核磁共振波譜技術用于酸棗仁及其成藥的摻假鑒別

【摘要】采用核磁共振波譜技術（NMR）對酸棗仁和混偽品理棗仁進行鑒別研究，通過一系列的比對試驗，優化了提取方式并選擇了適當的復溶試劑，最終確定了一種快速、可靠、重現性好的鑒別方法。為驗證其可靠性，對河北省特有的酸棗仁及其成藥進行了重復性測試，結果證明了該方法的一致性和準確性。該研究不僅為其他中藥材的快速鑒別提供了堅實的技術支撐，更為藥品質量監管增添了必要的技術手段，為保障藥品安全有效奠定了堅實基礎。

【關鍵詞】核磁共振波譜技術；酸棗仁；真偽鑒別；藥品質量監管

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.06.013

【基金項目】河北省藥品監督管理局科技計劃項目（2022ZC1050）：核磁共振波譜技術在藥品摻假方面的應用研究。

Application of Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy in the Identification of Adulterated Jujube Seed and its Traditional Chinese Medicine

LI Jianwen1， FENG Haobin2*， JIN Ling2， MA Tingting3

（1.Hebei Province Drug Professionalization Inspector General Team〔SouthArea〕， Shijiazhuang 050000， China； 2. Hebei Institute of Drug and Medical Device Inspection and Research， Shijiazhuang 050000， China； 3. Shijiazhuang Food and Drug Inspection Center， Shijiazhuang 050000， China）

Abstract： A study is conducted to identify the authenticity of jujube seeds and their adulterated products using nuclear magnetic resonance （NMR） spectroscopy. Through a series of comparative experiments， the extraction method is optimized， and appropriate redissolving reagents are selected， ultimately establishing a rapid， reliable， and reproducible identification method. To verify its reliability， repetitive tests are conducted on the unique jujube seeds from Hebei Province and their finished medicinal products， and the results confirmed the consistency and accuracy of the method. This research not only provides solid technical support for the rapid identification of other traditional Chinese medicinal materials but also adds necessary technical means for drug quality supervision， laying a solid foundation for ensuring the safety and efficacy of drugs.

Keywords： nuclear magnetic resonance spectroscopy technology； sour jujube kernels； identification of authenticity； drug quality supervision

0引言

酸棗仁為鼠李科植物酸棗的干燥成熟種子，具有養心補肝、寧心安神、斂汗、生津等功效[1]。酸棗仁因具有寧心安神的特性，成為調理失眠問題的優選中藥，因而近年來酸棗仁藥材使用量大大增加，導致其價格節節攀升[2]。中藥材中有一種理棗仁，其與酸棗仁的外觀性狀特征相似，肉眼鑒別難度大，故有不法商家使用理棗仁與酸棗仁混雜一起售賣給消費者，致使臨床療效難以達到預期。目前，文獻報道中關于酸棗仁及其成藥的鑒別方法，除性狀鑒定、顯微鑒定和理化鑒定等傳統鑒定方法外[3-5]，還有利用多重連接探針擴增技術、高分辨率溶解曲線技術、多重位點特異性PCR法等進行鑒別的新方法[6-8]，但利用核磁共振波譜技術對酸棗仁藥材及其成藥鑒別的報道尚未見到。

核磁共振波譜技術是一種基于原子核磁性的波譜技術，是化學、生物學和醫學領域的重要分析手段。它不僅可以迅速檢測樣品中的化合物類型和含量，還能準確識別出其中的雜質成分。因此，利用核磁共振波譜技術對藥品進行質量控制，能夠提供較高的特異性和靈敏度[9]，確保藥品的安全性和有效性。通過引入核磁共振波譜技術，可以更加全面、深入地了解中藥材的化學成分和藥效機制，為中藥的現代化研究和應用奠定基礎，也為酸棗仁的質量控制提供技術保障，同時，進一步展示了核磁共振波譜技術在中藥材質量控制和藥品質量監管方面廣泛的應用前景。

1材料與試劑

1.1儀器

Bruker AvenceⅢ600型核磁共振波譜儀；電子天平（OLYMPUS BX41）；KQ-1000DE數控超聲清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2藥材和試劑

