齊墩果酸滴丸的質量標準研究

李 祥，梁 穎，楊新建（天津市中醫藥研究院附屬醫院，天津 300120）

齊墩果酸滴丸的質量標準研究

李 祥＊，梁 穎#，楊新建（天津市中醫藥研究院附屬醫院，天津 300120）

目的：建立齊墩果酸滴丸的質量標準。方法：鑒別制劑性狀，檢測制劑重量差異、溶散時限；采用超高效液相色譜法測定制劑中齊墩果酸的含量：色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18，流動相為乙腈-水（70∶30，V/V），流速為0.30 mL/min，檢測波長為206 nm，柱溫為30℃，進樣量為5 μL。結果：制劑鑒別特征明顯，丸重差異為37.62%～46.56%，溶散時間均為24 min。齊墩果酸檢測質量濃度線性范圍為0.006～0.06 mg/mL（r＝0.999 8）；精密度、穩定性、重復性試驗的RSD＜2.0%；加樣回收率為99.34%～100.40%（RSD＝0.4%，n＝6）。結論：該研究所建標準可用于齊墩果酸滴丸的質量控制。

齊墩果酸滴丸；超高效液相色譜法；齊墩果酸；質量標準

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish the quality standard of Oleanolic acid dripping pills.METHODS：The property of the preparation was identified，and weight difference and dissolution time limit were detected.UPLC method was adopted to determine the content of oleanolic acid in the preparation.The determination was performed on ACQUITY UPLC BEH C18column with mobile phase consisted of acetonitrile-water（70∶30，V/V）at the flow rate of 0.30 mL/min.The detection wavelength was set at 206 nm，the column temperature was 30℃，and the sample was 5 μL.RESULTS：The characteristics of the preparation was significant；weight difference ranged 37.62%-46.56%；dissolution time limit was 24 min.Linear range of oleanolic acid ranged 0.006-0.06 mg/mL（r＝0.999 8）.RSDs of precision，stability and reproducibility tests were all lower than 2.0%.The recoveries were 99.34%-100.40%（RSD＝0.4%，n＝6）.CONCLUSIONS：Established standard can be used for quality control of Oleanolic acid dripping pills.

KEYWORDSOleanolic acid dripping pills；UPLC；Oleanolic acid；Quality standard

齊墩果酸是一種五環三萜類化合物，以游離或糖苷形式廣泛存在于世界各地的植物中[1]。經檢測，山茱萸、山楂、女貞子、木瓜、烏梅、連翹、石榴皮、柿蒂、夏枯草等119種植物中均含有齊墩果酸[2]；該成分常用檢測方法為薄層掃描法、高效液相色譜法（HPLC）、超高效液相色譜法（UPLC）等[3-8]。我院自行研制了齊墩果酸滴丸，并按照2015年版《中國藥典》要求制定了質量標準，以期為齊墩果酸滴丸的質量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

ACQUITYⅠ型UPLC儀，包括紫外檢測器（美國Waters公司）；AG285型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；KE-100E型超聲波清洗器（昆山禾創超聲儀器有限公司，功率：250 W，頻率：40 kHz）；WD08-1型全自動滴丸機（天津市昂大科技發展有限公司）。

1.2 藥品與試劑

齊墩果酸滴丸（天津市中醫藥研究院附屬醫院制劑室自制，批號：20151211、20151225、20160105，規格：3 mg/丸）；齊墩果酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：20140406，純度：≥98.5%）；聚乙二醇-4000、二甲基硅油均為藥用規格，甲醇、乙睛為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別（齊墩果酸）

取樣品10丸，加醋酐2 mL，水浴加熱使溶解，振搖，加硫酸3滴，即顯紫紅色；取樣品10丸，加三氯甲烷5 mL，水浴加熱使溶解，加硫酸5滴，即顯橙紅黃色至橙紅色；取樣品5丸，加香草醛冰醋酸液（取香草醛0.5 g，加冰醋酸10 mL使溶解，即得）0.5 mL，加高氯酸1 mL，水浴加熱使溶解，溶液顯紫色。

2.2 檢查

2.2.1 重量差異 按2015年版《中國藥典》（四部）“通則0108”項下[9]要求檢查3批樣品（每批20丸）重量差異，詳見表1。結果表明，3批樣品重量差異在±10%范圍內，符合規定。

