西維來司鈉對大鼠腦出血保護作用機制的實驗研究

商明紅 何龍其

江蘇正大豐海制藥有限公司 江蘇省南京市 210046

西維來司鈉對大鼠腦出血保護作用機制的實驗研究

商明紅 何龍其

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目的：通過實驗的方法來研究和探討西維來司鈉對大鼠腦出血的保護作用。方法：隨機將Wistar大鼠分成五組，將此五組大鼠在動物造模24h按標準對各組進行神經缺損評分，測定腦含水量并進行病理學的觀察。結果：神經病學評分方面以model組評分為最高，sham組評分為0但是也均高于高、中、低劑量組。腦含水量方面，model組腦含水量升高很明顯，明顯高于sham組和高、中劑量組，與低劑量組差別不大。病理形態方面，sham組沒有明顯的炎癥細胞浸潤，model組和ICH組明顯出現炎癥細胞浸潤。結論：西維來司鈉對大鼠腦組織有明顯的保護作用，可在一定程度上減輕大鼠腦損傷。

西維來司鈉；腦出血；大鼠

腦出血（ICH）是心腦血管病中最為高發的一種疾病，在腦卒中，腦出血卒中占較大的比例，且又以腦出血造成的死亡率最高，在心腦血管病死亡率中占據首位。病情的急劇惡化多是由于腦出血后繼發炎癥反應、水腫、氧自由基損傷而導致的[1]。

西維來司鈉(Sivelestat sodium)是一種小分子中性粒細胞彈性蛋白酶抑制劑，對彈性蛋白酶有良好的抑制性作用，主要應用于治療急性肺損傷[2]。近年來，隨著對腦出血保護研究的深入，有研究資料認為西維來司鈉對于腦出血具有一定的保護作用[3]，本文實驗研究選用膠原酶誘導造成的腦出血的模型，以大鼠為研究對象，觀察西維來司鈉對ICH大鼠腦出血激發的炎癥浸潤、腦含水量以及病理性狀態變化的影響，以此來評價西維來司鈉是否能夠對大鼠腦出血產生保護作用。

1 實驗材料和方法

1.1 實驗對象與組別劃分

從南京醫科大學試驗動物中心購進30只實驗用Wistar大鼠，全部為健康狀態合格的雄性鼠，個體質量在220～250g之間。30只大鼠在術前12h內禁食，只提供飲水。隨機將30只大鼠平均分為假手術組（sham組）、ICH+生理鹽水組（model組 ）、ICH+Sivelestat（30mg/ kg） 組、ICH+Sivelestat（80mg/kg） 組、ICH+Sivelestat（200mg/kg）組總共五組。

1.2 實驗方法

在建模30min前，將生理鹽水、Sivelestat按組別劑量經大鼠尾部進行靜脈緩慢注射給藥。每組6只大鼠進行3d的適應性喂養，然后開始建模。對大鼠進行腹腔麻醉后，取俯臥位在大鼠腦立體定位儀上固定，保持大鼠的前囟與后囟處于同一個平面。消毒處理后，與頭皮正中做切口是前囟暴露出來，于前囟后1mm、中線向左旁開3mm的位置采取五號針頭鉆透大鼠顱骨，用微量注射器向腦組織中緩慢且勻速的注入按比例配置好的膠原酶，退針后將切口做縫合處理。假手術組注射同樣劑量的生理鹽水，其余操作與其它組別相同。術后將大鼠按組別在各自的籠中飼養，恢復正常飲食。

1.3 神經病學評分標準

建模后24小時，對五組大鼠的神經功能缺損情況進行評級和評分，標準如下：0級，評分為0分，標準為不存在任何的癥狀表現；Ⅰ級，評分為1分，標準為提尾狀態下對策肢體呈現出屈曲內收；Ⅱ級，評分為2分，標準為存在Ⅰ級癥狀且并行抗側方推力降低；Ⅲ級，評分為3分，標準為存在Ⅱ級癥狀且爬行時肢體向對側畫圈；Ⅳ級，評分為4分，標準為喪失意識，失去行走能力。

