櫻桃砧木吉塞拉7號(hào)莖尖快繁技術(shù)

王建萍，李公存，沙玉芬，顧 亮，趙玲玲，張 碩，蘇佳明

(煙臺(tái)市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東 煙臺(tái) 265500)

櫻桃砧木吉塞拉7號(hào)莖尖快繁技術(shù)

王建萍，李公存，沙玉芬，顧 亮，趙玲玲，張 碩，蘇佳明*

(煙臺(tái)市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東 煙臺(tái) 265500)

本試驗(yàn)研究不同濃度激素配比對(duì)吉塞拉7號(hào)莖尖培養(yǎng)的影響。取春季一年生的新梢做外植體，剝?nèi)∮啄矍o尖，接種到不同配方的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，生長(zhǎng)30 d左右，轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基上。結(jié)果表明，莖尖成活率最高的培養(yǎng)基是MS+6-BA 1.0 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1，成活率達(dá)90.0%；最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1+GA30.1 mg·L-1，增殖系數(shù)達(dá)3.9；生根率最高的培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+Ac 0.5 mg·L-1，培養(yǎng)30 d左右，生根率達(dá)89%，平均每株生根4.3條；最佳移栽基質(zhì)是蛭石，成活率達(dá)95.7%。

吉塞拉7號(hào)； 莖尖； 快繁； 櫻桃

利用矮化砧木密植栽培，是實(shí)現(xiàn)果樹優(yōu)質(zhì)、早實(shí)、豐產(chǎn)的重要措施，目前國(guó)內(nèi)大櫻桃生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用的砧木為考特，但是考特喬化程度很高，在一定程度上制約了我國(guó)大櫻桃矮化密植栽培的發(fā)展[1]。吉塞拉(Gisela)大櫻桃矮化砧是由德國(guó)賈斯特斯·里貝哥(Justus Liebig)大學(xué)利用幾種櫻屬植物進(jìn)行種間雜交育成[2]，目前已經(jīng)在歐洲地區(qū)進(jìn)行廣泛的研究和應(yīng)用。其中吉塞拉7號(hào)用作甜櫻桃砧木花量大，早實(shí)、豐產(chǎn)性能高，嫁接樹樹體開張，大小僅為馬扎德砧木的50%。土壤適應(yīng)范圍廣[3]，抗寒、抗?jié)场⒖筆DV病毒。但由于其扦插繁殖比較困難，為加速吉塞拉7號(hào)的推廣應(yīng)用，本試驗(yàn)對(duì)吉塞拉7號(hào)的莖尖快速繁殖技術(shù)進(jìn)行了研究，旨在篩選吉塞拉7號(hào)工廠化生產(chǎn)途徑[4]。

1 材料與方法

1.1 材料

以大櫻桃吉塞拉7號(hào)幼嫩莖尖為試材。

1.2 方法

1.2.1 取材與滅菌

取春季一年生的新梢做外植體，去掉大葉，在自來(lái)水下沖洗30～60 min，然后在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌，滅菌過(guò)程為：先用75%酒精浸泡45 s，然后用0.1%升汞浸泡8～10 min，最后用無(wú)菌水沖洗4～6次。

1.2.2 初代培養(yǎng)

在超凈工作臺(tái)上，將滅菌好的芽放在解剖鏡下，用解剖針仔細(xì)的將幼葉剝?nèi)ィ瑢⑶o尖部分剝離至0.5～1.0 mm大小，接種到預(yù)先配制好的培養(yǎng)基上，基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，蔗糖30 g·L-1，瓊脂7.0～7.3 g·L-1，pH值為5.8，光照強(qiáng)度1 500～2 000 lx，光照時(shí)間為14 h·d-1，培養(yǎng)溫度(25±1)℃，空氣相對(duì)濕度為40%～70%。

1.2.3 增殖培養(yǎng)

初代外植體培養(yǎng)30 d左右，待分化成苗后，轉(zhuǎn)到增殖培養(yǎng)基上。

1.2.4 生根培養(yǎng)

在增殖培養(yǎng)基上增殖4代左右，即可形成一定數(shù)量的試管苗，選取高約1.5 cm以上的健壯幼苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上[5]。

