硫乙醇酸鹽流體培養基的選擇

夏潔敏+朱澄

摘 要 為選擇適合的硫乙醇酸鹽流體培養基，延長培養基的有效期，通過初篩（性價比、溶解性和澄清度）和培養基適應性的持續穩定性考察，篩選出符合要求的培養基品牌。

關鍵詞 硫乙醇酸鹽流體培養基 有效期 篩選

中圖分類號：R927.1 文獻標識碼：B 文章編號：1006-1533（2017）15-0088-03

Screening of the fluid thioglycollate medium

XIA Jiemin*， ZHU Cheng

（Shanghai Haohai Biological Technology Co.， Ltd.， Shanghai 201613， China）

ABSTRACT To select a suitable fluid thioglycollate medium with a longer period of validity. A medium brand meeting our requirement was finally selected by comparing their price， solubility， clarity and stability.

KEY WORDS fluid thioglycollate medium； period of validity； screening

硫乙醇酸鹽流體培養基可以在普通有氧環境下提供厭氧條件，使需氧菌和厭氧菌都能夠生長良好，并易于觀察結果[1]，是《中國藥典》（2015版）中指定用于無菌檢查用的兩種培養基之一[2]。

硫乙醇酸鹽流體培養基的氧化層（粉紅色）是由培養基中作為氧化還原的指示劑的刃天青引起的，在氧化時呈紅色[3]。《中國藥典》（2015版）中對其氧化層的要求，是為了確保培養基的厭氧層能夠滿足厭氧菌的生長條件需要。

我公司QC實驗室原先使用的某品牌硫乙醇酸鹽流體培養基由于存在使用時間上的局限（儲存條件均為2～8 ℃），保存超過1周，其培養基氧化層高度即超過培養基深度的1/5，需要加熱后使氧化層消失才能夠符合要求；而保存超過1個月再用于無菌檢查，培養后其氧化層即超過培養基深度的1/2，不能滿足要求。基于以上兩點限制，其有效期被局限在1個月內。

由于硫乙醇酸鹽流體培養基的適用性檢查涉及3種試驗菌株[4]，為了在確保培養基質量的同時，減少培養基適用性檢查的頻次、減小資源負擔，提出了延長培養基有效期的需求。本研究通過考察不同品牌脫水培養基在實用性方面的差異，篩選合適的品牌，將硫乙醇酸鹽流體培養基制備后的有效期延長到3個月。

1 材料與方法

1.1 試劑與設備

硫乙醇酸鹽流體培養基A、B、C、D分別購自上海博微生物科技有限公司、上海盛思生化科技有限公司、Oxoid公司和BD公司；HTY-602集菌儀（浙江泰林生物技術股份有限公司）；XG1.U脈動真空滅菌鍋（山東新華醫療器械股份有限公司）；SHP-250生化培養箱（上海森信實驗儀器有限公司）；BHC-1300I2A2生物安全柜（蘇州市金凈凈化設備科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 不同品牌硫乙醇酸鹽流體培養基的選擇與獲取

市售的成品培養基在容器內充氮，可以很好地解決培養基氧化層的問題。但是市售成品培養基的價格是脫水培養基的5～10倍，性價比不具備競爭力。因此確定本次研究考察對象為脫水培養基，由QC實驗室自行配制分裝滅菌。本研究硫乙醇酸鹽流體培養基的分裝規格以及保存條件為：用250 ml規格的鹽水瓶分裝220 ml硫乙醇酸鹽流體培養基，壓蓋滅菌后冷卻至室溫，儲存于2～8 ℃。以上這種儲存條件是為了盡量通過密閉條件降低由于空氣流通所帶來的培養基中水分的流失，減少對培養基性狀的影響[ 5]

1.2.2 不同品牌硫乙醇酸鹽流體培養基的初篩

1）考察脫水培養基的溶解性 不同品牌的脫水培養基配制過程中其溶解度存在差異。QC實驗室單次配制培養基的數量為200瓶，體積較大，故應盡量選擇不需要加熱或加熱時間短就能溶解的脫水培養基，以減少培養基配制過程中的加熱工序，提高工作效率。

2）考察脫水培養基滅菌后的澄清度 不同品牌的脫水培養基滅菌后的澄清度存在差異。澄清度較好的培養基有利于在進行無菌檢查試驗的逐日觀察中盡早發現微生物的生長情況。

1.2.3 培養基品牌的確定

對按照統一分裝規格和保藏條件保存的各品牌培養基進行每周觀察一次其氧化層高度占培養基的比例（藥典要求不超過1/5），確認不同時間段培養基氧化層的情況，以便確定下一步進行培養基適用性檢查的培養基品牌。

1.2.4 培養基制備后有效期的確認

依據標準的硫乙醇酸鹽流體培養基制備分裝滅菌程序，用同一套滅菌設備連續進行3次滅菌程序的驗證（裝載方式、溫度分布均一性等）。培養基適用性的穩定性試驗按文獻方法操作[6]，培養基分裝鈉鈣輸液瓶后加鹵化丁基膠塞壓蓋密封、滅菌，避光儲存于2～8 ℃。

