鳳仙花水提物對小鼠腹瀉抑制作用的研究

王惠國，湯紅翠，秦海宏，賈琳鈺，龍文月，馮寶民

（1．大連大學 生命科學與技術學院，遼寧 大連 116622；2．大連大學 醫學部，遼寧 大連 116622）

鳳仙花水提物對小鼠腹瀉抑制作用的研究

王惠國1，湯紅翠1，秦海宏2，賈琳鈺2，龍文月1，馮寶民2

（1．大連大學 生命科學與技術學院，遼寧 大連 116622；2．大連大學 醫學部，遼寧 大連 116622）

為研究鳳仙花水提物對實驗動物胃腸道平滑肌的影響并對鳳仙花的止瀉機制進行探究。按照灌胃的方式給予小鼠番瀉葉煎劑誘導小鼠腹瀉模型，并根據觀察腹瀉潛伏期及腹瀉次數等指標來評價鳳仙花水提物的止瀉作用；依次進行小鼠的胃排空和小腸推進實驗，通過觀察現象探討其可能的作用機制。結果表明鳳仙花水提物對番瀉葉煎劑所導致的小鼠泄瀉以及小鼠的小腸推進和胃排空有對抗作用。說明鳳仙花水提物對小鼠腹瀉有抑制作用，其中鳳仙花水提物中可能具有止瀉成分，其止瀉機制之一為抑制腸胃運動。

鳳仙花；抗腹瀉；胃排空；小腸推進

0 引言

鳳仙花為一年生的草本植物鳳仙花Impatiens balsamina L.的干燥花，以紅、白兩色入藥為最佳，夏季花盛開時采收晾干[1]。鳳仙花性味辛、苦、溫，目前尚未被《中國藥典》收載。目前研究發現鳳仙花中含有豐富的化學成分，主要為黃酮類、醌類、甾醇類、糖類、香豆素類等多種化學成分[2-8]。鳳仙花的食、藥用價值研究結果顯示：鳳仙花具有多種藥理作用，其主要性質有抗炎鎮痛、抗菌、抗過敏、促透皮、抗癌、抗氧化等[9-18]。民間流傳鳳仙花有良好的止瀉效果，但其止瀉作用尚未見研究報道。據此，本實驗擬探究鳳仙花的止瀉功效及可能的作用機制，為將其開發為腹瀉治療藥物提供實驗依據。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

實驗采用潔凈級標準的昆明種小鼠若干，雌雄小鼠數量各半，體質量為25±5 g，由大連醫科大學提供。

1.2 藥物及試劑

實驗所用鳳仙花、番瀉葉均購自大連保健大藥房。

鳳仙花水提物的制備：采用浸漬法制備鳳仙花水提物，首先將提取液進行抽濾，之后將濾液置于旋轉蒸發儀上進行蒸發濃縮，濃縮后配置成含有生藥的濃度為1 g/mL的藥液備用，用時根據實驗需要配制相應濃度。

番瀉葉煎劑的制備：稱取番瀉葉適量粉碎，置于燒杯中，加入適量蒸餾水，加熱至沸騰，并保持微沸15 min，濾過，將濾液于50℃以下進行減壓濃縮，濃縮成濃度為1 g/mL的藥液，冷藏備用。

營養半固體糊制作：稱取奶粉16 g，淀粉8 g，葡萄糖8 g，活性碳末3 g，將其混勻置于燒杯中，加入200 mL蒸餾水充分溶解，轉移至容量瓶中定容至300 mL，稍加熱至該混合物變稠，混勻冷卻后待用。

2 實驗方法

2.1 鳳仙花水提物對番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響[19,20]

取實驗小鼠60只，體重25±5 g，隨機分為6組。將小鼠分為空白組、實驗組、模型組和陽性組，實驗組又分為高劑量、中劑量、低劑量組。除空白對照組外，其余各組分別灌胃給予鳳仙花水提物低劑量(1 g/kg)、中劑量(5 g/kg)和高劑量(10 g/kg)，陽性組于造模完成后進行灌胃，根據小鼠體重給予思密達混懸液(2 g/kg)，模型組小鼠灌胃給予適量蒸餾水，給藥體積均為0.2 mL/10g體重。30 min后，分別灌胃給予番瀉葉煎劑(1 g/mL，0.2 mL/10g)，將小鼠用500 mL燒杯單獨罩在鋼絲網上，并在鋼絲網下方一定距離處放置一層潔凈濾紙。每隔一定時間換取一次墊紙，觀察并記錄小鼠灌服番瀉葉煎劑后的便數、稀便數、腹瀉潛伏期以及4 h內的腹瀉指數。通過稀便級來表示稀便程度，并根據周氏法確定稀便級。干、稀便的區分：濾紙上有污跡為稀便，濾紙上無污跡為干便。級數直徑的測量：污跡形狀為圓形直接測量直徑，形狀為橢圓形或者不規則形狀則測量其最長以及近似圓的直徑長度。級數判斷標準如下1：污跡直徑＜1 cm、2：1～1.9 cm、3：2～3 cm、4：＞ 3 cm。稀便率為稀便數與總便數的百分比。腹瀉指數(DI)為稀便率與稀便級的乘積。每1 h換1次濾紙，連續觀察4 h。

通過觀察實驗現象，并由表1可見，與空白對照組相比，其余各組均可見稀便排出，說明腹瀉模型造模成功。各劑量組的鳳仙花提取液對番瀉葉煎劑所導致的小鼠泄瀉有顯著抑制作用，其表現在使小鼠腹瀉潛伏期延長和在等時間內的累積腹瀉指數降低等方面，并且有一定的量效關系。

