離子色譜法測定枸櫞酸芬太尼原料藥和注射液中枸櫞酸的含量Δ

馬迅，李盼盼，劉桂霞，宗艷平，孫偉，山廣志，陳華，南楠#（.中國食品藥品檢定研究院，北京00050；.中國醫學科學院醫藥生物技術研究所，北京00050）

離子色譜法測定枸櫞酸芬太尼原料藥和注射液中枸櫞酸的含量Δ

馬迅1＊，李盼盼2，劉桂霞2，宗艷平2，孫偉2，山廣志2，陳華1，南楠1#（1.中國食品藥品檢定研究院，北京100050；2.中國醫學科學院醫藥生物技術研究所，北京100050）

目的：采用離子色譜法測定枸櫞酸芬太尼原料藥和注射液中枸櫞酸的含量。方法：分析柱為Thermo Dionex IonPacTMAS11-HC，流動相為氫氧化鉀溶液（梯度洗脫），流速為1.0m L/m in，柱溫為35℃，進樣量為20μL，檢測器為抑制型電導檢測器。結果：枸櫞酸檢測質量濃度線性范圍為0.115 7～74.05μg/m L（r＝0.999 5）；定量限為0.115 0μg/m L，檢測限為0.040 0μg/m L；精密度、穩定性、重復性試驗的RSD＜2.0%；加樣回收率為99.6%～101.5%（RSD＝0.68%，n＝9）。結論：該方法環保、簡便，準確度和精密度良好，適用于枸櫞酸芬太尼原料藥及注射液中枸櫞酸的含量測定。

枸櫞酸芬太尼；枸櫞酸；含量測定；離子色譜法

枸櫞酸芬太尼（Fentanyl citrate）是人工合成的強效麻醉性鎮痛藥，為阿片類受體激動藥，鎮痛作用機制與嗎啡相似，作用強度為嗎啡的60～80倍；其可用于麻醉前、中、后的鎮靜與鎮痛，以及各種腫瘤疼痛和慢性疼痛的治療[1]。枸櫞酸（檸檬酸）作為枸櫞酸芬太尼中的反離子配基，提高了藥物的溶解性、穩定性和生物利用度，檢測和控制枸櫞酸芬太尼原料藥和注射液中枸櫞酸的含量對保證其結構均一和質量可靠具有積極意義[1]。

目前用于有機酸分析的方法主要有薄層色譜法（TLC）[2-3]、氣相色譜法（GC）[4-5]、毛細管電泳法（CE）[6-7]、高效液相色譜法（HPLC）[8-11]和離子色譜法（IC）[12-15]等。TLC、GC和CE法檢測結果不準確，而HPLC法多采用有機相與一定濃度的緩沖鹽溶液洗脫，流動相的制備較為復雜。IC法流動相簡單，環保無污染；采用在線淋洗液發生器能夠簡化操作，增強方法重復性；且采用電導或紫外檢測器，有較好的選擇性和靈敏度[16]。鑒于此，本課題組采用IC法建立了測定枸櫞酸芬太尼原料藥和注射液中枸櫞酸含量的方法，以期為其質量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Thermo Dionex ICS-5000+型IC儀，包括自循環模式的抑制型電導檢測器、EGC-500淋洗液自動發生器、Chromeleon 7.2色譜工作站（美國Thermo Fisher Scientific公司）；XP205型十萬分之一電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；M illi-Q Integral型超純水器（德國Merck M illipore公司）。

1.2 藥品與試劑

枸櫞酸芬太尼原料藥（A廠，批號：B01-20140402；B廠，批號：3F141101）；枸櫞酸芬太尼注射液（A廠，批號：1140439、1140609、1141102、1141204-A2、1141204-A3、1141208、1141209、1150406、1150407、2120501、20150205、20150207，規格：2m L∶0.1mg；批號：1141104-B3，規格：10m L∶0.5mg；B廠，批號：20150205、20150207，規格：2m L∶0.1mg）；枸櫞酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：111679-200401，純度：＞98%）；試驗所用試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

分析柱：Thermo Dionex IonPacTMAS11-HC（250 mm×4 mm，6μm）；保護柱：Thermo Dionex IonPacTMAG11-HC（50mm×4mm，8μm）；流動相：氫氧化鉀溶液（KOH），梯度洗脫（0～5 m in，25 mmol/L KOH；5～25 m in，25→75 mmol/L KOH；25～30 m in，75→25 mmol/L KOH）；流速：1.0m L/min；柱溫：35℃；進樣量：20μL；檢測器：抑制型電導檢測器。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液精密稱取枸櫞酸對照品14.81mg，置于50m L量瓶中，加水溶解并定容，搖勻，即得對照品貯備液；取上述對照品貯備液適量，置于50m L量瓶中，制成每1.0m L約含枸櫞酸37μg的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液取注射液樣品作為供試品溶液1。精密稱取原料藥樣品約0.925mg，置于25m L量瓶中，加水溶解并定容，搖勻，制成每1.0m L約含枸櫞酸37μg的供試品溶液2。

2.2.3 陰性對照溶液以水作陰性對照溶液。

2.3 系統適用性和專屬性試驗

精密量取“2.2”項下對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各20μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，理論板數按枸櫞酸峰計為52 547，保留時間為14.923m in；且其他成分在枸櫞酸峰的保留時間處無色譜峰出現，各成分均能達到基線分離，分離度＞2.0。結果表明，其他成分對測定無干擾，本方法可滿足檢測的需要。