1.4 腦含水量（BWC）測定

建模后24小時，腹腔麻醉后將腦組織取出后進行精密承重，全程操作要求在5min內完成，然后對腦組織進行烘干處理再稱重，以此為依據對腦含水量進行計算，計算公式為：BWC=（濕重—干重）/濕重×100%。

1.5 病理性觀察

建模24h后，從每組中隨機挑選3只大鼠，麻醉后開胸腔，將心包膜剝離后鉗夾主動脈，在左心室匯總注入生理鹽水50ml后再緩慢注入多聚甲醛。快速去大鼠血腫的腦組織片，經過處理后進行病變區觀察，同時對腦組織病理改變狀態進行觀察。

2 結果

2.1 大鼠腦出血神經病學評分

實驗結果見表1。

神經病學評分結果為：Sham組評分為0，Model組評分最高，治療組中低、中、高三個劑量組評分均較Sham組低，與模型組相比，低劑量組差異不大，中、高劑量組有明顯差異。

2.2 腦組織含水量測定結果

表1

表2

實驗結果見表2。

與Sham組比較，Model組大鼠腦組織含水量呈明顯增加。低劑量組與Model組比較，相差不大，中、高劑量組比Model組明顯降低。

2.3 病理形態觀察結果

病理觀察，Sham組大鼠腦組織內并不存在出血病灶，細胞無明顯炎癥浸潤。Model組大鼠腦組織出血灶明顯，在血腫周圍腦組織疏松且呈高度水腫，液化壞死嚴重，有大量炎癥浸潤存在，神經元遭受明顯破壞，核結構呈模糊狀態。Sivelestat組腦組織病理改變比模型組明顯減輕，水腫、炎癥浸潤都有明顯的減輕，Sivelestat劑量越大，損傷改善效果越好，對劑量具有明顯的依賴性。

3 討論

西維來司鈉對于彈性蛋白酶具有選擇性的抑制作用，現今主要用于急性肺損傷的治療當中[4]。本實驗在動物建模后進行神經病學評分發現，腦出血對于大鼠的神經功能具有明顯的損傷作用，神經功能缺損是腦出血最直接也是最明顯的傷害。應用Sivelestat后大鼠的神經病學評分相較于假手術組明顯降低，說明Sivelestat可以劑量依賴性的對大鼠腦出血后神經功能損傷有較好的改善和保護作用。腦出血后會迅速出現腦水腫，通常在腦出血二至三天后水腫達到峰值，會對腦神經造成更嚴重的損傷，影響預后甚至造成更加嚴重不可挽回的后果。實驗發現Sivelestat能夠劑量依賴性的對腦出血大鼠腦組織的含水量產生控制和降低作用，減輕水腫程度，直接證明了Sivelestat對于腦出血大鼠的腦組織具有一定的保護作用。

[1]張春燕,李亞明.還元注射液對實驗性腦出血大鼠腦組織顯微、超微結構的影響[J].中國臨床康復,2004,8(01):186.

[2]Aikra Shimakura.Yoshihisa Kamanaka,Yasuhiko Ikeda,eta. l Neutropil elastase inhibition reduces cerebral ische-mic damage in the middle cerebral artery occlusion[J].Brain Res,2000,858: 55.

[3]Cinquetti M,Micellli S, Voltolina C,et al.:The pattern of gastroesophageal reflux in asthmatic children. J Asthma 2002,39(02):135-142.

[4]Avidan B,Sonnenberg A,Schnell TG, et al.:Temporal associations between coughing or wheezing and acid reflux in asthmatics.Gut 2001,49(06):767-772.

商明紅（1984-），男，江蘇省南京市人。碩士研究生學歷，工程師，主要從事藥物研發工作。