β-半乳糖凝集素3在非小細胞肺癌組織中的表達變化及意義

張艷紅，趙桂鳳，尹奎夫，劉美華，魏秀平

(1濰坊市婦幼保健院，山東濰坊 261000；2濰坊市人民醫(yī)院)

β-半乳糖凝集素3在非小細胞肺癌組織中的表達變化及意義

張艷紅1，趙桂鳳2，尹奎夫1，劉美華1，魏秀平1

(1濰坊市婦幼保健院，山東濰坊 261000；2濰坊市人民醫(yī)院)

目的 觀察β-半乳糖凝集素3(Gal-3)在非小細胞肺癌(NSCIC)組織中的表達變化，并探討其臨床意義。方法 140例NSCIC患者，手術切除腫瘤組織140例份作為肺癌組，選取其中60例份癌旁組織作為癌旁組，同時選取60例份肺良性腫瘤組織作為良性組。采用免疫組織化學染色法檢測三組組織中的Gal-3，并觀察Gal-3的表達與NSCLC臨床病理參數(shù)的關系。結(jié)果 肺癌組、癌旁組、良性組Gal-3陽性表達率分別為67.1%、38.3%、43.3%，肺癌組與癌旁組、良性組比較P均<0.05。腺癌、高臨床分期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC患者Gal-3陽性表達率較鱗癌、低臨床分期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高(P均<0.01)。結(jié)論 Gal-3在NSCLC組織中高表達，與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展有關。

β-半乳糖凝集素3；肺癌；非小細胞肺癌；腫瘤預后

肺癌病死率居全球癌癥首位[1]。由于人體肺內(nèi)缺乏痛覺神經(jīng)分布，雙肺有強大的呼吸功能儲備，早期肺癌患者通常沒有癥狀，大部分肺癌患者就診時已處于局部晚期或出現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移，因此深入研究肺癌轉(zhuǎn)移機制并盡早干預其過程具有重要意義[2]。癌基因、原癌基因激活的重要機制是基因過表達。β-半乳糖凝集素3(Gal-3)屬于S凝集素、半乳糖凝集素3亞家族，專一識別β-半乳糖苷[3]，在上皮細胞與免疫細胞中廣泛表達。有研究[4]報道,Gal-3的表達與乳腺癌、甲狀腺癌等有關，但其在肺癌中的研究較少。非小細胞肺癌(NSCLC)為肺癌的常見病理類型[5]，因此本研究觀察了140例NSCLC組織中Gal-3的表達情況，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年2月～2016年2月在濰坊市婦幼保健院和濰坊市人民醫(yī)院經(jīng)過病理確診的140例NSCIC患者，年齡50～74(59.3±10.2)歲，其中男76例、女64例。入選患者均符合美國聯(lián)合癌癥分類委員會(AJCC)和國際抗癌聯(lián)盟(UICC)2002年制定的肺癌診斷與分期標準[6]。排除標準：已行放、化療者；患有間質(zhì)性肺炎等其他肺部疾病者;妊娠期或哺乳期患者。140例患者中鱗癌96例、腺癌44例，中高分化83例、低分化57例，根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟(2002版)pTNM病理分期標準I～Ⅱ期67例、Ⅲ～Ⅳ期73例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移86例、無轉(zhuǎn)移54例。手術切除腫瘤組織140例份作為肺癌組，并選取其中距離癌組織5 cm的癌旁組織60例份作為癌旁組。同時選取同期因肺良性腫瘤行手術切除的60例份肺良性腫瘤組織作為良性組。三組患者性別、年齡比較無統(tǒng)計學差異。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，所有患者知情同意并簽署知情同意書。

