食用油中脂肪酸的CGC法分析

周佳，陳芙蓉，張玉霞，寧欣，徐小平

（1.四川大學(xué)華西藥學(xué)院，四川成都610041；2.四川省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院，四川成都610041）

食用油中脂肪酸的CGC法分析

周佳1，2，陳芙蓉1，張玉霞1，寧欣1，徐小平1

（1.四川大學(xué)華西藥學(xué)院，四川成都610041；2.四川省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院，四川成都610041）

采用毛細(xì)管氣相色譜法（CGC）分離鑒定食用清脈油中17種脂肪酸的組成：DB-23型（60m×0.25mm×0.15μm）毛細(xì)管氣相色譜柱；氫火焰離子化檢測(cè)器（FID，260℃）；分流/不分離進(jìn)樣器（250℃）；程序升溫：起始溫度為50℃，1min后以20℃/min升到175℃，再以3℃/min升到190℃，保持3min，最后以5℃/min升到230℃，保持2min。通過與對(duì)照品對(duì)比，清脈油中共分離鑒別出17種已知脂肪酸，其中不飽和脂肪酸的含量高達(dá)90.18%，飽和脂肪酸的含量?jī)H有9.18%，不飽和脂肪酸主要有油酸、亞油酸、亞麻酸等；飽和脂肪酸主要有棕櫚酸、硬脂酸等,其他脂肪酸的含量很少。不飽和脂肪酸與飽和脂肪酸的比例高達(dá)9.82:1。所建立的CGC法可適用于混有12種植物油的食用清脈油中脂肪酸檢測(cè)。

清脈油；脂肪酸；毛細(xì)管氣相色譜法

1 儀器與試劑

1.1 材料

清脈油（成都悟道科技有限公司提供），脂肪酸甲酯對(duì)照品（NU，Chekprep，Inc，M23-W）。

1.2 儀器

安捷倫6890N型氣相色譜儀（美國安捷倫儀器公司）；CPA225D型電子天平（上海速展機(jī)電有限公司）。

1.3 試劑

異辛烷，氫氧化鉀，甲醇，硫酸氫鈉（皆購于天津科密歐化學(xué)試劑有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 樣品的甲酯化

稱取樣品油60mg至具塞試管中，加4mL異辛烷溶解樣品，再加入200μL氫氧化鈉甲醇溶液，蓋上玻璃塞猛烈振搖30 s后靜置至澄清。向溶液中加入約1 g硫酸氫鈉，猛烈振搖，中和氫氧化鈉。待沉淀后，將含有甲酯的上層溶液倒入進(jìn)樣瓶中，用于氣相色譜分析；同樣地，40種脂肪酸甲酯對(duì)照品用2mL異辛烷溶解，然后倒入進(jìn)樣瓶中，用于氣相色譜分析。

2.2 色譜條件篩選

2.2.1 柱子選擇

以固定液極性、分離度和分離時(shí)間為指標(biāo)進(jìn)行色譜柱的評(píng)價(jià)：試驗(yàn)分別篩選了1）DB-23柱（60m× 0.25mm×0.15μm）；2）SP-2560柱（100m×0.25mm× 0.2μm）；3）OV-624柱（30 m×0.53 mm×0.5μm）；4）FFAP柱（30m×0.53mm×1.0μm）[10]。結(jié)果表明，脂肪酸甲酯的專用柱DB-23和SP-2560型毛細(xì)管柱分離效率最好，但SP-2560型因柱較長(zhǎng)，分析時(shí)間更長(zhǎng)。而OV-624和FFAP柱極性偏大，對(duì)酯化后脂肪酸的分離不如前兩根低極性色譜柱。所以最終選擇DB-23型色譜柱作為分析脂肪酸的最佳色譜柱。

