雙相躁狂患者治療前后血漿GRM—7的表達(dá)研究

榮晗　劉鐵榜　楊海晨　張建　徐丹

[摘要] 目的 觀察雙相躁狂患者血漿中GRM-7 mRNA的表達(dá)水平的改變及與雙相躁狂之間的關(guān)系。 方法 將105例雙相障礙躁狂發(fā)作患者設(shè)為患者組，100例與患者組在年齡和性別上匹配的健康志愿者設(shè)為對(duì)照組。患者組常規(guī)應(yīng)用碳酸鋰治療，觀察1個(gè)月，患者組于入組時(shí)和治療1個(gè)月時(shí)、對(duì)照組于入組時(shí)，分別評(píng)定BRMS量表并收集血漿，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)GRM-7 mRNA的表達(dá)水平，最后對(duì)檢測(cè)結(jié)果及BRMS評(píng)分進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果 患者組血漿GRM-7 mRNA表達(dá)顯著低于對(duì)照組（P<0.001）；治療1個(gè)月后，患者組血漿GRM-7 mRNA的表達(dá)水平顯著升高（P<0.001）。 結(jié)論 血漿GRM-7 mRNA的表達(dá)水平和雙相障礙躁狂發(fā)作有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 雙相躁狂；GRM-7；病例對(duì)照研究；生物標(biāo)記

[中圖分類號(hào)] R749.4 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2017）18-0035-03

Expression of plasma GRM-7 before and after treatment in patients with bipolar mania

RONG Han LIU Tiebang YANG Haichen ZHANG Jian XU Dan

Department of Psychiatry， Shenzhen Kangning Hospital， Shenzhen 518000， China

[Abstract] Objective To observe the changes of plasma GRM-7 mRNA expression in patients with bipolar mania and the relationship between the expression of GRM-7 mRNA and the bipolar mania. Methods 105 patients with bipolar disorder were defined as the patient group. 100 healthy volunteers matched to the patient group at age and sex were set as the control group. The patient group was routinely treated with lithium carbonate and was observed for one month. The BRMS scale was assessed and the plasma was collected when the patient group was at the time of enrollment and treatment for one month and when the control group was at the time of enrollment. The expression level of GRM-7 mRNA was detected by real-time fluorescence quantitative PCR. Finally， the results of the test and BRMS score were analyzed statistically. Results The plasma GRM-7 mRNA expression in the patient group was significantly lower than that in the control group（P<0.001）. After one month of medical treatment， the mRNA expression level of GRM-7 in the patient group was significantly increased（P<0.001）. Conclusion The level of plasma GRM-7 mRNA expression is associated with bipolar disorder manic episode.

[Key words] Biphasic mania； GRM-7； Case-control study； Biomarker

雙相障礙是一種以躁狂和抑郁癥狀反復(fù)或交替發(fā)作為主要臨床特征的重性精神疾病，具有高發(fā)病率和高患病率[1]。在臨床上，對(duì)雙相障礙的診斷主要依靠精神檢查，缺乏客觀的生物學(xué)指標(biāo)，常出現(xiàn)誤診。因此為雙相障礙尋找客觀的生物學(xué)標(biāo)記物，深入探索雙相障礙的發(fā)病機(jī)制，將有助于降低誤診率[2]，準(zhǔn)確評(píng)估患者病情和療效。代謝性谷氨酸受體7（GRM-7）是谷氨酸受體家族中與G蛋白偶聯(lián)的一類受體，與快速興奮性突觸傳遞、神經(jīng)元的發(fā)育和死亡、突觸的可塑性等密切相關(guān)[3-6]。有研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元再生、樹突棘的生長(zhǎng)、突觸和神經(jīng)可塑性等參與雙相障礙的發(fā)病基礎(chǔ)，本研究觀察雙相躁狂患者血漿中GRM-7 mRNA表達(dá)水平的改變及與雙相躁狂之間的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2010年8月～2012年8月間深圳市康寧醫(yī)院門診或住院的雙相躁狂患者105例，由至少兩名副高及以上職稱的醫(yī)生進(jìn)行診斷。