2 結果

2.1 培養基初篩

脫水培養基溶解性和滅菌后的澄清度結果見表1。

通過各品牌脫水培養基性狀比較可以看出，品牌C和D的脫水培養基溶解性和澄清度較好。

2.2 氧化層考察

氧化層考察結果見圖1和圖2。

每月進行一次無菌試驗，觀察14 d培養后氧化層高度占培養基的比例（藥典要求不超過1/2）（圖2）。

2.3 培養基適用性考察

1）儲存時間考察 各品牌培養基儲存時間見表2。

比較以上四個品牌培養基的價格（折算成相同規格），A∶B∶C∶D=2∶2∶3∶4.5。

綜合考慮以上情況，初步確定選擇品牌C的脫水培養基作為今后的QC實驗室用硫乙醇酸鹽流體培養基，并進行下一步的培養基適應性檢查的持續穩定性考察，以確定配制后的培養基有效期能否達到3個月的目標。

2）穩定性考察 以Oxoid培養基進行的持續穩定性考察結果見表3。

結果表明，在2～8 ℃避光保存4個月后，無菌試驗均符合藥典無菌檢查用培養基的各項要求。綜合考慮，確定培養基配制滅菌后的有效期為3個月。

3 討論

通過對硫乙醇酸鹽流體培養基的研究考察，選擇到一個能將有效期從1個月延長到3個月且符合法規要求的培養基，成功降低了硫乙醇酸鹽流體培養基的適用性檢查頻次，提高了培養基管理的工作效率，減少了用于培養基適用性檢查的資源消耗，降低了培養基適用性檢查過程對環境的污染。同時提高了培養基配制工作的簡便性和實驗結果觀察的便捷程度。

在文獻中提到[4]，可以通過比較不同廠商培養基在相同條件下促菌生長試驗的速度來進行篩選，但從實驗數據看，不同廠商培養基可以觀察到陽性現象的時間差距僅為4 h，差別不大（分別為16 h和20 h），而培養基適用性試驗的要求是在3 d內觀察到陽性現象。因此，簡單地通過比較不同廠商培養基在相同條件下促菌生長試驗的速度來對培養基進行考察是有局限性的，引入統計分析對培養基促微生物生長能力進行對比研究、并綜合考慮多方面因素對培養基進行考察和篩選，獲得的結果對實踐更具有指導意義[7]。

各個實驗室都有各自特色的培養基儲存方式和儲存條件[5-6]，如用硅膠塞及牛皮紙捆綁包裹瓶口，在2～8℃避光儲藏；旋緊密封旋蓋，在2～25 ℃儲存。不同存儲方式和儲存條件對培養基的有效期的影響不同[8-10]。我公司QC實驗室采用鈉鈣輸液瓶加鹵化丁基膠塞壓蓋密封，在2～8 ℃避光儲藏的方式，將硫乙醇酸鹽流體培養基的有效期延長到了3個月。從培養基持續穩定性考察的結果來看，如果有必要，還可以在4個月的期限內滿足培養基適用性檢查的要求。但是培養基有效期的確定還應當與實驗室的培養基消耗量、儲存空間相匹配，并不是越長越好。

同時，實驗室的培養基管理并不能將某一品種的培養基孤立起來看待，而是應當將實驗室使用的各個種類培養基當做一個整體，進行綜合考慮。以上這種培養基的選擇方法還可以應用到微生物實驗室其他常用培養基上（如TSB、TSA、R2A等），并且進一步加深考察的內容，從多方面綜合考慮實驗室培養基的選擇（如統一培養基的滅菌溫度、提高培養基配制效率、減少培養基適用性檢查頻次等），減少由于培養基滅菌溫度不一致造成差錯的風險，進一步提高培養基管理的工作效率，減少資源消耗、降低對環境的污染。

參考文獻

[1] 王似錦， 高春. 硫乙醇酸鹽流體培養基成分、歷史起源及應用研究進展[J]. 中國藥業， 2014， 23（1）： 92-94.

[2] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典（2015年版）四部[M]. 北京： 中國醫藥科技出版社， 2015： 136.

[3] 吳九玲. 硫乙醇酸鹽流體培養基的特點及問題分析[J]. 廣東化工， 2009， 36（6）： 109， 259.

[4] 李天翥， 龔翠. 按照《中國藥典》2015版對不同廠商檢驗用培養基篩選的考察與研究[J]. 系統醫學， 2016， 1（9）： 131-137.

[5] 陳曉燕. 藥品微生物限度檢查用培養基儲存期限的探討[J]. 中國醫藥指南， 2014， 12（19）： 111-112.

[6] 劉茜， 姜俊慧， 張慧慧， 等. 藥品檢驗用培養基配制及滅菌后貯存有效期的研究[J]. 藥學研究， 2015， 34（2）： 80-83.

[7] 楊曉莉， 李輝， 楊靜， 等. 中、美、英、歐藥典無菌檢查用培養基促微生物生長能力對比研究[J]. 西北藥學雜志， 2013， 28（6）： 619-622.

[8] 李玉香. 淺談微生物實驗室培養基質量控制存在的問題及改進方法[J]. 中國科技博覽， 2009（29）： 248.

[9] 姜海燕. 淺談微生物檢測中培養基的質量控制[J]. 中國現代藥物應用， 2011， 5（1）： 247-248.

[10 王麗娟. 有關藥品微生物限度檢查用培養基儲存時限問題的探討[J]. 科技與企業， 2013（24）： 501.