蘋果幼果原花青素抗氧化研究

劉濤瑞，韓利文

(1.山東省實(shí)驗(yàn)中學(xué)，山東 濟(jì)南 250000；2.山東省科學(xué)院生物研究所，山東 濟(jì)南 250014)

蘋果幼果原花青素抗氧化研究

劉濤瑞1，韓利文2

(1.山東省實(shí)驗(yàn)中學(xué)，山東 濟(jì)南 250000；2.山東省科學(xué)院生物研究所，山東 濟(jì)南 250014)

蘋果幼果;原花青素;抗氧化;自由基

1 儀器與材料

分析天平，電熱恒溫水浴鍋，紫外可見分光光度計(jì)；DPPH、FeSO4、水楊酸、Tris、鄰苯三酚、無水乙醇、H2O2、HCl等。

2 DPPH·自由基的清除實(shí)驗(yàn)

2.1 反應(yīng)原理

DPPH·是一種穩(wěn)定的自由基，其孤對電子在517nm附近有深紫色強(qiáng)吸收。當(dāng)加入自由基清除劑后，孤對電子被配對，吸收消失或減弱，因此可以根據(jù)吸收減弱的程度來評價自由基清除劑的活性。

2.2 DPPH·儲備液配制

精密取DPPH 39.8 mg定溶于500 mL 50%乙醇中，充分振搖，完全混勻，配成0.2 mol/mL儲備液，避光4℃保存，用時稀釋一倍。

2.3 DPPH實(shí)驗(yàn)方法

用50%乙醇配置2 mg/mL的蘋果原花青素溶液，分別吸取0.2,0.3,0.4,0.5,0.6 mL兩組于刻度試管中，50%乙醇補(bǔ)齊至2.0 mL向其中一組加入DPPH溶液至2 mL，搖勻30 min后，用50%的乙醇做參比在517 nm波長下測其吸光度，即為Ai；向另一組中加入50%乙醇至2 mL，混合后測其吸光度，即為Aj；同時測定2 mL DPPH溶液與2 mL 50%的乙醇混合后的吸光度，即為A0；根據(jù)下列公式計(jì)算清除率SA：DPPH自由基清除率SA(%)=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%

3 ·OH自由基的清除實(shí)驗(yàn)

3.1 反應(yīng)原理

H2O2與Fe2+混合會產(chǎn)生·OH自由基，但由于·OH具有較高反應(yīng)活點(diǎn)，存活時間短，因此必須在反應(yīng)體系中加入水楊酸，以便可以有效地捕捉·OH自由基，水楊酸與·OH自由基結(jié)合可以產(chǎn)生有色產(chǎn)物，該產(chǎn)物在510 nm處有強(qiáng)吸收，若加入具有·OH自由基清除劑能力的抗氧化劑后，會與水楊酸爭奪·OH自由基，從而減少有色產(chǎn)物生成量，造成吸光強(qiáng)度的改變。

3.2 ·OH自由基實(shí)驗(yàn)方法

用50%乙醇配置4 mg/mL的蘋果原花青素溶液，吸取0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL于刻度試管中，50%乙醇補(bǔ)齊至1.0 mL，分別依次加入6 mmol/L FeSO4溶液1mL、6 mmol/L水楊酸溶液1mL搖勻，最后加入6 mmol/L H2O2溶液1mL，搖勻，37℃水浴反應(yīng)30 min后于510 nm 處測得不同抗氧化劑濃度下的吸光度Ai；如上操作，用50%乙醇代替H2O2時測得蘋果原花青素的本底吸光度Aj；同時用1mL 50%乙醇代替蘋果原花青素測得空白對照吸光度A0；清除率SA(%)=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%

4.1 反應(yīng)原理

鄰苯三酚在堿性條件下發(fā)生自氧化反應(yīng)，產(chǎn)生穩(wěn)定濃度的超氧陰離子自由基與中間物，中間物又與超氧陰離子自由基反應(yīng)，得到一種帶有顏色的中間產(chǎn)物，此物在紫外有吸收，引起波長320 nm處吸光值的線性積累，來反應(yīng)抗氧化劑的清除能力的大小。