1.2.5 煉苗與移栽

當(dāng)試管苗高約3 cm，并生有3～4條1 cm左右的新根時(shí)，即可煉苗移栽。在自然光下馴化煉苗4～6 d，然后揭開瓶蓋進(jìn)行透氣鍛煉，每天噴清水2～3次，鍛煉3 d后，小心取出幼苗，洗凈根部的培養(yǎng)基進(jìn)行移栽。

2 結(jié)果與分析

2.1 莖尖生長(zhǎng)

不同激素濃度配比對(duì)吉塞拉7號(hào)莖尖誘導(dǎo)分化的影響不一樣。由表1可知，在4號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況最好，成活率為90.0%，平均株高最高，為2.1 cm；在2號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況也較好，成活率為77.1%，但平均株高較低，僅有1.7 cm；在1號(hào)培養(yǎng)基上平均株高較高，為1.9 cm，但成活率較低，為70.4%；在3和6號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)成活率很差，僅為50.0%和48.1%，且平均株高很低，僅為1.1和1.5 cm，其中在5、6號(hào)培養(yǎng)基上易出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。

表1 不同培養(yǎng)基對(duì)吉塞拉7號(hào)莖尖生長(zhǎng)的影響

2.2 增殖培養(yǎng)

不同激素濃度配比對(duì)吉塞拉7號(hào)增殖生長(zhǎng)的影響不一樣。由表2可以看出，在7、8號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好，增殖系數(shù)分別為3.9和3.8，且生長(zhǎng)健壯，叢生芽較多，葉片呈深綠色；在3號(hào)培養(yǎng)基上增殖系數(shù)也較高，為3.6，不定芽分化能力較強(qiáng)，但生長(zhǎng)較為瘦弱，在生根培養(yǎng)時(shí)不易分化出根系；在1、2和5號(hào)培養(yǎng)基上增殖系數(shù)均很低，且生長(zhǎng)瘦弱，叢生芽較少，不適宜進(jìn)行增殖培養(yǎng)，其中在5號(hào)培養(yǎng)基上出現(xiàn)卷葉現(xiàn)象；在4號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況較好，增殖系數(shù)為2.5，生長(zhǎng)較健壯，但叢生芽較少，且嫩芽為淡黃綠色；在6號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況也較好，增殖系數(shù)為2.7，且生長(zhǎng)健壯，叢生芽較多。

表2 不同培養(yǎng)基對(duì)增殖生長(zhǎng)的影響

2.3 生根培養(yǎng)

櫻桃砧木試管苗不易生根，為此進(jìn)行多個(gè)不同激素配比培養(yǎng)基試驗(yàn)。由表3可以看出，吉塞拉7號(hào)在8種培養(yǎng)基上均能長(zhǎng)出根系來(lái)，其中7、8號(hào)培養(yǎng)基生根情況最好，生根率分別為89%和81%，單株生根條數(shù)分別為4.7和4.3條，平均根長(zhǎng)分別為1.5和1.2 cm，且生根均較粗，顏色嫩白色，柔軟不易斷；在1、2號(hào)培養(yǎng)基上生根最差，生根率分別為27%和31%，單株生根條數(shù)分別為1.1和1.3條，平均根長(zhǎng)分別僅為0.2和0.3 cm，且顏色呈淡黃色；在5和6號(hào)培養(yǎng)基上生根情況也較好，但根系較細(xì)，須根少。

表3 不同培養(yǎng)基對(duì)吉塞拉7號(hào)生根的影響

2.4 煉苗與移栽

由表4可知，當(dāng)基質(zhì)為蛭石時(shí)成活率最高，為95.7%；1/2蛭石+1/2珍珠巖基質(zhì)次之，為91.4%；珍珠巖基質(zhì)成活率也較高，為87.1%；草炭土成活率最低，僅為47.1%，且易爛根，這可能是由于透氣性差的緣故。

