生脈注射液對自體脂肪顆粒移植存活率的影響

林輝，張晶晶，李紅光（廣西中醫藥大學第一附屬醫院激光整形美容科，廣西 南寧 530022)

生脈注射液對自體脂肪顆粒移植存活率的影響

林輝，張晶晶，李紅光
（廣西中醫藥大學第一附屬醫院激光整形美容科，廣西 南寧 530022)

目的探索生脈注射液對自體脂肪顆粒移植存活率的影響。方法9只兔建立自體脂肪顆粒移植動物模型，隨機分為3組，實驗組肌肉注射不同劑量的生脈注射液，對照組肌肉注射生理鹽水。檢測血清中VEGF 含量，成活脂肪的質量，計算移植脂肪的存活率。結果實驗各組移植脂肪組織存活率和VEGF 含量均明顯高于對照組。結論生脈注射液可以明顯提高自體脂肪移植的存活率和存活質量。

生脈注射液；脂肪移植；兔；存活率

近年來，中醫藥在促血管新生作用逐漸被引起重視，單味藥與方劑在促進新血管生成及提高促血管新生因子表達方面的研究均取得較多進展。生脈具有抑制促炎細胞因子和改善血流，增加機體抗缺氧能力，保護細胞，促進血管新生等作用。但生脈注射液能否促進自體脂肪移植的血管新生尚未有定論。本實驗發現生脈注射液對于提高移植脂肪組織新生血管的形成有較大幫助，明顯提高兔自體脂肪移植的存活率和存活質量。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材 料

生脈注射液（四川川大華西藥業股份有限公司）；VEGF的ELISA試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）；磷酸鹽緩沖液、鹽酸氯胺酮注射液、健康新西蘭大白兔9只，雌雄不限，由廣西中醫藥大學動物實驗中心提供，體質量2.5～3.0Kg。

1.2 實驗方法

1.2.1 建模兔術前先稱重記錄，然后將兔固定在實驗臺上。氯胺酮全麻滿意后，手術部位備皮，用碘伏將兔耳部及腹股溝消毒，鋪巾。于腹股溝切開取出腹股溝脂肪團約2.5ml，立即沖洗，剪碎，放入裝有生理鹽水的10ml注射器內，繼續剪成直徑1mm左右的脂肪顆粒。裝有脂肪顆粒注射器放入離心機以800r/min離心3min后，去掉下層水、血液及破碎細胞成分等，吸去上層游離油脂。將脂肪顆粒導入1ml注射器內，接16G注脂頓針頭由穿刺口進入兔耳背皮下組織剝離，邊退針邊注射。兔雙耳背部移植區，共4處，每側耳背兩處移植區不相連，每處0.5ml。

1.2.2 分組9只兔建模成功后隨機分成3組：對照組3只行肌肉注射無菌水0.37ml·Kg-1·d-1；實驗1組3只行肌肉注射生脈注射液0.37ml·Kg-1·d-1；實驗2組3只行肌肉注射生脈注射液0.74ml·Kg-1·d-1，均每天用藥，連續用藥2周。

1.2.3 標本采集與檢測 術后13周行脂肪移植塊標本取材，于耳背皮下丘狀隆起中間處切開，在包膜表面，頓性與銳性結合剝離，完整取下脂肪移植塊，修剪去表面包膜，然后用精密天平準確測量脂肪移植塊質量。移植脂肪存活率=移植后樣本質量/移植前質量×100%。移植塊稱量后置入10%福爾馬林固定24h，經過沖洗、脫水、浸泡、浸蠟、包埋和切片等步驟后，行HE染色。脂肪移植術后1周、2周、4周、6周、8周于耳緣靜脈采血，每只采血1ml，放入離心機以1 500 r/min離心5 min后，移液器吸取上層血清，移入冷凍管，將裝好的冷凍管迅速置入-80 ℃超低溫冰箱保存。術后13周，將樣品從冰箱取出，用恒溫水浴箱解凍，然后取樣品，按照ELISA試劑盒說明書，經過包被抗體洗滌、加樣品孵育洗滌、加入酶標再孵育洗滌和加底物顯色等步驟，最后在酶標儀下讀取吸光值，得到VEGF含量。

1.2.4 統計學方法采用SPSS20.0統計軟件，所有數據用xs±表示，VEGF含量比較采用單因素方差分析進行檢驗，移植物質量和存活率比較采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

圖1 各組血清VEGF表達

2 結 果

2.1 大體觀察

實驗過程中動物無死亡，耳背皮下可見丘狀隆起的脂肪移植物，移植的脂肪組織無移位及擴散，未見壞死及液化。實驗各組脂肪組織移植物體積均明顯大于對照組，實驗2組稍大于實驗1組。

2.2 移植物質量和存活率

術后13周,實驗1組脂肪質重(0.5923±0.1074)g，脂肪存活率（65.9±6.2）%；實驗2組脂肪質重(0.5976±0.1062)g，脂肪存活率（66.5±7.6）%；對照組脂肪質重(0.3613±0.0916)g，脂肪存活率（40.2±6.3）%。實驗各組脂肪移植物質量和存活率與對照組差異有顯著性（P ＜0.05）。

2.3 VEGF含量

術后1周、2周、4周和6周，實驗各組VEGF含量是先升高后降低，而對照組VEGF含量基本沒有變化。實驗各組VEGF含量與對照組差異有顯著性（P＜0.05）。（圖1）

