大青葉中藥飲片與配方顆粒的質(zhì)量研究

劉麗娟，陳紅英，李翠芬

(1.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院，廣東 廣州 510150；2.廣州白云山制藥總廠藥物研究所，廣東 廣州 510515)

大青葉中藥飲片與配方顆粒的質(zhì)量研究

劉麗娟1，陳紅英2，李翠芬2

(1.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院，廣東 廣州 510150；2.廣州白云山制藥總廠藥物研究所，廣東 廣州 510515)

目的對比研究不同產(chǎn)地大青葉中藥飲片與配方顆粒的質(zhì)量和價格，為臨床醫(yī)生及患者用藥提供參考依據(jù)。方法采用HPLC測定大青葉中藥飲片與配方顆粒中水溶性有效成分尿苷、鳥苷的含量；并進(jìn)行不同產(chǎn)地大青葉中藥飲片水溶性浸出物比較以及與大青葉配方顆粒價格的比較。結(jié)果5種不同產(chǎn)地大青葉中藥飲片的尿苷、鳥苷含量及水溶性浸出物均存在差異，大青葉飲片以安徽、河北產(chǎn)地為最高；4種大青葉配方顆粒水溶性成分尿苷、鳥苷含量無顯著差異，且與安徽、河北兩地大青葉中藥飲片中尿苷、鳥苷含量基本一致；相同劑量的配方顆粒的價格為傳統(tǒng)中藥飲片價格的1.5～2.5倍.結(jié)論大青葉傳統(tǒng)飲片質(zhì)量以安徽、河北的為佳，與大青葉配方顆粒質(zhì)量基本一致而價格較低。臨床中可以綜合考慮患者用藥方便及經(jīng)濟(jì)承受能力，酌情選用大青葉傳統(tǒng)中藥飲片或配方顆粒。

大青葉；傳統(tǒng)中藥飲片；配方顆粒；價格；質(zhì)量研究

大青葉為清熱解毒的要藥，其應(yīng)用具有悠久的歷史，以大青葉為原料的制劑在我國廣泛使用，在非典、禽流感等重大疫情的防治工作中也發(fā)揮了重要的作用[1]。目前醫(yī)院中藥房使用的大青葉主要有二種形式:傳統(tǒng)中藥飲片和中藥配方顆粒。大青葉質(zhì)量、療效及經(jīng)濟(jì)適用方便性等一直都是醫(yī)生和患者所關(guān)心的問題。本文對不同產(chǎn)地的大青葉飲片與配方顆粒的質(zhì)量和價格進(jìn)行比較分析，旨在為醫(yī)生和患者用藥提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器與試劑

1100型液相色譜儀 （美國安捷倫)；Sarturiuscp 225D電子分析天平 (北京賽多利斯天平有限公司)；電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；101-1型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海實(shí)驗(yàn)儀器廠）；甲醇、冰乙酸為色譜純,無水乙醇為分析純,水為去離子水。尿苷Uridine （批號：110887-200202，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）；鳥苷 Guanosine（批號：111977-201501，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）購于廣東省藥品檢驗(yàn)所。

1.2 藥物

大青葉中藥飲片，來源：經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)周誠教授鑒定為十字花科植物菘藍(lán)Isatis indigotica Fort.的干燥葉。 產(chǎn)地：安徽（批號：160901、160301、160401）；河北（批號：150503、160401、無）；廣東（批號：150201、150401、150601）；河南、甘肅（無批號）,價格：0.04元/g。大青葉配方顆粒來源：華潤三九（批號 1603001S、1609001w、1608001s）； 廣東一方 （批號：6031131、5071361、5071241）；北京康仁堂（批號：16010481、15115911、16070481）；江陰天江（批號：1605106、1605099、1608108）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:KromasilODS(25 cm×4.6 mm,5 μm);流動相:1% 醋酸溶液（A）、甲醇（B）,梯度洗脫：0 min（90%A∶10%B）→10～40min （35%A∶65%B）→60 min（10%A∶90%B）;流速 1.0 mL/min;檢測波長 254 nm;柱溫25.0℃。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的制備[2]17精密稱取尿苷和鳥苷對照品各 10.31 mg、10.61 mg，分別配成 0.55 μg/mL、53.05 μg/mL的尿苷和鳥苷對照品溶液,進(jìn)樣前用0.45 um濾膜過濾。