2.2.2 程序升溫的選擇

由于清脈油中的脂肪酸成分較多，極性大小不一，為能將所有成分都分離開來，選擇程序升溫法。實(shí)驗(yàn)中篩選5個(gè)條件：

1）起始100℃，保持5min，4℃/min升到240℃，保持15min；

2）起始50℃，保持1min，20℃/min升到175℃，再以3℃/min升到190℃，保持3min，以5℃/min升到230℃，保持2min；

3）起始溫度為50℃，保持1min，以20℃/min升到175℃，再以4℃/min升到230℃，保持5min；

4）起始溫度為50℃，保持2min，以20℃/min升到175℃，再以4℃/min升到230℃，保持5min；

5）起始溫度為50℃，保持1min，以20℃/min升到175℃，再以3℃/min升到190℃，保持3min，最后再以4℃/min升到230℃，保持2min。

條件1）不僅分析時(shí)間較長(zhǎng)（≥55min），且組分間的分離度也不理想；條件3）～5）的分離度不如條件2），所以，從分離時(shí)間和分離度綜合考慮，選擇了2）作為本實(shí)驗(yàn)的升溫程序。

綜上，確定本實(shí)驗(yàn)的色譜條件為：色譜柱為DB23型毛細(xì)管柱（60m×0.25mm×0.15μm），進(jìn)樣口溫度為250℃，檢測(cè)器為FID，溫度為260℃，分流比為10∶1，進(jìn)樣量為1μL。柱溫采用程序升溫法：起始溫度為50℃，保持1min，以20℃/min升到175℃，再以3℃/min升到190℃，保持3min，最后以5℃/min升到230℃，保持2min。色譜圖如圖1所示。

2.3 脂肪酸的鑒定

根據(jù)已有的40種脂肪酸甲酯對(duì)照品，本文采用直接對(duì)照品比較法對(duì)樣品油中的脂肪酸組份進(jìn)行鑒定，其中17種脂肪酸得到對(duì)應(yīng)鑒定如表1所示。

圖1 清脈油的氣相色譜圖

表1 清脈油中鑒別出的脂肪酸甲酯成分1）

3 回收率和精密度

分別取脂肪酸甲酯對(duì)照品適量，精密稱定，加異辛烷溶解稀釋成已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的混合脂肪酸甲酯對(duì)照品溶液。精密量取該對(duì)照品溶液1μL，注入氣相色譜儀，記錄峰面積，重復(fù)測(cè)定3次，由測(cè)得的各脂肪酸組份的質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)算回收率和精密度，結(jié)果見表2。

由表可知，脂肪酸甲酯對(duì)照品的回收率在95%～105%之間，精密度RSD＜0.5%。表明該實(shí)驗(yàn)方法可用于本文脂肪酸的分析。

4 質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定

根據(jù)樣品油中多達(dá)17種脂肪酸的特點(diǎn)，本文采用不加校正因子的面積歸一化法計(jì)算各脂肪酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

取本品適量，照2.1項(xiàng)下方法制備樣品供試品溶液，精密量取1μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，以歸一化法計(jì)算各脂肪酸組份的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見表3。

表2 清脈油中主要脂肪酸組分的回收率和精密度（n=3）

5 討論

1）根據(jù)清脈油由12種植物油混合而成的特點(diǎn)，特別選用了弱極性的脂肪酸專用分離柱DB-23（60m×0.25mm×0.15μm）毛細(xì)管GC柱作為分析柱，對(duì)樣品中復(fù)雜的脂肪酸組份進(jìn)了較理想的分離。

2）由于采用面積歸一化法進(jìn)行含量測(cè)定，本文重點(diǎn)考察了方法的回收率和精密度。結(jié)果各脂肪酸組份的回收率為95%～102%，精密度為0.08%～0.45%，滿足本品定量分析的要求。

