不同因素對藍莓莖段組織培養(yǎng)的影響

李華娟　韋海　陸素君

摘要：以藍莓莖段為外植體，研究不同的外值體類型、基本培養(yǎng)基、激素組合對藍莓啟動階段、增殖階段、生根階段產(chǎn)生的影響。結(jié)果表明：最容易萌發(fā)的外植體類型為幼嫩枝，萌芽率可達853%，增殖培養(yǎng)基以WPM+ ZT10 mg/L+6BA05 mg/L+NAA03 mg/L最佳，生根誘導培養(yǎng)基則以1/2WPM+NAA10 mg/L+活性碳10 g/L為最好，生根率可達95%以上。

關鍵詞：藍莓 莖段增殖生根

中圖分類號：S7939文獻標識碼：A文章編號：1004-3020（2017）03-0021-03

Abstract： Effects of the combination of explant types， basal medium and hormone on the bourgeoning， proliferation and rooting of blueberry were studied with the stems as the explants. Results showed that the best explants were tender branches on budding， with the budding rate reached 85.3%. Medium of “WPM+ZT1.0mg/L+6BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L” was the best on bud proliferation while medium of “1/2WPM+NAA1.0mg/L+ activated carbon 1.0g/L” was the most excellent on rooting， which made the rooting rate above to 95%.

Key words：blueberry stem；segments；proliferation； take root

藍莓也稱篤斯越橘，屬落葉小灌木，藍莓果實風味獨特，營養(yǎng)豐富[1]，其保健包括增強視力、防止眼睛疲勞、防止腦神經(jīng)老化、抗癌、軟化血管、增強人體免疫力等功效，被譽為“世界第三代水果之王”，具有較高的經(jīng)濟價值和廣闊的開發(fā)前景[2-4]。面對日益擴張的市場需求，以扦插為主的育苗技術顯然滿足不了市場需求。因此，通過組織培養(yǎng)的方式進行繼代增殖，進而短期內(nèi)獲得大量的生根試管苗，滿足市場的需求。

1材料與方法

1.1材料

供試材料品種為藍莓中的“粉藍”品系，由博白縣沙河藍莓種植基地提供。

1.2方法

1.2.1外植體取材與消毒

選擇生長健壯、無病蟲害、當年生枝條為試驗材料，去除葉片后剪取2～25 cm長帶腋芽莖段，用自來水沖洗干凈，再用純凈水清洗三遍，隨后在超凈工作臺上滅菌，使用75%的酒精消毒15～20 s左右，再用無菌水清洗三遍，最后用0.1%的升汞溶液浸泡3～10 min[5]，（視材料木質(zhì)化程度而定）無菌水沖洗4～5遍。接種于MS+6BA0.5 mg/L+NAA0.1 mg/L培養(yǎng)基上。15天后統(tǒng)計無菌材料與萌芽率，試驗安排見表1。

1.2.2芽的增殖

以N6、WPM、MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的ZT、6BA， NAA，采用正交表（L934）[6]對不同組合處理，3次重復，每處理接種10瓶，每瓶1個莖段，每5天觀察一次，20天后記錄芽的增殖情況、長勢等。試驗安排見表2。

1.2.3試管苗生根

以1/2WPM為基本培養(yǎng)基，采用正交表（L934）附加不同濃度的IBA、NAA、AC，三次重復，每處理接種5瓶，每瓶接種10株長約3 cm左右生長健壯的芽條。每10天觀察一次，50天后記錄苗的生根情況、苗的長勢等。

1.3其他培養(yǎng)條件

N6、MS培養(yǎng)基中蔗糖30 g/L，瓊脂粉55 g/L，pH60；WPM培養(yǎng)基中蔗糖20 g/L，瓊脂粉60g/L，pH55，培養(yǎng)溫度均為（25±1）℃， 誘導增殖階段弱光培養(yǎng)，光強度約800 lx，生根階段光強度為1 000～1 500 lx （生根初期 1000 lx）。

