金銀花有效成分綠原酸的提取工藝研究

黃廣君， 梁錦添，蔣小云

(1.南寧學院機電與質量技術工程學院, 廣西 南寧 530200;2.廣西大學生命與科學技術學院, 廣西 南寧 530004)

金銀花有效成分綠原酸的提取工藝研究

黃廣君1*， 梁錦添2，蔣小云2

(1.南寧學院機電與質量技術工程學院, 廣西 南寧 530200;2.廣西大學生命與科學技術學院, 廣西 南寧 530004)

以廣西產金銀花為原料，對其有效成分綠原酸的提取工藝進行研究。采用酸醇回流提取法，探索不同條件下對金銀花樣品中綠原酸提取率的影響因素。結果表明，單因素實驗最佳提取條件：提取溶劑為80%乙醇溶液，料液比為1:30，酸度為pH值=5, 提取時間為150min；正交實驗得出的最佳提取條件：提取溶劑為70%乙醇溶液，料液比1:30，pH值為3，提取時間為150min，按正交實驗最佳提取條件提取金銀花樣品中綠原酸，綠原酸提取率為8.18%。

金銀花 綠原酸 提取工藝

金銀花(Honeysuckle )成分復雜，主要含有有機酸、黃酮類、三萜類、醇類、微量元素和揮發油等。近年來金銀花的產品質量以其含有的有效成分為主要指標，綠原酸(Chlorogenic acid)作為金銀花中藥理活性最強的主要成分之一，使得對金銀花中綠原酸的研究已成為判定金銀花產品質量的重要標準之一[1-4]。根據藥典規定[5]，藥用金銀花中綠原酸的含量必須達到1.5%，金銀花的藥用指標中綠原酸占據著重要的作用。本實驗對綠原酸的提取工藝進行了研究，采用酸醇回流提取法，探索不同條件下對金銀花樣品中綠原酸提取率的影響因素。

1 實驗材料

1.1 材料與試劑

金銀花(廣西忻城縣)；NaOH 、H2SO4、無水乙醇、KCL等均為分析純。

1.2 儀器與設備

超聲波清洗機(SB-5200D)；離心機(MICROFUGE 16 Centrifuge)；電子分析天平(PL2002)；紫外可見光分光光度計(U V 27 0 0)。

2 結果與分析

2.1 金銀花預處理

新鮮釆集去雜后的金銀花花蕾攤平于瓷盤中，置于60℃電熱鼓風干燥箱中恒溫干燥24h至干。將烘干的金銀花花蕾樣品于中草藥粉碎機中粉碎，過80目篩，樣品裝入磨口瓶中，4℃冰箱保存備用[6]。

2.2 酸醇回流法提取綠原酸

準確稱取2.00g金銀花粉末樣品，置于500mL燒瓶中。加入70%的CH3CH2OH溶液400mL，以1moL/L的H2SO4溶液和10%NaOH溶液在酸度計中調節pH值=4.00(±0.05)后，置于100℃水浴回流提取120min，回流提取一次。提取結束后，待提取液冷卻至室溫，布氏漏斗抽濾，棄濾渣，濾液于低速離心機5000r/min離心5min，收集濾液于100mL容量瓶中，以70%CH3CH2OH溶液定容，4℃冰箱保藏待用。準確加入0.1mL提取液于試管中，加入無水乙醇9.9mL于試管中，搖勻。于UV-2700紫外分光光度計,250～500nm波長范圍內進行紫外光譜掃描。掃描結果表明其最大吸收波長為330nm，與文獻報道的最大吸收波長相符，即實驗方法可行。紫外光譜譜圖見圖1。