樣品：酸棗仁對照藥材（中檢院121517-202105）；理棗仁藥材；酸棗仁藥材6批（安國中藥材市場購買）；陰性酸棗仁成藥6批（棗仁安神膠囊3批、棗仁安神顆粒3批）。

溶劑：甲醇；氘代三氯甲烷；氘代二甲亞砜（DSMO）。

2方法

2.1樣品的制備

準備酸棗仁對照藥材和理棗仁藥材，分別稱取50 g，粉碎，過篩（3號篩、50目），所得樣品用于真偽鑒別實驗，待處理。

準備6批酸棗仁藥材，分別稱取50 g，粉碎，過篩（3號篩、50目），共得6批酸棗仁樣品，待處理。

準備6批含有酸棗仁的成藥，分別稱取50 g，粉碎，過篩（3號篩、50目），共得6批酸棗仁成藥樣品。

2.2樣品提取條件的優化

2.2.1提取方式的優化

取適量酸棗仁樣品，進行粉碎和過篩處理，以確保樣品的均勻性。精密稱取適量的酸棗仁對照藥材和理棗仁藥材各兩份，分別置于250 mL具塞錐形瓶中，依次加入50 mL甲醇溶液，并對其稱重。一份樣品進行超聲處理（設置功率為400 W，頻率為50 kHz）30 min，超聲結束后補足減失的重量，然后進行搖勻和過濾操作，并將濾液蒸干。另一份樣品采用加熱回流方式，其他處理方式與第一份樣品處理方式相同。兩份樣品均使用相同的氘代試劑進行復溶處理。復溶后，將樣品離心操作10 min（設置條件為4℃，7000 r/min），取上清液，轉移至5 mm的核磁共振管中，上機測試。

2.2.2復溶試劑的優化

按照“2.2.1”的方法把樣品處理至濾液蒸干。為去除溶劑干擾，并富集酸棗仁中的有效化學成分，分別使用氘代三氯甲烷、DSMO各1 mL進行復溶處理。這兩種氘代試劑在核磁共振波譜技術中常作為復溶溶劑使用，能夠提供清晰的核磁共振圖譜特征。然后對兩份復溶樣品進行離心操作10 min（設置條件為4℃，7000 r/min），取上清液轉移至5 mm的核磁共振管中，分別上機測試。

2.3核磁共振波譜儀采集條件

采集zg 30脈沖序列測定樣品溶液的1H-NMR，測定溫度為298 K，掃描次數為16次，觀測頻率為600.20 MHz，采樣點數為65536，譜線寬度為12019.23 Hz，脈沖寬度為10.00μs，馳像延遲時間為1 s。

3結果分析

3.1樣品提取方式的確定

為找到最佳提取效果的方式，分別考察了超聲提取和加熱回流兩種常用的提取方法。這兩種方法各有優缺點。超聲提取特點是操作簡便、快速，而加熱回流提取的特點是處理更加徹底。通過上機測試并主要以核磁共振圖譜的特征峰為考察指標。特征峰是核磁共振圖譜中的關鍵信息，其可以反映樣品中的特定化學成分和結構信息。通過對比超聲提取和加熱回流提取得到的核磁共振圖譜發現，在兩種提取方式下，特征峰的強度與峰形都沒有明顯的區別，對于酸棗仁中的目標化學成分的提取效果是相同的。因此，考慮到操作的簡便性和效率，選擇超聲處理作為最佳的提取方式。