2.2.2 樣品溶液的制備 傳統(tǒng)飲片樣品溶液制備：精密稱取于60℃干燥的大青葉藥材2.5 g,加水75 mL,先行浸泡30 min，煎煮兩次，第一次煎煮45 min,濾過,殘渣加水50 mL繼續(xù)煎煮30 min,合并兩次濾液,濃縮至10 mL，以80%乙醇(V/V)醇沉24 h,回收乙醇至無醇味,最后樣品液定容至25 mL,搖勻,作供試液,進(jìn)樣前用0.45 μm濾膜過濾。

配方顆粒樣品溶液制備：分別稱取相當(dāng)于2.5 g傳統(tǒng)飲片的配方顆粒，溶于50～80 mL 100℃開水中，緩慢冷卻至室溫，過濾，濾液置100 mL容量瓶中，加水至刻度，振搖均勻，進(jìn)樣前用0.45 μm濾膜過濾。

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密量取不同體積的混合對照品溶液尿苷-鳥苷（51∶49）1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、20.0 μL,自動進(jìn)樣3次,記錄色譜圖,以對照品進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），以平均峰面積（s）為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到尿苷、鳥苷的回歸方程分別為y=2089.18x+52.53、y=2607.62x+131.05，r=0.999 9。結(jié)果表明對照品鳥苷、尿苷在0.05～1.0 μg范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

分別取尿苷、鳥苷對照品溶液,進(jìn)樣量10 μL,連續(xù)進(jìn)樣3次,記錄色譜圖,RSD值分別為0.66%、0.51%,表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別在尿苷、鳥苷對照品溶液配制后的0、2、4、8、12、16、20、24、30、36 h 時進(jìn)樣測定相應(yīng)峰面積,RSD值分別為0.57%、0.63%,表明兩種對照品溶液在36 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知尿苷和鳥苷含量的大青葉中藥飲片 2.5 g,加入尿苷和鳥苷對照品 2、5、10 mL，照“2.2.2”項(xiàng)樣品溶液制備方法制備供試品溶液,進(jìn)樣分析,進(jìn)樣量為10 μL,記錄色譜圖，重復(fù)試驗(yàn)5次。計算尿苷和鳥苷的平均回收率分別為100.9%（RSD=1.05%）、99.8%（RSD=0.99%）。

2.7 樣品含量測定

取不同批次的樣品,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液,再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行含量測定,進(jìn)樣量10 μL,每批次測3次,相同產(chǎn)地或相同生產(chǎn)廠家再取均值作為最終測定結(jié)果。結(jié)果見表1-2。

表1不同產(chǎn)地大青葉飲片中尿苷和鳥苷的含量測定結(jié)果 (mg/g,±s,n=3）

表1不同產(chǎn)地大青葉飲片中尿苷和鳥苷的含量測定結(jié)果 (mg/g,±s,n=3）

產(chǎn)地 尿苷 鳥苷安徽 0.610 9±0.021 8 0.383 7±0.090 4河北 0.718 5±0.082 1 0.332 0±0.038 6河南 0.457 4±0.036 1 0.320 1±0.029 1甘肅 0.421 4±0.034 8 0.221 5±0.019 9

表2大青葉配方顆粒(按飲片計)中鳥苷、尿苷平均含量 （mg/g,±s,n=3)

表2大青葉配方顆粒(按飲片計)中鳥苷、尿苷平均含量 （mg/g,±s,n=3)

生產(chǎn)廠家 尿苷 鳥苷華潤三九 0.721 8±0.052 7 0.458 7±0.036 5廣東一方 0.792 5±0.004 5 0.326 8±0.007 6北京康仁堂 0.707 5±0.001 8 0.405 5±0.013 8江陰天江 0.795 3±0.000 9 0.377 1±0.025 5

