高靈敏小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA檢測方法的構建

宋秀春，湯迎春，楊 夏

(1.內蒙古呼倫貝爾市人民醫院，內蒙古 海拉爾 021008；2.內蒙古包鋼醫院，內蒙古 包頭 014010)

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高靈敏小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA檢測方法的構建

宋秀春1,2，湯迎春1，楊 夏2

(1.內蒙古呼倫貝爾市人民醫院，內蒙古 海拉爾 021008；2.內蒙古包鋼醫院，內蒙古 包頭 014010)

目的 為從天然化合物中高效篩選具有體液免疫抑制活性的先導化合物，本研究將構建高靈敏且價格低廉的小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA檢測方法。方法 利用山羊抗小鼠IgG的Fc段抗體、生物素標記的山羊抗小鼠IgG的F(ab’)2段抗體、辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素構建小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA檢測方法；通過對包被抗體濃度、檢測抗體濃度和鏈霉親和素濃度的優化，使檢測方法靈敏度達到最高；再利用該檢測方法檢測體外培養小鼠B細胞上清中IgG濃度驗證方法的有效性。結果 在山羊抗小鼠IgG的Fc段抗體濃度達到5 μg·mL-1，生物素標記的山羊抗小鼠IgG的F(ab’)2段抗體濃度達到0.25 μg·mL-1，辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素濃度達到0.5 μg·mL-1，小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA檢測方法靈敏度達到最高(0.05 ng·mL-1)，線性范圍在0.1～10 ng·mL-1；該檢測方法可以高靈敏檢測體外培養LPS刺激小鼠B細胞分泌的IgG抗體。結論 本研究成功構建高靈敏且價格低廉的小鼠免疫球蛋白IgG的ELISA檢測方法。

小鼠免疫球蛋白；IgG；ELISA；靈敏度

自身免疫性疾病、過敏性疾病和器官移植排斥是嚴重危害人類健康的免疫失調性疾病，目前臨床主要應用糖皮質激素、環孢素、他克莫司等免疫抑制劑對其進行治療。由于這些常用免疫抑制劑缺乏特異性，可導致代謝紊亂、血液毒性和肝腎毒性等不良反應，嚴重影響了上述疾病的治療[1-3]。……