3.2復溶試劑的選擇

在相同的實驗條件下，我們分別使用了氘代三氯甲烷和DSMO作為復溶溶劑進行了實驗。通過對比分析兩種不同的復溶試劑得到的核磁共振圖譜（見圖1）發現，結果存在明顯的差異。使用氘代三氯甲烷作為復溶溶劑得到的核磁共振圖譜顯示，酸棗仁和理棗仁之間存在明顯的特征峰區別。從酸棗仁的核磁共振圖譜中可以看到，在3.5 mm處有一個非常明顯的特征峰，而在理棗仁的核磁共振圖譜中則沒有該特征峰，因而可以通過該特征峰來確定樣品是酸棗仁還是理棗仁。然而，當使用DSMO作為復溶溶劑時，得到的核磁共振圖譜顯示酸棗仁和理棗仁之間沒有明顯的特征峰區別。這可能是由于DSMO與酸棗仁和理棗仁中的化學成分相互作用的方式不同，導致特征峰的消失或重疊。由此可知，氘代三氯甲烷作為復溶溶劑時可以有效地區分酸棗仁和理棗仁，而使用DSMO作為復溶溶劑則無法實現這一目的。

3.3優化方法確認

選取6批次的酸棗仁藥材和6批次不同的酸棗仁成藥作為實驗對象。按照優化后的核磁共振波譜法對這些酸棗仁及其成藥進行測試，并得到相應的核磁共振圖譜，見圖2。對這些核磁共振圖譜進行詳細的分析和對比發現，沒有出現理棗仁的特征峰，而且所得到的樣品核磁共振圖譜重現性好。基于以上實驗結果，我們可以初步確定，該特征峰可以作為酸棗仁及其成藥真偽鑒定的一個重要特征。

4討論

經過一系列的實驗研究，筆者找到了一種運用核磁共振波譜技術對酸棗仁和理棗仁進行鑒別的方法。該方法采用甲醇作為提取試劑，選擇簡便的超聲處理作為提取方式，通過搖勻、過濾、蒸干，用氘代三氯甲烷復溶，然后離心上機測試，得到了可用于鑒別TYP45vSTLVuZmDEe3yFvgw==的核磁共振圖譜，發現酸棗仁和理棗仁的核磁共振圖譜具有明顯差異，可以輕松區分兩種中藥材。在確定了實驗方法后，對安國中藥材市場銷售的酸棗仁及其成藥進行了重復性實驗。結果證明，該方法能夠準確鑒別酸棗仁的真偽，且結果真實可靠。有助于確保當地藥材的質量和穩定性，還可以保護當地的酸棗仁產業，確保其質量和聲譽。此外，該技術的開發應用還為中藥材的質量監管提供了強有力的技術支持。這將為中藥材市場的健康發展提供有力保障，并推動相關產業的持續發展。

【參考文獻】

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2020年版一部[M].北京：中國醫藥科技出版社，2020.

[2]閆艷，申晨曦，張福生，等.酸棗仁與理棗仁的研究進展及質量標志物預測分析[J].中草藥，2019，50（19）：4769-4784.

[3]孫柳源.酸棗仁的兩種混偽品[J].浙江中醫學院學報，2000（3）：73.

[4]梅華，畢飛霞，張榮.酸棗仁、理棗仁、枳椇子三者之間性狀、顯微的區別[J].時珍國藥研究，1996（3）：193.

[5]陳振德，許重遠，謝立.酸棗仁及其混淆品蛋白質高效毛細管電泳法鑒別[J].中國藥學雜志，2001（9）：49-50.

[6]王文斌，莫靜，程華春，等.多重連接探針擴增技術鑒別酸棗仁及混偽品的研究[J].中藥材，2022，45（4）：818-823.

[7]楊寶，李忠華，董培智，等.基于高分辨率熔解曲線技術鑒別酸棗仁及其混偽品理棗仁[J].中國藥事，2022，36（11）：1267-1279.

[8]李柯帆，索曉雄，李曉蘭，等.多重位點特異性PCR同時鑒別酸棗仁及其摻偽品[J].中國實驗方劑學雜志，2023，29（2）：141-148.

[9] BALAKSHIN M，CAPANEMA E，GRACZ H，et al.Quantificatiao of lingnin-carbohydrate linkages with high-resolutiong NMR spectroscopy[J].Planta，2011，233（6）：1097-1110.

【作者簡介】

李建文，男，1984出生，高級工程師，碩士，研究方向為藥品檢驗與檢查。

通信作者：馮浩彬，男，1988年出生，高級工程師，碩士，研究方向為中藥質量檢驗與評價，188228310@qq.com。

（編輯：侯睿琪）