經(jīng)兩兩比較的q檢驗(yàn)(Newman-Keuls法)尿苷、鳥苷含量安徽、河北兩地與其他產(chǎn)地存在差異，以安徽、河北產(chǎn)地最高，其他產(chǎn)地的含量較低。

經(jīng)兩兩比較的q檢驗(yàn)(Newman-Keuls法)4個廠家生產(chǎn)的大青葉配方顆粒尿苷、鳥苷含量無差異（P＞0.05）；且與表1中產(chǎn)地為安徽、河北的大青葉傳統(tǒng)飲片中尿苷、鳥苷含量無差異（P＞0.05）。表明不同廠家生產(chǎn)的大青葉配方顆粒質(zhì)量無差異，并且與安徽、河北兩地產(chǎn)大青葉傳統(tǒng)中藥飲片質(zhì)量相當(dāng)。

2.8 大青葉傳統(tǒng)中藥飲片樣品水溶性浸出物檢查

按照中藥常規(guī)煎法制得水溶性浸出物，照水溶性浸出物測定法（通則2201）項(xiàng)下的熱浸法測定[3]，結(jié)果見表3。

表3不同產(chǎn)地大青葉中藥飲片每克飲片所得浸出物量比較 （g，±s，n=3）

表3不同產(chǎn)地大青葉中藥飲片每克飲片所得浸出物量比較 （g，±s，n=3）

來源 平均浸出物的量 每克飲片所得浸出物量安徽 0.441 6±0.005 8 0.176 7±0.002 3河北 0.451 9±0.007 4 0.180 8±0.003 0廣東 0.356 4±0.031 4 0.142 6±0.010 0河南 0.325 0±0.010 7 0.130 0±0.017 0甘肅 0.315 7±0.025 3 0.126 3±0.007 0

經(jīng)兩兩比較的q檢驗(yàn)(Newman-Keuls法)，不同產(chǎn)地的大青葉中藥飲片的水溶性浸出物安徽、河北產(chǎn)地與其他產(chǎn)地存在差異，以安徽、河北兩地為佳。

2.9 大青葉配方顆粒價格

與相同量的傳統(tǒng)飲片(0.04元/g)價格相比,同當(dāng)量飲片配方顆粒的價格為傳統(tǒng)中藥飲片1.5-2.5倍。具體見表4。

表4大青葉配方顆粒價格表

3 討論

大青葉臨床常用的用藥方式為水煎煮。藥典所收載的大青葉的質(zhì)量控制方法是采用HPLC測定活性成分靛玉紅的含量，因靛玉紅為脂溶性成分，水溶性差，在大青葉水提液的指紋圖譜中很難看到靛玉紅的色譜峰[4]。而相關(guān)研究表明大青葉水溶性成分可發(fā)揮抗菌、抗病毒和調(diào)節(jié)免疫等作用[5-8]。大青葉藥材中，含有胞嘧啶核苷（胞苷）、尿嘧淀核苷（尿苷）和鳥嘌呤核苷（鳥苷）這3種物質(zhì)，他們是組成核苷酸的重要組分，此三者為大青葉藥材中重要的成分，以此3種物質(zhì)進(jìn)行定量分析對控制大青葉水提物的質(zhì)量有重要意義[2]38。本文通過模擬一般中藥湯劑的常規(guī)煎法測得樣品水溶性浸出物和水溶性成分尿苷、鳥苷為指標(biāo)成分的含量測定對大青葉中藥飲片進(jìn)行質(zhì)量研究。

研究結(jié)果表明不同產(chǎn)地的傳統(tǒng)大青葉中藥飲片的水溶性浸出物的量及尿苷、鳥苷含量存在差異，以安徽、河北產(chǎn)地最高。因此中藥材的種植除了要實(shí)施GAP管理外，建議醫(yī)院盡量采購質(zhì)優(yōu)的產(chǎn)品。

藥品價格比較表明大青葉傳統(tǒng)飲片的價格相對較低，配方顆粒價格相對較高，大約是傳統(tǒng)飲片的1.5～2.5倍。顯然選擇傳統(tǒng)飲片可以較少的醫(yī)療費(fèi)用取得相同治療效果。

