注射用蘭索拉唑細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法研究

李曉春， 王莉芳， 徐長根

(陜西省食品藥品檢驗(yàn)所藥理室，陜西 西安 710065)

注射用蘭索拉唑細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法研究

李曉春， 王莉芳， 徐長根

(陜西省食品藥品檢驗(yàn)所藥理室，陜西 西安 710065)

目的 ：建立注射用蘭索拉唑細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。方法：按《中國藥典2010年版二部》附錄ⅪE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法及相關(guān)規(guī)定，使用兩個廠家鱟試劑對3批注射用蘭索拉唑進(jìn)行干擾試驗(yàn)和細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。結(jié)果：稀釋樣品濃度至0.1 mg/mL時，可排除干擾。結(jié)論：注射用蘭索拉唑可適用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法控制質(zhì)量。

注射用蘭索拉唑；細(xì)菌內(nèi)毒素；鱟試劑；干擾試驗(yàn)

注射用蘭索拉唑是白色粉末狀物，屬于新一代質(zhì)子泵抑制劑[1]，分布于胃粘膜壁細(xì)胞的酸性環(huán)境后 ，轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘拇x物。這種代謝物與存在于酸生成部位的H+-K+-ATP酶結(jié)合，通過抑制H+-K+-ATP酶的活性而抑制酸分泌，臨床常用于各種類型的腐蝕性食道炎的治療，包括反流性食管炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍，亦用于口服療法不適用的伴有出血的十二指腸潰瘍[2-3]。根據(jù)《中國藥典2010年版》注射劑檢驗(yàn)通則(附錄212-213)[4-6]，靜脈用注射劑要進(jìn)行熱原檢查或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查?！吨袊幍?010年版》中沒有收錄注射用蘭索拉唑，但在國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)中是采用家兔法控制熱原的。家兔法存在試驗(yàn)條件要求較高、操作較為繁瑣和影響因素多等缺點(diǎn)，而細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法具有快速靈敏、重現(xiàn)性好、簡便易行等優(yōu)點(diǎn)。因此對于注射用蘭索拉唑更傾向于采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。為提高該品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，加強(qiáng)藥品質(zhì)量控制，本文對注射用蘭索拉唑采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的可行性進(jìn)行了研究，現(xiàn)介紹如下。

1 材料

1.1 儀器

DHG-9245A電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；ZH-2自動渦旋混合器(天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠)；移液器(Eppendorf Research Plus)。

1.2 藥品與試劑

注射用蘭索拉唑，(規(guī)格30mg/支，批號140201、140318、140624，某制藥有限公司)；細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(WSE，規(guī)格80 Eu/支，批號150601-201377,中國食品藥品檢定研究院)；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(BET水，規(guī)格5 mL/支，批號160006-201401，中國食品藥品檢定研究院)；鱟試劑(TAL，規(guī)格0.1 mL/支，靈敏度0.5 Eu/mL，批號1205162，湛江博康海洋生物有限公司；批號1204061，湛江安度斯生物有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 鱟試劑靈敏度(λ)復(fù)核

將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用BET水溶解，在渦旋混合器上混勻15min，然后稀釋成2.0、1.0、0.5、0.25 λ(λ為靈敏度標(biāo)示值)4個濃度等級，按《中國藥典2010年版二部》附錄(Ⅺ E)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行靈敏度復(fù)核試驗(yàn)，結(jié)果見表1所示。

表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核

注：+表示反應(yīng)呈陽性 -表示反應(yīng)呈陰性

結(jié)果顯示，2批鱟試劑靈敏度測定值(λc)均在0.5 λ～2 λ之間，結(jié)果均符合規(guī)定。

2.2 細(xì)菌內(nèi)毒素限值(L)的確定

根據(jù)細(xì)菌內(nèi)毒素限值L=K/M，式中K為規(guī)定給藥途徑，人每千克體重每小時最大可接受的細(xì)菌內(nèi)毒素劑量，注射劑K為5 Eu/( kg·h); M為人用每千克體重每小時的最大供試品劑量，按照注射用蘭索拉唑說明書用法用量，注射用蘭索拉唑?yàn)殪o脈滴注，通常成年人一次30mg，一日2次，推薦靜滴時間30min。中國人均體重按60kg計算，則M為1 mg/(kg·h)，則L = K/M = 5 Eu/(kg·h)/1mg/(kg·h)= 5Eu/mg。