Tris溶液：稱取Tris 1.211 g，用水定容至100 mL，得0.1 mol/L Tris溶液。HCl溶液：量取36% 38% HCl 0.429 mL，用水溶解定容至100 mL，得0.05 mol/L HCl溶液，將其稀釋5倍得10 mmol/L HCl溶液。

Tris-HCl緩沖液：加入50 mL 0.1 mol/L Tris溶液和45 mL 0.05 mol/L HCl溶液,混勻，用0.05 mol/L HCl溶液調(diào)到pH值分別為8.2。

鄰苯三酚溶液：稱取0.0378 g鄰苯三酚，用10 mmol/L HCl溶解定容至100 mL,得3 mmol/L鄰苯三酚溶液。

量取pH值為8.2的Tris-HCl緩沖液5 mL分別加入0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 mL的4 mg/mL蘋果原花青素溶液，用雙蒸水補(bǔ)充至9.7 mL，置于10 mL比色管中混均，在25℃水浴中保溫20 min，取出后立即加入在25℃預(yù)熱過的3 mmol/L鄰苯三酚0.3 mL，迅速搖勻后倒入比色皿中，在320 nm波長處，每間隔1 min測吸光值一次，共反應(yīng)9 min，以吸光值A(chǔ)對反應(yīng)時間t作線性關(guān)系圖，斜率即為Vt,，計(jì)算出抗氧化劑對超氧陰離子的清除率(Y)。V0為鄰苯三酚自氧化速率。

5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

5.1 原花青素DPPH清除試驗(yàn)

圖1 原花青素DPPH清除效果

如圖1所示，蘋果原花青素對DPPH自由基有很好的清除效果，隨著體系中原花青素濃度的增加，DPPH自由基清除能力逐漸增強(qiáng)，說明DPPH的清除能力與樣品的濃度呈現(xiàn)較好的量效關(guān)系。樣品濃度從0.1 mg/mL到0.3 mg/mL對DPPH自由基的清除率從18.6%增大到61.8%；DPPH抑制曲線y = 2.1720x 0.0634，IC50為0.2594 mg/mL。而0.1 mg/mL VC對DPPH 自由基的清除即達(dá)95.3%。因此，在相同的濃度范圍蘋果原花青素提取物的DPPH清除率低于VC。

5.2 原花青素·OH自由基清除試驗(yàn)

如圖2所示，在測試濃度范圍內(nèi)(0.2 1.0 mg/mL)，蘋果原花青素對(·OH)自由基呈現(xiàn)出較好抑制效果；濃度1.0 mg/mL時(·OH)自由基清除率可達(dá)到69.1%，但隨著樣品濃度，抑制率逐漸增長緩慢；對照品Vc濃度0.2 mg/mL時(·OH)自由基清除率可達(dá)99.3 %，抑制效果也高于樣品。蘋果原花青素·OH自由基抑制曲線y = 0.5685x 0.1793，IC50為0.5641 mg/mL。

圖2 原花青素·OH自由基清除效果

圖3 原花青素自由基清除效果

6 結(jié)論

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(本文文獻(xiàn)格式：劉濤瑞，韓利文.蘋果幼果原花青素抗氧化研究[J].山東化工，2017，46(10)：55-56,61.)

Study on Antioxidant Procyanidins in Apple Fruit

LiuTaorui1,HanLiwen2

(1. Shandong Experimental High School,Jinan 250010,China;2. Biological Institute of Shandong Academy of Sciences, Jinan 250010,China)

apple fruit; procyanidins; antioxidant; free radical

2017-04-15

劉濤瑞(2001—)，山東濟(jì)南人， 學(xué)生；通訊作者：韓利文(1980—)，山東濟(jì)南人，副研究員，博士，主要從事斑馬魚藥物篩選評價、藥物代謝組學(xué)等研究。

S663.9

A

1008-021X(2017)10-0055-02