圖1 提取液紫外光譜圖Fig.1 UV spectra of extract

圖2 綠原酸標準溶液紫外光譜圖Fig.2 UV spectra of chlorogenic acid standard solution

2.3 綠原酸的定量方法

準確稱取2.00mg金銀花標準品于小燒杯中，用無水乙醇溶解，完全溶解后轉移至50mL容量瓶定容，即得到濃度為40μg/mL的綠原酸標準對照溶液。準確吸取綠原酸標液3.50，4.00，4.50，5.00，5.50mL于10mL容量瓶中，以無水乙醇定容，即得14，16，18，20，22 μg/ mL的標準工作液。設三組平行樣，以無水乙醇為參比液,取20μg/mL標準工作液于UV-2700紫外分光光度計上250nm～500nm波長范圍內進行光譜掃描，掃描結果顯示其最大吸收波長為330nm, 見圖2。設定測定波長為330.0nm，分別測定不同濃度的標準液吸光值，以綠原酸的濃度C為橫坐標，吸光值A為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程式為A=0.05595～0.06603, 相關系數R2=0.00026。取2.2中的提取液各1mL,置于1.5mL EP管中，于12000r/min離心5min，精確吸取0.1mL于干燥試管中，準確加入9.9mL無水乙醇，搖勻后，用無水乙醇為空白對照，在330nm波長下測吸光值，每組提取液做三個平行樣，取平均值計算綠原酸提取率。綠原酸提取率的公式如下。

式中：A——金銀花提取液中的吸光度；W——金銀花中綠原酸的提取率，%；V——金銀花提取液的體積，mL，；N——測吸光度時濾液稀釋倍數； M——金銀花粉末的質量，g。

2.4 單因素實驗

2.4.1 乙醇濃度對金銀花中綠原酸提取率的影響

圖3 乙醇濃度對綠原酸提取率的影響Fig.3 Effect of ethanol concentration to the extraction of chlorogenic acid

圖4 料液比對綠原酸提取率的影響Fig.4 Effect of liquid ratio to the extraction of chlorogenic acid

由圖3可知，乙醇濃度在50%～90%范圍內，隨著乙醇濃度增大，綠原酸提取率逐漸提高，在80%時達最高，最高值為6.192%。在50%～80%之間金銀花中綠原酸提取率隨乙醇濃度的增大而增大，可能是因為80%乙醇濃度的極性更接近金銀花中綠原酸極性，使金銀花中綠原酸得到較充分的釋放，但是濃度達到80%之后，綠原酸的提取率反而降低，可能是因為高濃度乙醇溶液使細胞內蛋白質凝固, 綠原酸不易溶出而導致綠原酸提取率下降，因此最佳乙醇提取濃度為80%。

2.4.2 料液比對金銀花中綠原酸提取率的影響

由圖4可知，隨著料液比的增大，綠原酸提取率逐漸提高，料液比從1:15到1:20時綠原酸提取率的增長較快，可見提取液的增加大大提高了傳質速率，使得提取率明顯增加；料液比在1:20之后，提取率增加速度明顯變慢，這因為金銀花中綠原酸含量是一定的,當提取溶劑增加到一定程度的時候,金銀花中綠原酸提取的增長速度就會變慢；綜合考慮，料液比選擇1:30為宜。

2.4.3 提取時間對金銀花中綠原酸提取率的影響

由圖5可知，隨著回流提取時間的增長，金銀花中綠原酸的提取率明顯增加，而當時間大于150min 后，綠原酸的提取率呈降低趨勢，這是由于長時間加熱致使綠原酸部分分解作用造成的，可見,提取時間過長對綠原酸的提取不利，因此本實驗中最佳提取時間為150min。

2.4.4 pH值對金銀花中綠原酸提取率的影響

由圖6可知，綠原酸的提取率具有不規律性, 當提取溶液的pH值向酸堿兩個方向移動時, 綠原酸的提取率提取率不斷減少，這是因為綠原酸為極性有機酸酯，往往通過水解和分子內酯基遷移而產生異構化；當提取溶液的pH呈現較強的酸性或堿性時,金銀花中的綠原酸會因為pH的變化而發生一定的化學反應或本身性質發生變化,從而不易被提取出來；當pH等于5時，樣品中綠原酸提取率達最高值。

圖5 提取時間對綠原酸提取率的影響圖Fig.5 Effect of extracting time to the extraction of chlorogenic acid

圖6 pH值對綠原酸提取率的影響Fig.6 Effect of PH value to the extraction of chlorogenic acid

2.5 正交實驗

在單因素實驗的基礎上，選取影響綠原酸提取的四種因素，即pH值、乙醇濃度、料液比、提取時間，分別記作A、B、C、D，進行四因素三水平L9(34)正交實驗。提取液稀釋200倍后，在330nm波長處測量各樣品吸光值，處理數據結果見表1。