2.4 組織學觀察

HE染色顯示，實驗各組均可見周圍新生血管較豐富，新生脂肪細胞大小一致，脂肪小葉結構接近正常脂肪組織, 脂肪組織間纖維間隔少，仍見散在前脂肪細胞聚集。實驗2組對比實驗1組的新生脂肪細胞大小更一致，但以上差別不明顯。對照組移植脂肪組織中周圍新生血管不明顯,有較多脂肪細胞凋亡和壞死，脂滴融合在一起，形成較多大小不等囊泡樣改變，脂肪細胞排列不整齊，纖維間隔較多，有炎性細胞反應。（圖2）

圖2 各組移植物的組織學改變(HE,×100)

3 討 論

Kotaro Yoshimura[1]等提出了移植脂肪的三分層理論：最外層的存活區，中間的再生區和中心的壞死區。中央部分的脂肪組織由于缺血缺氧時間過長，極易發生了壞死，引發感染、硬結、囊腫等后遺癥。由此可見，影響自體顆粒脂肪移植成活的關鍵是移植脂肪應盡早建立充分的血供，移植脂肪應盡快完成血管化。血管內皮生長因子(VEGF)能刺激血管內皮細胞、骨髓間充質干細胞的增殖以及多種血管活性物質的合成和分泌[2］。VEGF能夠增強微靜脈和小靜脈血管通透性，調節與促進血管網絡重構成熟，維持血管功能、影響血流動力學和組織愈合等作用。

在脂肪移植中加入VEGF，證實VEGF可促進移植物的血運重建，提高脂肪成活率和移植物的質量[3]。

生脈注射液具有益氣養陰、復脈固脫、活血化瘀等功效，臨床廣泛用于病毒性心肌炎、急性胰腺炎、休克及配合化療治療某些癌癥等。張育彬[4]發現生脈注射液可有效促進血管內皮細胞分泌NO，保護血管內皮功能, 并促進血管內皮細胞分泌VEGF, 促進血管新生增多, 降低炎癥反應。曹艷花[5]等證實生脈注射液可明顯提高缺氧復氧損傷乳鼠心肌細胞的SOD、ATP活性, 降低LDH、MDA水平, 從細胞水平表明生脈注射液具有保護細胞作用。低劑量生脈成骨膠囊兔血清可促進ECV304細胞分泌VEGF，提示這可能是生脈促進血管生成的主要作用機制之一[6]。多項研究已證實，生脈注射液能夠使細胞分泌VEGF，提高局部血供，從而促進局部組織生長與修復[7,8]。鑒于生脈注射液能夠降低炎癥反應、保護細胞、分泌VEGF和促進血管新生增多等作用，由此推測生脈注射液可能促進移植脂肪組織血管新生，提高移植脂肪存活率和存活質量。

本實驗結果顯示，在自體脂肪移植術后13周，實驗兩組自體脂肪移植存活率和質量均明顯高于對照組。HE切片染色觀察顯示，脂肪細胞大小與形態、新生毛細血管數量、移植脂肪組織纖維化程度等方面，實驗組均優于對照組。提示生脈注射液可以增加移植脂肪組織內血供，加速移植物新生血管的形成，從而增加自體脂肪移植存活率和質量。實驗兩組的血清VEGF在脂肪移植術后的不同時間段的含量均明顯高于對照組。提示生脈注射液可能提高細胞分泌VEGF，增加血管內皮細胞增殖和遷移，促進脂肪內部血管新生，加快移植脂肪內部血供的重建，增強血管通透性，提高脂肪內部細胞所需要的營養，減少移植物液化、壞死；VEGF又可以增加機體及移植脂肪組織抗缺氧能力，保持移植物順利度過缺血、缺氧期，進一步提高了自體脂肪移植存活率和存活質量。

本實驗雖然證實生脈注射液可以提高自體脂肪移植存活率和存活質量，但生脈注射液成分復雜，仍需要進一步研究哪種成分起作用，還有生脈注射液或者這種成分能否通過提高脂肪干細胞或前體細胞增殖、向脂肪細胞轉化等，還有待進一步體內外實驗。

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[4] 張育彬.生脈注射液對老年冠心病不穩定型心絞痛NO 、VEGF及hs-CRP 的影響[J].長春中醫藥大學學報,2007,25(5):39-40.

[5]曹艷花,劉珊珊.生脈注射液對乳鼠心肌細胞缺氧復氧損傷的保護作用[J]. 山東醫藥,2010,50(14):38-39.

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Effects of shengmai injection on the survival rate of fat autografts

LIN Hui,ZHANG Jing-jing,LI Hong-guang
(Department of Laser and Plastic Surgery, The First Affliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medical ，NanNing ，530022,，China)

Objective To investigate the infuence of shengmai injection on the survival rate of fat autografts .Methods Autologous fat was transplanted on rabbit to establish an animal model. Nine rabbits were randomly divided into 3 groups. The rabbit were injected different doses of Shengmai injection by intramuscular injection in cexperimental groups The ontrol groups were given normal saline.The content of VEGF in serum were detected , the weight of transplanted fat was determined and the survival rates were computed.Results The survival rate of fat autografts and the level of VEGF expression in experimental groups were signifcantly higher than those in control groups.Conclusion Shengmai injection can dramatically increase the survival rate and quality of fat autografts.

shengmai injection; fat autografting ; rabbit ;survival rate

10.19593/j.issn.2095-0721.2017.07.032

廣西衛計委科研項目（編號:Z2015485）