表4 不同基質(zhì)對(duì)吉塞拉7號(hào)試管苗移栽的影響

3 小結(jié)與討論

激素濃度、種類及不同組合對(duì)外植體的誘導(dǎo)和分化起著重要的作用[6]。李曉青等[7]認(rèn)為，吉塞拉5號(hào)的最佳初代培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1。本試驗(yàn)MS+6-BA+IBA組合也能很好的誘導(dǎo)吉塞拉7號(hào)莖尖分化。試驗(yàn)結(jié)果表明，莖尖成活率最高的培養(yǎng)基是MS+6-BA 1.0 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1，成活率最低的為MS+6-BA 1.0 mg·L-1+IBA 0.3 mg·L-1，可見高濃度6-BA與低濃度的IBA搭配使用，較易誘導(dǎo)吉塞拉7號(hào)細(xì)胞分裂及蛋白質(zhì)合成。相比周遜等[8]的MS+6-BA+NAA組合，本試驗(yàn)中MS+6-BA+IBA+GA3組合也能很好的促進(jìn)吉塞拉7號(hào)芽的增殖。研究結(jié)果表明，最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1+GA30.1 mg·L-1，生長(zhǎng)健壯，叢生芽多；最差為MS+6-BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1+GA30.05 mg·L-1，可見培養(yǎng)叢生芽需要較高濃度的6-BA，GA3在吉塞拉7號(hào)增殖培養(yǎng)中的有一定的影響，較高濃度的GA3能促進(jìn)不定芽及葉片生成。王俠禮等[9]認(rèn)為，吉塞拉5，6號(hào)最佳生根培養(yǎng)基為1/4MS+IBA 1.0 mg·L-1。本試驗(yàn)中1/2MS+IBA+NAA+Ac組合能很好誘導(dǎo)吉塞拉7號(hào)生根，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+Ac 0.5 mg·L-1，最差為1/2MS+IBA 0.2 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+Ac 0.5 mg·L-1。由此可見，較高濃度的NAA能有效的促進(jìn)生根，活性炭含量對(duì)吉塞拉7號(hào)生根的影響不大。移栽時(shí)采用蛭石作為基質(zhì)成活率最高，在珍珠巖中成活率也較高，采用草炭土作為基質(zhì)時(shí)成活率最差。因此試管苗移栽時(shí)須保證基質(zhì)的透氣性，否則易爛根。

[1] 劉慶忠，趙紅軍，王俠禮，等. 新型大櫻桃無(wú)性系矮化砧木吉塞拉(Gisela)[J]. 落葉果樹，2000，32(3)：18-20.

[2] WEBSTER A D，LOONEY N E. Cherries：crop physiology[M]. Production and Uses： CAB International，1997.

[3] 馮社章，范繼紅，紀(jì)書琴，等. 吉塞拉的組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J]. 河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，14(10)：76-79.

[4] 李曉青，張曉申，王慧瑜. 甜櫻桃矮化砧木吉塞拉的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J]. 北方園藝，2008(7)：226-227.

[5] 蘇佳明，沙玉芬，宋連升，等. 櫻桃砧木吉塞拉5號(hào)莖尖培養(yǎng)快繁技術(shù)[J]. 中國(guó)果樹，2005(6)：12-14.

[6] 彭玉輔，管幫富，俞燕芳，等. 長(zhǎng)柄紫果槭愈傷組織培養(yǎng)研究[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2013(7)：34-36.

[7] 李曉青，張曉申，王慧瑜. 甜櫻桃矮化砧木吉塞拉的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J]. 北方園藝，2008(7)：226-227.

[8] 周遜，徐曉舒，陳莉敏. 甜櫻桃砧木高倍快繁技術(shù)研究[J]. 北方園藝，2010(14)：136-137.

[9] 王俠禮，鐘士傳，鄭亞琴，等. 大櫻桃矮化砧吉塞拉(Gisela)的微體快繁技術(shù)體系研究[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2003，19(6)：178.

(責(zé)任編輯：張瑞麟)

2017-03-17

山東省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2006GG3209016)

王建萍(1983—)，山東安丘人，助理農(nóng)藝師，碩士，從事果樹生物技術(shù)研究工作，E-mail：805806757@qq.com。

蘇佳明，高級(jí)農(nóng)藝師，從事果樹生物技術(shù)及育種研究工作，E-mail：sjmytsd@163.com。

10.16178/j.issn.0528-9017.20170602

S663.1

B

0528-9017(2017)06-0917-03

文獻(xiàn)著錄格式：王建萍，李公存，沙玉芬，等. 櫻桃砧木吉塞拉7號(hào)莖尖快繁技術(shù)[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，58(6)：917-919.