高效液相色譜法測定食用植物油中TBHQ、BHA、BHT含量

續穎 劉雪瑩 伍鎣

摘要 [目的]建立食用植物油中3種抗氧化劑含量的測定方法。[方法]利用甲醇溶解提取與離心相結合的技術進行脫脂處理，采用反相高效液相色譜法同時測定食用植物油中特丁基對苯二酚（TBHQ）、丁基羥基茴香醚（BHA）和二丁基羥基甲苯（BHT）含量。[結果]TBHQ、BHA、BHT濃度在1～10 mg/L時線性關系良好，相關系數分別為0.999 92、0.999 95、0.999 93；檢出限分別為0.54、0.48、0.48 mg/kg，回收率為73.7%～97.3%。[結論]該方法準確、靈敏，適用于各類植物油的TBHQ、BHA、BHT含量分析。

關鍵詞 食用植物油；特丁基對苯二酚；丁基羥基茴香醚；二丁基羥基甲苯；脫脂處理；高效液相色譜法

中圖分類號 TS225.1 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2017）18-0089-02

Abstract [Objective] To establish a method for determination of 3 antioxidants content in edible vegetable oil.[Method] The content of TBHQ，BHA，BHT in edible vegetable oil was determined by reversed phase high performance liquid chromatography （HPLC），using the technology of methanol extraction and centrifugation to conduct degreasing.[Result] Experimental results showed that the experiment of TBHQ，BHA，BHT had a good liner relationship in concentration range of 1-10 mg/L，the correlation coefficient of linear curve were 0.999 92，0.999 95，0.999 93； the limits of detection were 0.54，0.48，0.48 mg/kg； the recovery of 3 antioxidants ranged from 73.7% to 97.3%.[Conclusion] The method was proved to be highly efficient，robust and sensitive，and was suitable for the analysis of TBHQ，BHA，BHT in edible vegetable oil.

Key words Edible vegetable oil；TBHQ；BHQ；BHT；Degreasing treatment；High liquid performance chromatography

食用植物油是人們日常生活必需食品之一，近年來頻頻發生的食品安全事件中不乏與食用油有關的事件，抗氧化劑等安全性指標超出限量標準的情況會對人們身體健康造成不可逆轉的傷害，加劇了消費者對食品安全的信任危機。

特丁基對苯二酚（TBHQ）、丁基羥基茴香醚（BHA）、二丁基羥基甲苯（BHT）3類合成酚類抗氧化劑作為食品添加劑，能起到防止或延緩油脂氧化，提高油脂的穩定性和延長貯存期的作用，在食用植物油生產環節中常被單獨或混合使用。然而過量食用含抗氧化劑的食品，對人體肝、脾、腎等器官均有不利的影響，因此各國對食用抗氧化劑都有嚴格的使用限量規定。在我國食品添加劑使用衛生標準GB2760中，對3種抗氧化劑在油及食用油脂食品中使用限量規定均≤0.2 g/kg。食用植物油TBHQ、BHA、BHT在現行GB/T 23373介紹的檢測方法中，樣品經有機溶劑提取、并用價格昂貴的凝膠滲透色譜凈化系統進行樣品脫脂預處理，應用高效液相色譜法進行檢測。凝膠滲透色譜凈化系統價格昂貴、前處理繁瑣、時間長，筆者采用甲醇溶解提取與離心相結合技術進行脫脂處理優化，采用液相色譜法檢測食用植物油中TBHQ、BHA、BHT 3類抗氧化劑的含量，重點考察了方法的檢出限、線性范圍、重復性、回收率等重要的色譜方法學參數。

1 材料與方法

1.1 材料 供試花生油樣品，市售。主要儀器：Agilent 1260液相色譜儀（配紫外檢測器）；Sartorius BSA124S電子天平；森田 TD5A 離心機；Vortex XH-B漩渦混勻器。主要試劑：甲醇（色譜純）；試驗用水為一級水；TBHQ、BHA、BHT標準品（Dr.Ehrenstorfer）。

1.2 標準溶液配制

1.2.1 標準儲備液。分別稱取3種抗氧化劑標準品各50.0 mg，用甲醇定容至50 mL，濃度為1 mg/mL。

1.2.2 標準工作液。將標準儲備液用甲醇稀釋成1、2、4、8、10 mg/L 5個標準系列溶液。

1.3 液相色譜參考條件 色譜柱為C18柱（4.6 mm×250 mm，粒度2.7 μm）；進樣量15 μL；

流動相：甲醇（A），水（B）。洗脫梯度：0～5.0 min，流動相A為30%；5.0～21.5 min，流動相A從30%變化為80%；21.5～40.0 min，流動相A為80%；40.0～50.0 min，流動相A為30%。流速1 mL/min；柱溫40 ℃；紫外檢測器波長280 nm。

1.4 樣品前處理

準確稱取2 g植物油樣于10 mL塑料離心管中，用10 mL甲醇分3次（3+3+4）分別在漩渦混勻器上快速混勻1 min，離心（2 000 r/min）5 min，吸取上清液合并于10 mL離心管中；搖勻后經0.22 μm濾膜過濾，供分析。

2 結果與分析

2.1 標準曲線及檢出限

標準樣品色譜見圖1。將濃度為1、2、4、8、10 μg/L 5個標準系列溶液上機測定，根據峰的積分面積繪制5點校正曲線。獲得線性回歸方程、相關系數及檢出限（S/N）結果分別如下（圖2）：TBHQ的線性回歸方程為y=5.208 621 66x-0.185 173 5，相關系數r2=0.999 92，檢出限為0.54 mg/kg；BHA的線性回歸方程為y=5.809 462 9x+0.218 803 4，相關系數r2=0.999 95，檢出限為0.48 mg/kg；BHT的線性回歸方程為y=3.799 519 6x+0.265 006 1，相關系數r2=0.999 93，檢出限為0.48 mg/kg。

2.2 樣品重復性及回收率

2.2.1 重復性試驗。選取市售2款花生油進行測定，平行測定6次，測得樣品中TBHQ、BHA、BHT的平均濃度、RSD試驗數據見表1。表1中重復性試驗數據表明，該方法具有良好的重現性。

2.2.2 回收率試驗。

取花生油陰性樣品，分別對該花生油進行3個濃度的加標試驗，每個加標濃度樣品平行測定6次，測得回收率、RSD具體試驗數據見表2。表2回收率試驗數據表明，該方法具有較高的精密度和準確度。

3 結論

該研究通過對食用油脂苯并（α）芘、抗氧化劑含量檢測方法進行優化，試驗步驟簡單，試劑消耗量少，檢測時間大大縮短，檢測成本低，并且方法重現性良好、加標回收率較高，具有較高的精密度和準確度。表明上述方法滿足實驗室對使用油脂苯并（α）芘、抗氧化劑的定量分析測定。

參考文獻

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