表1 綠原酸L9(34) 正交表

表1(續)

由表1可以看出，對綠原酸提取率影響因素依次是乙醇濃度，料液比，提取時間，影響因素最少的是pH值。根據各試驗因子的總和或平均數可以看出，A=A1，B=B2，C=C2，D=D3時綠原酸的提取量最高，即金銀花中提取綠原酸最優的提取條件為：pH=3，乙醇濃度70%，料液比1:30，提取時間150min。

3 結論

從單因素實驗結果來看，為得到更高的綠原酸提取率，各因素的最優條件分別為：乙醇濃度80%，料液比1:30， pH值=5, 提取時間150min；正交實驗中所得最優提取條件：料液比為1:30，乙醇濃度為70%，pH值為3，提取時間為150min。正交實驗結果有兩項因素與單因素實驗結果略有差別。分析可得，在從金銀花中提取綠原酸的過程中，各因素并不是單獨對提取率產生影響，從圖1中可看出，只改變乙醇濃度時，70%分子質量的乙醇與80%分子質量的乙醇提取率差距不顯著。通過研究單因素實驗與正交實驗，得出實驗室中使用酸醇提取法從金銀花中提取綠原酸的最佳提取條件：料液比為1:30，乙醇濃度為70%，pH值為3，提取時間為150min。以上條件下進行多次重復實驗，結果穩定，獲得最大提取率為8.18%。

實驗以廣西本地金銀花為原料，利用法酸醇回流提取法對金銀花中綠原酸的提取工藝進行了研究，逐一探索各單因素的最優條件，并用正交試驗尋找出實驗室提取綠原酸的最佳綜合條件，為更好的開發廣西大量金銀花資源提供實驗依據。

[1] 蘭雪萍,郭思杙,李焰芳,等.金銀花中綠原酸的大孔樹脂純化工藝[J].食品科技,2015,40(8):223-228.

[2] 靳維榮,李廣華,孫 強,等. 自然誘變品種紅金銀花中綠原酸含量初探[J].現代中藥研究與實踐,2011,25( 5) : 22．

[3] 景小琦 ， 武雪芬 ， 雷敬衛．金銀花枝葉中初黃酮、無機元素和蛋白質含量測定[J].河南中醫,2001,21(4)：66-67

[4] 王立娟．金銀花的研究進展[J]．醫學信息，2010，5(8)：2293-2295

[5] 國家藥典委員會.中國藥典[S]. 北京: 中國醫藥科技出版社，2010:205．

[6] 吉永奇, 朱文學.金銀花干燥工藝試驗研究[J].食品科技，2008(6)79-82.

(本文文獻格式：黃廣君， 梁錦添，蔣小云.金銀花有效成分綠原酸的提取工藝研究[J].山東化工，2017，46(10)：9-11.)

Study on the Extracting Technology of ChlorogenicAcid as Honeysuckle′s Active Ingredigent

HuangGuangjun1*,LiangJintian2,JiangXiaoyun2

(1. School of Mechanical-Electronic and Quality Engineering, Nanning University, Nanning 530200,China;2.College of Life Science and Technology of Guangxi University, Nanning 530004,China)

The extracting technology of chlorogenic acid from Guangxi was studied. The influence factors of chlorogenic acid extracting rate in the sample of honeysuckle were explored by using the method of acid reflux extraction. The results showed that the best extraction conditions of single factor experiment were: extraction solvent was 80% ethanol, ratio of material to liquid was 1:30, pH=5, extraction time is 150min. The extraction conditions were by orthogonal experiment were: the extraction solvent was 70% ethanol , the ratio of material was 1:30,extraction time was 150 min, the extracting rate of chlorogenic acid was 8.18%.

honeysuckle;chlorogenic acid;extracting technology

2017-03-07

南寧學院2013年度校級教授培育工程項目(2013JSGC-7) ;南寧學院2014年校級科研項目(2014XJ11);南寧學院教學質量與教學改革工程項目(2014XJZDZY05)

黃廣君(1982—)，碩士，講師，研究方向：天然產物化學。

TS201.4

A

1008-021X(2017)10-0009-03