2.3 供試品最小有效稀釋濃度(MVC)的確定

由于本品為注射用無菌粉末，按《中國藥典2010年版二部》附錄ⅪE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中供試品最小有效稀釋濃度可按公式MVC=λ/ L計算，L為注射用蘭索拉唑的細(xì)菌內(nèi)毒素限值5Eu/mg，λ為鱟試劑標(biāo)示靈敏度。目前市售鱟試劑的λ常為0.5、0.25、0.125、0.06、0.03 Eu/mL，則對應(yīng)的供試品的MVC為0.1、0.05、0.025、0.012、0.006mg/mL。

2.4 干擾試驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)

用BET水將轉(zhuǎn)移因子注射液分別制成10、5、1、0.5、0.1、0.05、0.025mg/mL的系列溶液，作為供試品陰性對照(NPC)系列，另制備與NPC系列相同濃度的供試品系列溶液，使每一稀釋度的供試品溶液中都含有2λ的細(xì)菌內(nèi)毒素，作為供試品陽性對照(PPC)系列。每一供試品濃度重復(fù)2管，按常規(guī)設(shè)立陽性對照(PC)管和陰性對照(NC)管。用λ為0.5 Eu/mL的鱟試劑與上述系列溶液按照藥典方法進(jìn)行反應(yīng)。恒溫37±1℃，保溫60±2min觀察結(jié)果，結(jié)果見表2、表3、表4。

表2 注射用蘭索拉唑干擾試驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 注射用蘭索拉唑干擾試驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表4 注射用蘭索拉唑干擾試驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

從表2、3、4可以看出，用兩個廠家生產(chǎn)的鱟試劑進(jìn)行干擾試驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果是一致的，質(zhì)量濃度為0.5mg/mL及以上的供試品對鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素之間的凝集反應(yīng)有抑制作用，但稀釋至質(zhì)量濃度為0.1mg/mL或更低時，抑制作用消失。理論上可選擇供試品質(zhì)量濃度為0.1、0.05、0.025mg/mL中的任一溶液，采用相應(yīng)靈敏度的鱟試劑進(jìn)行干擾試驗(yàn)，為了簡化供試品的稀釋操作步驟和降低對鱟試劑靈敏度要求，本試驗(yàn)選擇質(zhì)量濃度為0.1mg/mL的供試品溶液，用λ為0.5Eu/mL的鱟試劑進(jìn)行干擾正式試驗(yàn)。

2.5 正式干擾試驗(yàn)

根據(jù)干擾試驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇注射用蘭索拉唑0.1mg/mL濃度進(jìn)行正式干擾試驗(yàn)。用供試品0.1mg/mL濃度溶液及BET水分別稀釋細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，配制成細(xì)菌內(nèi)毒素最終濃度分別為1.0、0.5、0.25、0.125 Eu/mL的系列溶液，分別取0.1 mL加入到已復(fù)溶的兩個不同廠家生產(chǎn)的鱟試劑(λ為0.5 Eu/mL)管內(nèi)，每個濃度平行做4管，另取BET水做2支陰性對照管，進(jìn)行干擾試驗(yàn)。結(jié)果見表5。

表5 注射用蘭索拉唑正式干擾試驗(yàn)結(jié)果

表5結(jié)果顯示Et/Es在0.5～2.0之間(Es為用BET水制成的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值，Et為用供試品溶液制成的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值)，按照《中國藥典》的判斷標(biāo)準(zhǔn)，供試品0.1mg/mL濃度溶液對鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素之間的凝集反應(yīng)既無抑制作用，也無增強(qiáng)現(xiàn)象，說明使用鱟試劑方法檢查注射用蘭索拉唑中細(xì)菌內(nèi)毒素是可行的。

2.6 供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

取3批注射用蘭索拉唑，配制成0.1mg/mL濃度溶液，使用兩個廠家的鱟試劑(λ為0.5 Eu/mL)，按《中國藥典》二部附錄Ⅺ E細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法檢查，每1mg注射用蘭索拉唑中含細(xì)菌內(nèi)毒素的量應(yīng)小于5Eu，結(jié)果均符合規(guī)定。結(jié)果見表6。

