑒別活動性肺結核及潛伏結核感染；且T-SPOT.TB檢測存在一定的假陰性結果，尤其是HIV感染者、腫瘤患者、兒童等免疫功能不全情況下，因此需聯合其他相關檢查來提高結核的診斷率[8]。

綜上所述，活動性結核病與潛伏結合感染患者Mtb特異性抗原ESAT-6、CFP-10刺激后SFCs差異存在明顯統計學意義，由此可證實，SFCs與疾病活動度、體內抗原負荷等可能存在相關性。通過該次研究證實，T-SPOT.TB技術對艾滋病合并結核感染進行診斷的準確性、敏感性均較高，在今后的臨床工作中，值得對其給予足夠的重視并廣泛應用。

[參考文獻]

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（收稿日期：2017-03-09）