鐵皮石斛增殖培養基配方篩選試驗初報

郜李彬 曹征宇 顧韻莉 周亞輝 （上海市浦東新區農業技術推廣中心 201201）

鐵皮石斛增殖培養基配方篩選試驗初報

郜李彬 曹征宇 顧韻莉 周亞輝 （上海市浦東新區農業技術推廣中心 201201）

為提高鐵皮石斛的增殖系數，達到快速繁殖鐵皮石斛的目的，進行了鐵皮石斛增殖培養基配方篩選試驗。結果表明，適當濃度的BA配合一定量的NAA和馬鈴薯汁能夠使鐵皮石斛組培苗的增殖系數達到6.4；經試驗篩選和觀察，最佳增殖培養基配方為MS+NAA 0.5mg/L+BA 1.0mg/L+馬鈴薯汁100mg/L。

鐵皮石斛；增殖培養；培養基；配方篩選

鐵皮石斛為蘭科多年生附生草本植物，屬國家二級保護的貴重瀕危藥材，具有獨特的藥用價值，歷代醫學經典均奉其為“藥中之上品”。現代醫學研究表明，鐵皮石斛能顯著提高人體免疫力，可抗衰老、抗疲勞、耐缺氧，且具有輔助抑制腫瘤等功效。由于受到特殊的生物學及生態學特性的限制，鐵皮石斛對生長環境條件的要求非常苛刻，野生鐵皮石斛的自然繁殖能力極低、生長緩慢，目前已禁止采摘。利用植物組織培養技術[1]，可快速有效地對鐵皮石斛進行繁殖[2]。為提高鐵皮石斛的增殖系數，筆者以鐵皮石斛組培苗為試驗材料[3]，采用不同種類和不同梯度的植物生長調節素和添加不同種類的植物營養液，進行了鐵皮石斛增殖培養基配方篩選試驗，以期達到快速繁殖鐵皮石斛的目的[3-5]。現將相關試驗結果匯報如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

鐵皮石斛組培苗。

1.2 試驗方法

在無菌操作臺上，先切除鐵皮石斛組培苗基部殘葉、褐化老化部分，后按照2葉1心的標準切割分離成單株，接種入30種增殖培養基中，接種深度為0.5cm，每個培養基重復10次，放入無菌培養室培養40d。培養條件：光照時間為12h，光照強度為2000 Lx，培養溫度為（20±2）℃。

增殖培養基配方分別為：（1）MS（CK），（2）MS+馬鈴薯汁100mg/L，（3）MS+香蕉汁100mg/L，（4）MS+BA 0.5mg/L，（5）MS+BA 0.5mg/L+馬鈴薯汁100mg/ L，（6）MS+BA 0.5mg/L+香蕉汁100mg/L，（7）MS+NAA 0.5mg/L+BA 0.5mg/L，（8）MS+NAA 0.5mg/L+BA 0.5mg/L+馬鈴薯汁100mg/L，（9）MS+NAA 0.5mg/L+BA 0.5mg/L+香蕉汁100mg/L，（10）MS+NAA 1.0mg/L+BA 0.5mg/L，（11）MS+ NAA 1.0mg/L+BA 0.5mg/L+馬鈴薯汁100mg/L，（12）MS+NAA 1.0mg/L+BA 0.5mg/L+香蕉汁100mg/L，（13）MS+BA 1.0mg/L，（14）MS+BA 1.0mg/ L+馬鈴薯汁100mg/L，（15）MS+BA 1.0mg/L+香蕉汁100mg/L，（16）MS+NAA 0.5mg/L+BA 1.0mg/L，（17）MS+NAA 0.5mg/L+BA 1.0mg/L+馬鈴薯汁100mg/L，（18）MS+NAA 0.5mg/L+BA 1.0mg/L+香蕉汁100mg/L，（19）MS+NAA 1.0mg/L+BA 1.0mg/ L，（20）MS+NAA 1.0mg/L+BA 1.0mg/L+馬鈴薯汁100mg/L，（21）MS+NAA 1.0mg/L+BA 1.0mg/L+香蕉汁100mg/L，（22）MS+BA 3.0mg/L，（23）MS+BA 3.0mg/L+馬鈴薯汁100mg/L，（24）MS+BA 3.0mg/ L+香蕉汁100mg/L，（25）MS+NAA 0.5mg/L+BA 3.0mg/L，（26）MS+NAA 0.5mg/L+BA 3.0mg/L+馬鈴薯汁100mg/L，（27）MS+NAA 0.5mg/L+BA 3.0mg/ L+香蕉汁100mg/L，（28）MS+NAA 1.0mg/L+BA 3.0mg/L，（29）MS+NAA 1.0mg/L+BA 3.0mg/L+馬鈴薯汁100mg/L，（30）MS+NAA 1.0mg/L+BA 3.0mg/ L+香蕉汁100mg/L。30種培養基中均加入3%蔗糖和0.7%瓊脂，pH5.6～5.8。

