牛結核病防控技術研究進展

努爾拜合提·努爾旦 加伊娜古力

（1.新疆畜牧科學院獸醫研究所（新疆畜牧科學院動物臨床醫學研究中心），新疆烏魯木齊 830011；2.新疆維吾爾自治區動物衛生監督所，新疆烏魯木齊 830011）

伴隨著牛結核病控制與根除目標實施后，牛結核病防控技術有所成就。現階段，傳統的單一皮試法已經難以達到高標準性要求；隨之而來的是皮試法、IFN-γ體外釋放、ELISA抗體檢測、膠體金抗體檢測。根據目標實施后，不同國家結合本地區病情風險狀態與發生率選擇適合的檢測方法，防止錯殺隱性個體，效果顯著。

1 牛結核病檢測技術

1.1 IFN-γ體外釋放法

該方法是在血液檢測的實驗室環境下的檢測方法，其流程為：第一，獲取抗凝全血并和抗原展開共孵育，刺激活化的T淋巴細胞產生IFN-γ；設置植物刺激素與PBSS刺激的陰性對照。第二，獲取上層血漿且通過夾心ELISA方法檢測IFN-γ。現階段，已經有60%的國家紛紛通過平行試驗或系列試驗，即：平行試驗通過皮試方法展開牛群檢查，檢查結果呈現陰性的牛再次通過IFN-γ體外釋放方法重新檢測；若有一項試驗為陽性即為感染。系列試驗則是通過皮試方法進行牛群檢測，呈現陽性的牛群通過IFN-γ體外釋放再次檢測，兩種檢測全部為陽性即為陽性。但是要注意二次檢測時間間隔應達到10d，降低兩次檢測對結果的影響。

1.2 皮試法

皮試方法在牛結核病診療中一直都是OIE官方推薦的標準方法，其中包含單皮試方法與比較皮試法。參照OIE推薦指標，皮試法內PPD-B與PD-A注射劑量不可低于2000IU。如果采取比較皮試法需要注射兩種結核菌素，注射位置應保持一定距離。我國對皮試法的判斷標準為：在局部出現炎性反應，皮后差大于4mm即為陽性。炎性反應不顯著，2mm<皮厚差<4mm后，疑似反應。無炎性反應，皮厚差<2mm后判斷為陽性。盡管判斷為疑似反應的牛，在初次檢測60d后再次檢測，如果仍然為疑似反應，則間隔60d后再次檢測若仍然疑似反應，應診斷為陽性。

1.3 抗體檢測方法

第一，ELISA抗體檢測。該種檢測方法也是現階段牛結核病檢測輔助方法，具有操作簡便的優勢，選擇具有高免疫原性的蛋白作為抗原從而提升檢測精準度。例如：把MPB70-MPB83-CFP10-ESAT-6蛋白串聯作為抗原分析，構建的ELISA抗體檢測和細菌培養符合率達到78%。第二，膠體金抗體檢測。該種方法是在免疫層析技術的抗體檢測，在敏感性與特異性上較低。據調查顯示，在數百份細菌培養陽性樣本中，膠體金法的陽性檢出率在46%，161分細菌培養陰性樣本內，膠體金方檢測陽性檢出率為48%。不過，膠體金法的顯著特征是方便、快速，只需10min就能夠看出效果，適用于欄圈旁操作。

2 牛結核病防治中檢測技術的使用

2.1 抗體法和IFN-γ體外釋放法的結合

已經感染結核病的牛群，一些國家會選擇把IFN-γ體外釋放方法和抗體檢驗展開平行試驗。例如：韓國使用抗體檢測展開根除較為成功，牛結核病控制與預防方案有明顯的完善。從較早皮試法治抗體檢測，以及當前抗體檢查的和IFN-γ體外釋放的結合利用。首先，通過抗體檢測進行牛群檢查，對陽性個體展開IFN-γ體外釋放方法實驗檢測，消除陽性個體盡可能地降低錯殺率。

2.2 皮試法

愛爾蘭通過皮試法進行牛結核病檢測，政府有關獸醫職能部門與私營單位共同通過單一的比較皮試方法進行牛群檢驗。陽性牛若出現應立即殺滅，控制其移動；同圈牛展開復查并禁止貿易。定期對牛群展開檢測，直到全部牛群在持續2次檢測內全部為陰性。

2.3 高敏感度方法使用野生動物結核病檢測

據調查顯示，我國有三分之一的牛結核病防控和野生動物結核病有著密切聯系，例如：南非水牛、梅花鹿、新西蘭負鼠，它們都是牛分枝桿菌的宿主攜帶著結核菌進而也是其重要傳染體。各國家對于野生動物結核病檢測使用方法不同，例如：澳大利亞使用單一皮試法，增加PPD用量；愛爾蘭則使用比較皮試法進行牛結核病檢測。并且不同國家有著不同的判斷方法。不過，因為野生動流動性強、基數大進行全部檢測與免疫是不可能，盡管已經有國家實施野生動物結核病免疫。但是，仍然難以確保野生動物免疫成功。所以，野生動物結核病依然是疫病控制的主要問題。

3 結語

現階段，國內牛結核病判斷是根據結核菌素皮試方法，牛一旦檢測為陽性應立即撲殺。不過，由于動物數量龐大，撲殺投入較大，皮試方法特異性低，一些養殖戶撲殺后效果不明顯。因此，落實具有較大難度。IFN-γ體外釋放方法也是當前較為成熟的技術，檢測更加精準，降低誤殺率，所以推薦使用單皮試法與IFN-γ體外釋放方法結合檢測。首先通過單皮方法檢測，陽性牛再次通過IFN-γ體外釋放檢測，若全部為陽性應展開撲殺。針對已經暴露牛群則需要使用兩種方法平行檢測，反應陰性牛使用IFN-γ體外釋放檢測，若為陰性即為健康牛。反之，應及時隔離。此外，也要定期進行野生動物與屠宰場牛結核病監督管理。

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