患者組入組標(biāo)準(zhǔn)[7]：（1）符合DSM-Ⅳ的雙相障礙躁狂發(fā)作疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）Bech-Rafaelsen躁狂量表（BRMS）11項(xiàng)評(píng)分≥11分；（3）年齡18～50歲，性別不限。正常對(duì)照組入組標(biāo)準(zhǔn)[7]：以年齡、性別、民族和文化程度與患者組匹配為原則，同期在志愿的前提下選擇心身健康的正常人群為對(duì)照組，為深圳市康寧醫(yī)院的職工或志愿者。患者組及對(duì)照組不符合下列任意一條均將被排除：（1）無嚴(yán)重心、腦、肝、腎疾病及其他嚴(yán)重的軀體疾病，無嚴(yán)重營(yíng)養(yǎng)不良、肥胖等；（2）無內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病，無急、慢性感染疾病；（3）至少半年內(nèi)未用過免疫抑制劑及免疫增強(qiáng)劑，未應(yīng)用電抽搐治療；（4）至少兩周內(nèi)未服用抗精神病藥物及心境穩(wěn)定劑；（5）無其他精神疾病和精神發(fā)育遲滯；（6）無酒精和藥物濫用史；（7）懷孕、哺乳婦女及月經(jīng)期女性排外；（8）血常規(guī)、肝臟生化、腎臟生化、心電圖、腦電圖及體格檢查結(jié)果無明顯異常；（9）近1年內(nèi)無重大生活事件。

本研究共入組雙相躁狂患者共105例，男56例，女49例，年齡18～50歲，平均（35.49±8.31）歲。本研究經(jīng)深圳市康寧醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均自愿參加并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料的收集 患者在入組時(shí)由兩名經(jīng)過培訓(xùn)的副主任醫(yī)師進(jìn)行BRMS的評(píng)定（Kappa=0.90）。同時(shí)收集患者組及對(duì)照組的一般人口學(xué)資料、首次發(fā)病年齡、總病程、本次病程等其他臨床資料。患者組使用藥物情況為105例患者均使用鋰鹽治療，平均使用藥物劑量為（1.0±0.2）mg，合并使用藥物為奧氮平，平均使用藥物劑量（15.0±2.4）mg。患者組使用藥物的時(shí)間為1個(gè)月。

1.2.2 樣本的采集與儲(chǔ)存 分別于治療前和治療1個(gè)月后采集所有患者組和對(duì)照組的空腹靜脈血6 mL，經(jīng)過離心大約3000 r/min，遂收集血漿，保存于-80℃的冰箱。同時(shí)對(duì)患者組評(píng)定BRMS量表。

1.2.3 實(shí)時(shí)定量PCR（Real-time PCR） Real-time PCR檢測(cè)GRM-7的表達(dá)水平：提取各組組織總RNA，進(jìn)行PCR檢測(cè)GRM-7的表達(dá)，每個(gè)樣品測(cè)3次。將加好樣品的96孔板放在熒光定量PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)條件如下：95 ℃ 15 min后連續(xù)45個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)內(nèi)95 ℃ 15 s、55 ℃ 30 s、72 ℃ 34 s，總反應(yīng)體積20 μL。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 13.0 for windows軟件，計(jì)量資料以（x±s）表示，數(shù)據(jù)分析采用T-test。影響因素分析采用Pearson相關(guān)分析。所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組人口學(xué)資料比較

患者組依據(jù)入組標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)共入組105例，其中男56例，女49例，平均年齡（35.49±8.31）歲，平均病程（4.21±1.32）年，首次發(fā)病年齡（19.36±5.36）歲，情感障礙發(fā)作次數(shù)（2.76±0.74）次。對(duì)照組依據(jù)入組標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)共入組100例，其中男54例，女46例，平均（34.89±7.45）歲。患者組和對(duì)照組間年齡和性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2患者組治療前后BRMS量表評(píng)分比較

分別在患者組治療前后進(jìn)行BRMS評(píng)分，并采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，治療后患者組BRMS量表評(píng)分顯著低于治療前的評(píng)分（t=2014.86，P<0.0001）。見表2。

2.3 不同組別GRM-7 mRNA表達(dá)水平比較

對(duì)治療前后患者組和對(duì)照組的血漿GRM-7 mRNA表達(dá)水平進(jìn)行方差分析發(fā)現(xiàn)：治療前患者組血漿GRM-7 mRNA表達(dá)水平均顯著低于對(duì)照組（P<0.001）；治療1個(gè)月后患者組的血漿GRM-7 mRNA表達(dá)水平均顯著升高（P<0.001），見圖1。

圖1 GRM-7 mRNA表達(dá)水平的比較

注：*表示與對(duì)照組比較有顯著差異，P<0.001；#表示與治療前患者組比較有顯著差異，P<0.001

3 討論

雙相障礙是一類世界范圍內(nèi)影響人們生命及功能的常見、慢性、易復(fù)發(fā)的精神疾病，以反復(fù)或交替的躁狂或抑郁發(fā)作為主要臨床特征[5]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球約有1 億人口飽受雙相障礙的折磨，在中國(guó)有上千萬的雙相障礙患者[6]。臨床研究表明大多數(shù)雙相障礙患者結(jié)局不良，表現(xiàn)為高復(fù)發(fā)率、殘留癥狀以及社會(huì)認(rèn)知功能受損等。目前以鋰鹽等抗癲癇藥物為主導(dǎo)的治療方法雖對(duì)部分雙相障礙患者有效，但仍存在起效慢（數(shù)周到數(shù)月）、療效不完全、對(duì)部分患者無效、副反應(yīng)明顯等問題[7]。因此更深入地了解雙相障礙的發(fā)病機(jī)制并尋找新的治療策略十分必要。