表6 注射用蘭索拉唑細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用2個廠家的鱟試劑，是因?yàn)椴煌瑥S家的鱟試劑在質(zhì)量參數(shù)、生產(chǎn)工藝等方面有一定差異，其抗干擾的能力也存在差異。所以，通過采用2個廠家的鱟試劑對3個批號的供試品進(jìn)行試驗(yàn)，可客觀地評價供試品的稀釋濃度對鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素發(fā)生凝集反應(yīng)的干擾程度，初步篩選出對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無干擾的供試品濃度范圍，以判斷該方法是否可行[7-10]。

在干擾試驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)中，要考察同時滿足2個廠家鱟試劑及3批供試品都不產(chǎn)生干擾的供試品濃度，以確定正式干擾試驗(yàn)的供試品濃度，不可以僅以某個單一廠家的某一批供試品的濃度作為正式試驗(yàn)濃度，以免造成結(jié)果偏差，給該品種的檢驗(yàn)工作帶來困擾。本文將注射用蘭索拉唑的限值從8.33Eu/mg提高到5Eu/mg，不干擾濃度從文獻(xiàn)中的0.06mg/mL提高到0.1mg/mL。在該濃度下，對鱟試劑和細(xì)菌內(nèi)毒素的凝集反應(yīng)未有干擾，可以認(rèn)為該品種以5Eu/mg限值進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的方法是可行的?？梢詾樵撈贩N的細(xì)菌內(nèi)毒素控制從家兔法修訂為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法提供一定的試驗(yàn)依據(jù)。

[1] 馬革委.鱟試劑法檢測注射用蘭索拉唑的細(xì)菌內(nèi)毒素[J]. 北方藥學(xué)，2015，12(6)：99-100.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版二部[S] 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄99-102.

[3] 中國藥品生物制品檢定所.中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[S]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：310-325.

[4] 張義偉. 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的幾點(diǎn)體會[J]. 中國實(shí)用醫(yī)藥，2010，5(3)：86-87.

[5] 張 橫，蔡 彤，高 華.鹽酸莫西沙星注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法學(xué)研究[J].中國藥事，2014，28(12)： 1298-1302.

[6] 楊海燕.帕拉米韋注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的研究[J].中國藥事，2016，30(2)：133-136.

[7] 楊秀成.采用鱟試劑檢查心脈隆注射液中細(xì)菌內(nèi)毒素的可行性研究[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2010，26(11)：1660-1661.

[8] 曾敏華，楊為群.丹參川芎嗪注射液中熱原檢查方法的研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，16(6)：111-112.

[9] 宋天琪，田子新.氟[18F]脫氧葡糖注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的方法學(xué)驗(yàn)證[J].天津藥學(xué)，2010，22(1)：3-5.

[10] 吳 婷，李 薇.單硝酸異山梨酯注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，7(12)：68-70.

(本文文獻(xiàn)格式：李曉春， 王莉芳， 徐長根等.注射用蘭索拉唑細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法研究[J].山東化工，2017，46(04)：70-72.)

Study on the Bacterial Endotoxin Test in Lansoprazole for Injection

LiXiaochun，WangLifang，XuChanggen

(Shaanxi Institute for Food and Drug Control, Shaanxi Province, Xi'an 710065, China)

OBJECTIVE To establish the bacterial endotoxin inspection method of Lansoprazole for Injection. MEHTODS According to bacterial endotoxin inspection method and the related regulations of the Chinese Pharmacopoeia 2010 volume Ⅱappendix ⅪE, different products of tachypleus amebocyte lysate(TAL) were used for the investigation of interference and bacterial endotoxin test on three batches of sample. RESULTS Lansoprazole for Injection did not interfere with bacterial endotoxin test when it was diluted to the concentration of 0.1mg/mL. CONCLUSION It is feasible to control quality of Lansoprazole for Injection by bacterial endotoxin test.

lansoprazole for injection; bacterial endotoxin; tachypleus amebocyte lysate; interference test

2016-011-17

李曉春(1982—)，女，內(nèi)蒙古阿拉善人，主管藥師，研究方向：食品藥品檢驗(yàn)及藥理學(xué)研究。

R927

A

1008-021X(2017)04-0070-03