2.4 線性關系考察

取“2.2.1”項下對照品貯備液適量，逐級稀釋，制成質量濃度分別為74.05、37.02、18.51、4.628、2.314、1.157、0.578 5、0.115 7μg/m L的系列對照品溶液。取上述系列對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以枸櫞酸質量濃度（x，μg/m L）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得枸櫞酸回歸方程y＝0.021 52x－0.408 5（r＝0.999 5）。結果表明，枸櫞酸檢測質量濃度線性范圍為0.115 7～74.05μg/m L。

2.5 定量限與檢測限考察

取“2.2.1”項下對照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。當信噪比為10∶1時，得定量限；當信噪比為3∶1時，得檢測限。結果，枸櫞酸的定量限為0.115 0μg/m L，檢測限為0.040 0μg/m L。

圖1 離子色譜色譜圖Fig 1 IC chrom atogram s

2.6 精密度試驗

取“2.2.1”項下對照品溶液20μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，枸櫞酸峰面積的RSD＝0.29%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗

取“2.2.2”項下供試品溶液1（批號：1141102）適量，分別于室溫下放置0、3、6、12、24 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，枸櫞酸峰面積的RSD＝1.29%（n＝5），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內基本穩定。

2.8 重復性試驗

取“2.2.2”項下供試品溶液1（批號：1141102）適量，共6份，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品含量。結果，枸櫞酸峰面積的RSD＝0.70%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.9 加樣回收率試驗

取枸櫞酸對照品適量，加水制成質量濃度為206 μg/m L的對照品溶液。取上述對照品溶液約2.3、3.1、3.8m L，平行制備3份，分別置于10m L量瓶中，加注射液樣品（批號：1141102）5.0m L，加水定容，搖勻，即得系列待測溶液。取上述系列待測溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表1。

2.10 樣品含量測定

取2批原料藥樣品及13批注射液樣品適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算枸櫞酸的含量。結果，2批原料藥樣品（批號：3F141101、B01-20140402）的含量分別為36.40%、37.40%（n＝3），13批注射液樣品含量測定結果見表2。

3 討論

表1 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 1 Resultsof recovery tests（n＝9）

表2 樣品含量測定結果（n＝3，μg/m L）Tab 2 Results of content determ ination of samp les（n＝3，μg/m L）

3.1 色譜柱的選擇

枸櫞酸為三元有機酸，在色譜柱中的保留較難洗脫。綜合考慮選用Thermo Dionex IonPacTMAS11-HC分析柱，在KOH溶液梯度洗脫下，可使枸櫞酸較快出峰，且注射液和原料藥中其他成分可與枸櫞酸達基線分離，不干擾其測定。

3.2 方法耐用性考察

取“2.2.2”項下供試品溶液1（批號：1141102）適量，在不同流速（±0.2m L/m in）、柱溫（±5℃）等色譜條件下進樣測定。結果，各條件下枸櫞酸理論板數均＞10 000，枸櫞酸峰與相鄰雜質峰分離度＞2；枸櫞酸的平均含量為29.34μg/m L，RSD均＜2.0%（n＝4），表明本方法耐用性良好。

3.3 含量測定結果

在13批注射液樣品中，枸櫞酸的平均含量約為29.63μg/m L，按芬太尼規格2m L∶0.1mg（50μg/m L）計并結合枸櫞酸的分子量（192.14）、芬太尼的分子量（336.47）以及枸櫞酸芬太尼注射液的分子量（528.60），計算得出枸櫞酸的含量約占注射液樣品的37.5%；2批原料藥樣品中枸櫞酸含量分別為36.40%和37.40%。所有測定結果與枸櫞酸的理論含量（36.35%）相當，證明成鹽完全。

綜上所述，本方法環保、簡便，準確度和精密度良好，適用于枸櫞酸芬太尼原料藥及注射液中枸櫞酸的含量測定。

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Contents Determ ination of Citric Acid in Fentanyl Citrate Raw M aterialsand Its Injection by Ion Chromatography

MA Xun1，LIPanpan2，LIU Guixia2，ZONG Yanping2，SUN W ei2，SHAN Guangzhi2，CHEN Hua1，NAN Nan1（1. National Institutes for Food and Drug Control，Beijing 100050，China；2.Institute of Medicinal Biotechnology，Chinese Academy of M edical Sciences，Beijing 100050，China）

OBJECTIVE：To determ ine the contents of citric acid in fentanyl citrate raw materials and its injection by ion chromatography.METHODS：The determ ination was performed on Thermo Dionex IonPacTMAS11-HC column w ith mobile phase consisted of potassium hydroxide（gradient elution）at the flow rate of 1.0 m L/m in.The column temperature was 35℃，and sample size was20μL.The detector was suppressed conductivity detector.RESULTS：The linear range of citric acid were 0.115 7-74.05μg/ m L（r＝0.999 5）.The lim it of quantitation was 0.115 0μg/m L，and the lim it of detection was 0.040 0μg/m L；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were all lower than 2.0%；the average recoveries were 99.6%-101.5%（RSD＝0.68%，n＝9）. CONCLUSIONS：Themethod is environmentally-friendly and simple w ith good accuracy and precision，and suitable for the contentsdeterm ination of citric acid in fentanyl citrate raw materialsand injection.

Fentanyl citrate；Citric acid；Content determ ination；Ion chromatography

R 927

A

1001-0408（2017）18-2536-03

2016-12-13

2017-03-20）

（編輯：劉柳）

中國醫學科學院與健康科技創新工程系統創新團隊基金（No.2016-I2M-3-010）

＊主管藥師，碩士。研究方向：藥品質量標準。電話：010-67095458。E-mail：maxun@nifdc.org.cn

#通信作者：主任藥師。研究方向：藥品質量標準。電話：010-67095455。E-mail：nannan@nifdc.org.cn

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.18.25