配方顆粒的優(yōu)點(diǎn)是無需煎煮，即沖即飲，且質(zhì)量較穩(wěn)定。傳統(tǒng)飲片因藥材產(chǎn)地不同質(zhì)量不同且需臨時煎煮，療效與煎藥器具、火候、加水量、煎煮時間等因素密切相關(guān),因此在煎煮過程要嚴(yán)格遵循湯劑煎煮要求或向藥師咨詢,以保證湯劑的質(zhì)量和療效。醫(yī)生在選擇配方顆粒時要考慮病人的經(jīng)濟(jì)能力并告知患者。

[1]鄧湘昱.大青葉化學(xué)成分與質(zhì)量控制方法研究[D].沈陽:沈陽藥科大學(xué),2008:12.

[2]劉曉玲.大青葉和板藍(lán)根質(zhì)量控制方法研究[D].沈陽:沈陽藥科大學(xué),2004:17，38.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].四部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:202.

[4]袁 波.復(fù)方大青葉注射液質(zhì)量控制方法研究[D].沈陽:沈陽藥科大學(xué),2006:26.

[5]洪文艷,唐博恒,劉金華,等.大青葉提取物抗登革病毒Ⅱ型的體外實(shí)驗(yàn)研究[J].中國現(xiàn)代藥代藥物應(yīng)用,2010,4(20):161-162.

[6]喻淑慶,陳湘漪,余 凌.大青葉提取物抗單純皰疹病毒Ⅱ型的體外實(shí)驗(yàn)研究[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2008,27(4):394-396.

[7]高 博,張建明,王宇平,等.大青葉水溶性提取物對登革病毒抑制作用及機(jī)制探討[J].海峽藥學(xué),2013,25(7):205-207.

[8]趙 紅,張淑杰,馬立人.大青葉水煎劑調(diào)節(jié)小鼠免疫細(xì)胞分泌IL-2、TNF-α的體外研究[J].陜西中醫(yī),2003,24(8):757-759.

（本文編輯 蘇 維）

Quality Research on Chinese Medicinal Pieces and Formula Granule of Folium Isatidis

LIU Lijuan1,CHEN Hongying2,LI Cuifen2
(1.The Third Affiliated Hospital of Guangzhou Medicine University,Guangzhou,Guangdong,510150,China;2.Institute of Meteria Medica of Baiyunshan Pharmaceutical General Factory,GuangZhou,GuangDong 510515,China)

ObjectiveTo determinate and compare the quality and price of Folium Isatidis pieces from different areas,and provide a reference for doctors or patients to elect different pieces types.MethodsTo study the quality on Chinese mdicical pieces of Folium Isatidis through detecting the conent of uridine and guanosine by HPLC and compare the amount of the water-soluble extraction of herbal pieces and their price of formula granule.ResultsThe amount of water-solute extraction and the content of uridine and guanosine in traditional Folium Isatidis pieces samples from five areas were different,it was higher in Anhui and Hebei provinces.The content of effective opponents of Uridine and Guanosine in four guanule preparation was not different,it agreed with the traditional pieces from Anhui and Hebei.The price of the guanule preparation is 1.5-2.5 times of Folium Isatidis Chinese medicinal pieces.ConclusionThe quality of traditional Folium Isatidis pieces in Anhui and Hebei is good,the amount of water-soluble extraction and the content of effective opponents in them is the same as the guanule preparation,but the price of them is lower than the guanule preparation.The pieces and formula granule of Folium Isatidis could be selected according to convenient useness of medicine and economic condition of patients.

Folium Isatidis;traditional Chinese medicine pieces;formula granule;price;quality research

R286

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2017.07.007

本文引用：劉麗娟,陳紅英,李翠芬.大青葉中藥飲片與配方顆粒的質(zhì)量研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2017，37（7）：723-725.

2017-01-08

劉麗娟，女，碩士，副主任中藥師、講師，主要從事中藥質(zhì)量研究及臨床藥學(xué)工作，E-mail：lijuanliu222＠163.com。