2.2.2 溶散時限 按2015年版《中國藥典》（四部）“通則0108”項下[9]要求檢查3批樣品（每批6丸）的溶散時限，詳見表2。結果表明，3批樣品溶散時限均為24 min（＜30 min），符合規定。

表1 重量差異測定結果Tab 1 Results of weight difference determination

表2 溶散時限檢查結果Tab 2 Results of dissolution time limit

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動相：乙腈-水（70∶30，V/V）；流速：0.30 mL/min；檢測波長：206 nm；柱溫：30℃；進樣量：5 μL。在上述色譜條件下，理論板數以齊墩果酸峰計＞14 900；各成分基線分離良好，分離度＞1.5，詳見圖1。

圖1 超高效液相色譜圖Fig 1 UPLC chromatorgams

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取齊墩果酸對照品12 mg，置于l00 mL量瓶中，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，加甲醇定容，經0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 取樣品10丸，研細，準確稱取約含齊墩果酸12 mg的細粉，置于100 mL三角瓶中，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液移至100 mL量瓶中，加甲醇定容，即得。

2.3.4 線性關系考察 準確量取“2.3.2”項下齊墩果酸對照品溶液0.5、1、2、3、4、5 mL，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇定容，制成質量濃度分別為0.006、0.012、0.024、0.036、0.048、0.06 mg/mL的系列對照品溶液。精密量取上述系列對照品溶液各5 μL，按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以齊墩果酸質量濃度（x，mg/mL）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得齊墩果酸回歸方程y＝23 906x+1 953（r＝0.999 8）。結果表明，齊墩果酸檢測質量濃度線性范圍為0.006～0.06 mg/mL。

2.3.5 精密度試驗 取“2.3.2”項下對照品溶液適量，按“2.3.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果，齊墩果酸峰面積的RSD為0.56%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.3.6 穩定性試驗 取“2.3.3”項下供試品溶液（批號：20151211）適量，分別于室溫下放置0、5、10、15、24 h時按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，齊墩果酸峰面積的RSD為1.09%（n＝5），表明供試品溶液室溫放置24 h內基本穩定。

2.3.7 重復性試驗 精密稱取同一批樣品（批號：20151211）適量，按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，齊墩果酸峰面積的RSD為0.58%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.3.8 回收率試驗 取已知含量樣品（批號：20151211）適量，共6份，按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算回收率，結果見表3。

表3 回收率試驗結果（n＝6）Tab 3 Results of recovery tests（n＝6）

2.3.9 樣品含量測定 取3批樣品各適量，分別按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品含量。結果，3批樣品（批號：20151211、20151225、20160105）齊墩果酸的平均含量分別為3.029、3.002、2.927 mg/丸。

4 討論

本研究在建立UPLC法測定齊墩果酸滴丸中齊墩果酸含量的方法時，參考文獻[10]，以甲醇-0.1%磷酸-三乙胺為流動相，其吸收峰有拖尾，分離效果不能滿足標準制定要求。最終確定以乙腈和水作為流動相，能夠在較短時間內測定，且峰形良好，無拖尾現象。同時本試驗發現，UPLC的溶劑洗脫強度稍弱于HPLC。由于UPLC色譜柱填料粒徑較小，流路管線較細，因此流動相和供試品溶液需經0.22 μm微孔濾膜濾過。

綜上所述，本研究建立的UPLC法特異性強、重復性好，與傳統的HPLC分離方法比較，分析時間短，操作簡便，靈敏度高，精密度及穩定性良好，所建標準可用于齊墩果酸滴丸的質量控制。

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（編輯：張 靜）

Study on Quality Standard of Oleanolic Acid Dripping Pills

LI Xiang，LIANG Ying，YANG Xinjian（The Affiliated Hospital of Tianjin Academy of TCM，Tianjin 300120，China）

R927

A

1001-0408（2017）21-2994-03

2016-11-03

2017-03-28）

＊主管藥師。研究方向：醫院制劑研發。電話：022-27285099

#通信作者：主任藥師。研究方向：醫院制劑研發。E-mail：changzhengyj@sina.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.21.32