2結(jié)果分析

2.1不同木質(zhì)化程度的莖段在不同的消毒時間對無菌率及萌芽率的影響

不同的處理結(jié)果見表4，由表中結(jié)果可知，隨著枝條的木質(zhì)化程度越高，即使消毒時間有所增加，污染率也很高，而萌芽率也是隨著苗木木質(zhì)化程度越高而降低。因此，最佳用來誘導的枝條是幼嫩枝，消毒時間為3 min，萌芽率可達853%。

2.2基本培養(yǎng)基與激素配比對藍莓芽增殖的影響

由表5可知，不同處理之間的藍莓芽增殖系數(shù)、芽高、及生長狀況等相差較大，在不添加有任何激素的培養(yǎng)基里而衡量芽增殖效果最直接的指標就是增殖系數(shù)，因此對增殖系數(shù)進行方差與極差分析，結(jié)果表明，不同培養(yǎng)基類型、ZT對藍莓的增殖影響達到極顯著水平，而6BA、NAA對增殖影響不顯著，說明影響藍莓芽增殖主導因子是基本培養(yǎng)基與ZT。從k值大小來看，培養(yǎng)基以WPM、ZT10 mg/L、6BA05 mg/L、NAA03 mg/L為理想的理論組合，從實際試驗結(jié)果來看，處理9即WPM+ ZT10 mg/L+6BA05 mg/L也適合作增殖培養(yǎng)基。

2.3不同因素對藍莓生根誘導的影響

由表7可知，不同處理間生根率、根長、側(cè)根情況相差較大，對不同因子間的生根率進行方差分析，結(jié)果表明，活性碳的添加對藍莓生根產(chǎn)生極顯著影響，是決定著試管苗生根與否的關鍵，NAA、IBA對生根影響不顯著。從k值以及根長以及側(cè)根情況來看，活性碳10g/L，NAA05 mg/L與10 mg/L效果一樣，因此最佳的藍莓生根誘導處理為1/2WPM+NAA05mg/L+活性碳10 g/L或者1/2WPM+NAA10 mg/L+活性碳10 g/L，而在處理3上恰好反映了這一點，并且綜合生根率、根長、側(cè)根情況來看，該組合均是最好的。

3結(jié)論與討論

（1）試驗結(jié)果表明，適合藍莓誘導的莖段為頂芽幼嫩部位，易消毒易萌發(fā)。

（2）在藍莓繼代增殖中， WPM+ZT10 mg/L+6BA05 mg/L+NAA03 mg/L及WPM+ ZT05 mg/L+NAA03 mg/L均適合作為增殖培養(yǎng)基。而需要注意的是高濃度的6BA易產(chǎn)生大量的愈傷組織，無法分化成有效芽。

（3）生根培養(yǎng)中，活性炭的添加是誘導生根成敗的關鍵，在沒有活性炭的培養(yǎng)基里，無論是何種激素都無法誘導出有效根系，僅在切口基部形成極短如根毛狀，雜亂無序的無效根，無法移栽成活。因此，最適合生根的培養(yǎng)基配方為1/2WPM+NAA05 mg/L+活性碳10 g/L或者1/2WPM+NAA10 mg/L+活性碳10 g/L，生根率可達到95%以上。

參考文獻

[1]王小菁，陳剛，李明軍，等.植物生長調(diào)節(jié)劑在植物組織培養(yǎng)中的應用[M].北京：化學工業(yè)出版社，2010.102153.

[2]王嘉祥.藍槳果優(yōu)良品種及栽培技術 [J].中國南方果樹，2005，34（4）：58.

[3]李亞東，吳林，劉洪單，等.越橘果實中營養(yǎng)成分分析[J].北方園藝，2004（3）：2223.

[4]王連潤，吳忠榮，李坤明，等.藍莓試管苗移栽及苗期管理技術[J].云南農(nóng)業(yè)科技，2009（5）：48.

[5]邱運亮，段鵬慧，趙華.植物組培快繁技術.北京[M]：化學工業(yè)出版社，2010.37.

[6]北京林業(yè)大學.數(shù)理統(tǒng)計.北京[M].北京：中國林業(yè)出版社.1980：296299.

（責任編輯：夏劍萍）