雙相障礙的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，被認(rèn)為是受多個(gè)易感基因與環(huán)境因素影響下的神經(jīng)可塑性的紊亂[8]。神經(jīng)可塑性的概念包含突觸可塑性、某些腦區(qū)如海馬齒狀回神經(jīng)元再生、神經(jīng)遞質(zhì)釋放的改變、軸突與樹突結(jié)構(gòu)的重塑等[8]。已有研究表明microRNA可以通過復(fù)雜的對(duì)基因/蛋白的時(shí)間及空間的調(diào)節(jié)從而調(diào)節(jié)神經(jīng)可塑性[9]，提示其在雙相障礙的發(fā)病及治療機(jī)制中可能扮演了重要角色。

有研究指出microRNA-34a對(duì)應(yīng)的靶蛋白GRM-7參與了軸突的生長(zhǎng)以及神經(jīng)元再生等過程[3-4]。其中GRM-7是與G蛋白偶聯(lián)而起作用的一類受體，與快速興奮性突觸傳遞、神經(jīng)元的發(fā)育和死亡、突觸的可塑性密切相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元再生、樹突的生長(zhǎng)、突觸和神經(jīng)可塑性以及生物節(jié)律等組成雙相障礙的發(fā)病基礎(chǔ)[10-12]。這些結(jié)果提示GRM-7可能參與了雙相障礙的發(fā)病。

本研究使用RT-PCR技術(shù)對(duì)被試血漿中GRM-7 mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)患者組血漿GRM-7 mRNA表達(dá)水平均顯著低于對(duì)照組，表明雙相躁狂患者血漿GRM-7 mRNA的表達(dá)存在相應(yīng)的變化，提示血漿中GRM-7的低表達(dá)與雙相障礙有關(guān)。

為進(jìn)一步驗(yàn)證該結(jié)論，在患者組治療1個(gè)月后再次評(píng)定BRMS，發(fā)現(xiàn)治療后BRMS得分顯著低于治療前，表明治療后患者的病情比治療前明顯好轉(zhuǎn)。同時(shí)對(duì)患者組血漿GRM-7 mRNA的表達(dá)水平檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)治療后患者組血漿GRM-7 mRNA的表達(dá)水平顯著升高。進(jìn)一步證明了血漿中GRM-7的表達(dá)與雙相躁狂的病情有關(guān)。GRM-7可能通過影響快速興奮性突觸傳遞、神經(jīng)元的發(fā)育和死亡、突觸可塑性等參與雙相躁狂的發(fā)病[13-15]，同時(shí)也說明miR-34a可能通過調(diào)節(jié)GRM-7的水平影響到突觸可塑性而參與雙相障礙的發(fā)病和治療。

但是本研究仍存在一定的局限性，其一，本研究雖然發(fā)現(xiàn)microRNA-134、microRNA-34a和雙相躁狂有關(guān)，并對(duì)microRNA-134和microRNA-34a在雙相躁狂發(fā)病中的作用作了初步假設(shè)和探索，但是對(duì)其具體的作用機(jī)制還需進(jìn)一步深入研究和驗(yàn)證；其二，雙相障礙的發(fā)病可能是多個(gè)通道和多個(gè)基因交互作用的結(jié)果，本研究作為對(duì)該領(lǐng)域的初步探索，僅從GRM-7的角度進(jìn)行了分析，其完善的發(fā)病機(jī)制還需從多個(gè)領(lǐng)域共同探討。

總之，GRM-7的表達(dá)在雙相躁狂患者血漿中存在相應(yīng)的變化，其表達(dá)水平的變化在雙相障礙中起了一定的作用，同時(shí)，躁狂患者治療后血漿GRM-7較治療前明顯升高，提示血漿GRM-7有潛力成為雙相障礙的狀態(tài)標(biāo)記物，深入探討其在雙相障礙發(fā)生發(fā)展過程中的調(diào)控機(jī)制，可以為臨床雙相障礙的診斷治療提供新的思路，為新藥的研發(fā)提供參考，甚至可以通過長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)生物學(xué)標(biāo)記來提早用藥而預(yù)防復(fù)發(fā)，然而具體的作用機(jī)制尚需進(jìn)一步深入研究。

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（收稿日期：2017-04-02）