表1 鳳仙花對番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響

2.2 鳳仙花水提物對正常小鼠胃排空和小腸推進運動的影響[21-24]

取實驗小鼠50只，雌雄各半，體重25±5 g，隨機分成5組，分別灌胃給予小鼠低劑量、中劑量、高劑量的鳳仙花水提物，陽性組灌胃給予每只小鼠思密達混懸液，空白組灌胃給予同劑量的蒸餾水，給藥量均為0.2 mL/10 g體重。1h后按照0.8 mL/只的劑量灌胃給予每組小鼠營養性半固體糊0.8 mL/只。30 min后用頸椎脫臼法處死小鼠，打開小鼠腹腔，分別將胃賁門和幽門結扎后，摘取胃部，用干凈濾紙將摘取的胃部擦干后稱全重，之后剖開小鼠胃體，將摘取的胃部洗干凈再次稱凈重。胃內殘留物重量=胃全重－胃凈重，胃內殘留率=胃內殘留物/所灌半固體糊×100%。同時將實驗小鼠小腸用鑷子輕輕剝離出，剝離后將小腸直鋪于干凈的白紙上，測量小腸幽門到回盲腸部全長和幽門到黑色半固體糊前端的距離。小腸推進率為幽門到黑色半固體糊前端的距離與幽門到回盲部全部長度的百分比。

通過對實驗現象的觀察以及由表2數據可見，各劑量組的鳳仙花提取液對正常小鼠的胃排空和腸推進均有一定的對抗作用，并且兩者之間有量效關系，高劑量組的鳳仙花水提物對正常實驗小鼠的腸推進有明顯的抑制作用。

表2 鳳仙花對正常小鼠胃排空小腸推進的影響( x±s)

3 討論

腹瀉是一種可由多種疾病引起的普遍可見的癥狀，其程度輕者無明顯影響，重癥腹瀉可引起脫水現象和體內電解質紊亂等，因此，當面對有腹瀉癥狀的患者，在明確病因進行診斷的同時，應適當給予止瀉藥物，從而盡快的緩解癥狀，減少對患者的傷害以及并發癥的發生[25,26]。由此可見，治療腹瀉的藥物的研究對防治腹瀉有著極其重要的意義。鳳仙花民間常以水煎劑形式給藥用于治療腹瀉，且療效確切。本實驗結果表明，鳳仙花水提物對番瀉葉所致的小鼠腹瀉有明顯的抑制作用，表現在給藥組小鼠腹瀉潛伏期延長和在相同時間內的稀便數減少；通過對比胃內殘留率和小腸推進率，可以看出鳳仙花水提物對正常小鼠的胃排空和小腸推進有明顯的抑制作用。上述實驗結果初步證明了鳳仙花水提物具有一定的止瀉作用，且鳳仙花水提物抑制胃腸運動為其止瀉機制之一。

在止瀉實驗中，改良了傳統代謝籠收集糞便的方法，采取了用500 mL燒杯把小鼠單個罩于鋼絲網上，網下1 cm放置濾紙，與傳統止瀉實驗的代謝鼠籠中觀察相比較，該操作更為方便，不僅排除了動物間實驗干擾，而且避免了動物活動對實驗結果的干擾，使得潛伏期計時和濕糞數記數也更為準確。在進行胃腸運動的實驗中，通過在營養性半固體糊中加入少量炭末作為標示物，這種方法與傳統使用單純墨汁溶液相比，能更接近反映藥物對胃腸生理機能的影響，還避免了墨汁混合胃液后過稀，容易導致在體外測量腸管中墨汁推進時隨著腸管的移動而繼續流動，影響實驗結果的準確性。

在我國，鳳仙花主要分布于西南地區，藥用資源十分豐富，但仍然是一種尚未完全開發利用的天然植物資源[27,28]。本研究對鳳仙花抗腹瀉作用的研究，不僅為其臨床應用提供了實驗基礎也為鳳仙花的開發利用提供借鑒。

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Experimental Research on the Antidiarrheal Effect in Mice of theImpatiens BalsaminaAqueous Extract

WANG Hui-guo1, TANG Hong-cui1, QIN Hai-hong2, JIA Lin-yu2, LONG Wen-yue1, FENG Bao-min2
(1. College of Life Science and Technology, Dalian University, Dalian 116622, China; 2. College of Medicine, Dalian University, Dalian 116622, China)

To study the effects of aqueous extract ofImpatienson gastrointestinal smooth muscle of experimental animals and explore the antiperspirant mechanism ofImpatiens. The model of mice diarrhea induced by senna.According to the diarrhea period, the frequency of diarrhea and other indicators to evaluate the anti-diarrhea effect of theImpatiens Balsaminaaqueous extract. Using Gastric emptying and small intestinal propulsion experiments to discuss the possible mechanism of anti-diarrhea effect of theImpatiens Balsamina. The results showed thatImpatiens Balsaminaaqueous extract can treat senna induced diarrhea in mice by inhibiting the intestinal propulsion in mice and gastric emptying. It showed thatImpatiens Balsaminaaqueous extract had an inhibitory effect on diarrhea in mice, which may have anti diarrhea ingredients in the extract ofImpatiens, the inhibition of gastrointestinal motility is one of its antidiarrheal mechanism.

Impatiens Balsamina; antidiarrheal; gastric emptying; small intestinal propulsion

R285.5

A

1008-2395(2017)03-0048-03

2017-03-14

遼寧省教育廳項目（L2016）；國家自然科學基金項目（30972675）。

王惠國（1978-），女，副教授，博士，研究方向：免疫學、藥理學。