3）由表1和表3結(jié)果顯示，從清脈油中共鑒別出17種脂肪酸，其中，不飽和脂肪酸含量高達(dá)90.18%，包括棕櫚一烯酸（0.02%）、十七碳一烯酸（0.04%）、油酸（19.52%）、亞油酸（24.03%）、δ-亞麻酸（0.18%）、亞麻酸（45.97%）、花生一烯酸（0.18%）、順-11，14，17-二十碳三烯酸（0.04%）、芥酸（0.10%）、6-二十二碳五烯酸（0.07%）、15-順-二十四碳一烯酸（0.03%）；飽和脂肪酸的含量為9.18%，包括豆蔻酸（0.03%）、棕櫚酸（5.45%）、十七烷酸（0.06%）、硬脂酸（3.39%）、花生酸（0.14%）、山崳酸（0.11%）。其中，多不飽和脂肪酸的含量高達(dá)70.29%。

表3 清脈油中脂肪酸組份的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

6 結(jié)束語

本文所建立的CGC法能夠較好地分離并鑒定出食用清脈油中最常見的17種脂肪酸，不飽和脂肪酸高達(dá)90%以上，且多烯不飽和脂肪酸也高達(dá)70.29%，有利于機(jī)體的健康和保健。

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Analysis of fatty acid in edible oil by CGC

ZHOU Jia1，2，CHEN Furong1，ZHANG Yuxia1，NING Xin1，XU Xiaoping1
（1.West China School of Pharmacy，Sichuan University，Chengdu 610041，China；2.The Food and Drug Testing Institute of Sichuan Province，Chengdu 610041，China）

To separate and identify the 17 fatty acids in Qing Mai Edible Oil by CGC.a DB-23 capillary column（60m×0.25mm×0.15μm）；flame ionization detector（FID，260℃）；a split/onseparation sample injector（250℃）；temperature programming：set the initial temperature at 50℃，increased to 175℃one min later at the rate of 20℃/min，continued to increase to 190℃at the rate of 3℃/min without changing for 3 min，and then up to 230℃at the rate of 5℃/min，maintained at this temperature for 2min.Seventeen fatty acids were identified in Qing Mai Edible Oil，of which the unsaturated fatty acids（UFA）take up 90.18%and the saturated fatty acids（SFA）amount to only 9.18%.The former are mainly composed of oleinic acid，linoleic acid，and linolenic acid，and the latter are primarily made up by palmitic acid and andstearic acid.There are also a small amount of other fatty acids contained in the oil.The ratio of UFA and SFA is 9.82∶1.CGC can be applied to examine the fatty acids in Qing Mai Edible Oil that is mixed with twelve types of vegetable oil.

Qing Mai edible oil；fatty acid；CGC

A文章編號(hào)：1674-5124（2015）08-0052-04

10.11857/j.issn.1674-5124.2015.08.012

0 引言

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活水平的不斷提高，人們對(duì)食用油的營養(yǎng)與保健功能更加重視；特別是現(xiàn)在高血脂、高血壓等心腦血管疾病高發(fā)，使得人們更加警惕油脂的攝入。因此，開發(fā)新的富含不飽和脂肪酸的食用油資源成為研究熱點(diǎn)。有助于人體健康的不飽和脂肪酸、維生素、氨基酸等特殊生理活性物質(zhì)對(duì)于營養(yǎng)保健食用油的組成具有十分重要的意義[1]。多不飽和脂肪酸（PUFA）對(duì)人體有著重要的生理功能，特別是ω-3系列[2-3]，是維持生物的必須物質(zhì)。隨著對(duì)PUFA研究的日益深入，它不僅能調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝[4-6]，治療和預(yù)防心腦血管疾病，而且還能促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育[7-9]。為建立食用油中脂肪酸組成的檢測(cè)方法，本研究擬采用毛細(xì)管氣相色譜法（CGC）對(duì)清脈油中的脂肪酸進(jìn)行分離，通過脂肪酸甲酯對(duì)照品進(jìn)行對(duì)照鑒定，以歸一化法評(píng)價(jià)不飽和脂肪酸和飽和脂肪酸的含量，分析清脈油中脂肪酸的分布規(guī)律和含量關(guān)系。

2014-11-28；

2015-01-17

周佳（1983-），女，重慶市人，主管藥師，碩士，主要從事食品檢驗(yàn)工作。