1.2 Gal-3檢測方法 采用免疫組織化學方法。鼠抗人Ga1-3單克隆抗體、EliVisionTMplus試劑盒和DAB顯色試劑盒均購自北京普利萊基因技術有限公司。將三組肺組織石蠟切片經(jīng)二甲苯、梯度乙醇脫蠟至水，PBS沖洗3次，140 ℃高壓進行抗原修復，共150 s，自然冷卻后再用PBS沖洗。滴入一抗，陰性對照滴入PBS，4 ℃冰箱過夜。次日PBS沖洗，滴入二抗，37 ℃溫箱內(nèi)孵育30 min。PBS沖洗，滴入DAB顯色劑，最后經(jīng)蘇木素染色，梯度乙醇脫水，二甲苯透明封片。Gal-3主要在細胞質(zhì)中表達，當出現(xiàn)黃色或黃棕色顆粒時為陽性表達。免疫組化結(jié)果由我院兩位資深病理醫(yī)師評定，用染色強度和陽性細胞百分比的乘積來評分。其中染色強度陰性計0分、弱計1分、中計2分、強計3分。選擇染色較好的區(qū)域，隨機選擇連續(xù)的5個高倍視野，計數(shù)10個高倍視野(×400)分別計數(shù)100個腫瘤細胞，計算陽性細胞數(shù)百分比(%)，取其平均值，陽性細胞≤5%計0分、>5%～25%計1分、>25%～50%計2分、>50%計3分。將上述兩項積分的乘積<3定為陰性表達，≥4定為陽性表達。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

肺癌組、癌旁組、良性組Gal-3陽性表達率分別為67.1%(94/140)、38.3%(23/60)、43.3%(26/60)，肺癌組與癌旁組、良性組比較P均<0.05，癌旁組與良性組比較P>0.05。Gal-3表達與NSCLC臨床病理參數(shù)的關系見表1。

表1 Gal-3表達與NSCLC臨床病理參數(shù)的關系

3 討論

NSCLC占肺癌的80%～85%，男性發(fā)病多見，其發(fā)病機制尚不清楚，可能與多種基因出現(xiàn)高表達有關。Gal-3是β-半乳糖苷結(jié)合的動物凝集素的一種，相對分子質(zhì)量為31 000 Da[7]，由N端結(jié)構域、富含甘氨酸、酪氨酸與脯氨酸串聯(lián)重復序列的結(jié)構域、糖識別結(jié)構域組成。Gal-3具有調(diào)節(jié)細胞的生長與抑制細胞的凋亡、參與調(diào)節(jié)細胞黏附的過程、參與炎癥反應過程、參與調(diào)節(jié)免疫、參與腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移、參與mRNA前體剪接等多種生物學功能。Gal-3基因的過表達導致細胞異常增生，使腫瘤細胞間的黏附力減弱，增強移動性，降低細胞的分化能力[8]。腫瘤細胞在黏附力降低的情況下，受到血流沖擊，容易脫離原發(fā)灶出現(xiàn)淋巴結(jié)遠處轉(zhuǎn)移[9]。Takeuchi等[10]研究發(fā)現(xiàn)，Gal-3在正常甲狀腺(0/35)或良性結(jié)節(jié)(1/11)中僅有1例呈陽性表達，而在乳頭狀和濾泡狀癌中陽性表達率達100%。李路等[11]研究表明，NSCLC中Gal-3表達率高，其高表達率和NSCLC的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移關系密切，抑制Gal-3的表達后，抗腫瘤效應顯著增強。李靜等[12]研究表明，NSCLC患者Gal-3的表達水平與肺部良性病變的患者相比明顯上調(diào)，Gal-3的表達水平與腫瘤直徑、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在明顯相關性，腫瘤直徑較大、分化程度較低、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的Gal-3水平明顯增加，提示Gal-3的高表達是NSCLC患者的預后不良因素。

本研究結(jié)果表明，Gal-3在肺癌組的陽性率較良性組、癌旁組高，Gal-3的表達與NSCLC的病理類型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關，與上述學者的研究結(jié)果不完全一致，考慮與所選研究對象不同有關。今后我們將擴大樣本量，進一步探討Gal-3的表達水平與腫瘤分化程度的關系。總之，Gal-3在NSCLC組織中高表達，與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展有關，可以為臨床醫(yī)師早期診斷NSCLC和判斷患者預后提供可靠幫助。

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山東省濰坊市衛(wèi)生局科研計劃項目(2016wsjs009)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.22.023

R734.2

B

1002-266X(2017)22-0061-02

2016-12-11)