2 結果與分析

經過40d的增殖培養后，每個培養基中隨機選取5瓶進行增殖系數的統計。結果表明（見表1、2），除CK、配方（2）和配方（3）外，其余27種增殖培養基中的鐵皮石斛單株苗均有不同程度的增殖生長。其中，配方（17）中的鐵皮石斛組培苗增殖系數最高，達6.4，增殖效果最好，在5%和1%差異顯著性水平下均顯著高于其他配方；配方（8）的增殖效果也較為理想，增殖系數達3.8；配方（20）、（26）、（16）之間的增殖效果差異不大，在3.2～3.4之間；其余培養基配方的增殖效果不太理想，增殖系數都在2.8以下。

3 結論與討論

3.1 植物生長調節素對鐵皮石斛組培苗增殖生長的影響

本試驗采用了BA和NAA 2種植物生長調節素，各設定了3個梯度，試驗結果表明，BA和NAA對鐵皮石斛組培苗的增殖生長非常重要，CK、配方（2）和配方（3）中由于不含有植物生長調節素，這3種培養基配方中的鐵皮石斛組培苗均未出現增殖生長。

試驗結果表明，BA對鐵皮石斛組培苗的增殖生長最為重要，在BA濃度為1.0mg/L時，增殖效果最好，較低的BA濃度（0.5mg/L）促進分叉叢生的效果不佳，過高的BA濃度（3.0mg/L）反而抑制了組培苗的增殖生長。同時，適量的NAA配合BA能夠更好地促進鐵皮石斛組培苗的增殖生長，在NAA濃度為0.5mg/L時，增殖效果最好。此外，過高濃度的NAA配合BA會導致植株生長膨脹，苗形不佳，不適合下一步生長。

表1 不同培養基配方中鐵皮石斛增殖系數統計

表2 不同培養基配方中鐵皮石斛增殖系數新復極差比較

3.2 植物營養液對鐵皮石斛組培苗增殖生長的影響

本試驗采用馬鈴薯汁和香蕉汁作為植物營養液，濃度均為100mg/L。試驗結果表明，馬鈴薯汁的增殖效果明顯好于香蕉汁，在其他條件相同的情況下，培養基中添加馬鈴薯汁的鐵皮石斛組培苗增殖系數顯著高于添加香蕉汁的培養基。

3.3 鐵皮石斛外植體誘導最佳培養基配方

試驗結果表明，鐵皮石斛組培苗增殖培養的最佳培養基配方為MS+NAA 0.5mg/L+BA 1.0mg/L+馬鈴薯汁100mg/L。

[1] 譚文澄,戴策剛.觀賞植物組織培養技術[M].北京:中國林業出版社,1991.

[2] 張泉鋒,毛碧增.鐵皮石斛培養的產業化研究[J].中草藥,2004, 35(4):438-440.

[3] 白美發,黃敏.鐵皮石斛組培技術研究[J].安徽農業科學,2008, 36(36):15802-15803.

[4] 鄭寬瑜,鄧君浪,趙輝.鐵皮石斛組培快繁技術體系研究[J].云南農業科技,2009(增刊):57-59.

[5] 謝明娟.鐵皮石斛組培快繁技術[J].北京農業,2013(30): 115-116.

2016-12-07