膠艾湯不同炮制組方對(duì)動(dòng)物激素水平與凝血機(jī)制的影響

蔣曉煌，蔣孟良*，賀衛(wèi)和，李 紅，曾 婷，何坪欣，趙新昱，張彪彪，趙梓含，鄧瀟瀟

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

膠艾湯不同炮制組方對(duì)動(dòng)物激素水平與凝血機(jī)制的影響

蔣曉煌，蔣孟良*，賀衛(wèi)和，李 紅，曾 婷，何坪欣，趙新昱，張彪彪，趙梓含，鄧瀟瀟

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

目的 優(yōu)選膠艾湯的最佳炮制組方。方法 對(duì)膠艾湯全方生品、部分炮制、全方炮制a、全方炮制b等四種不同的炮制組合方進(jìn)行大鼠激素水平與凝血機(jī)制的測(cè)定，比較不同炮制組方的藥效活性。結(jié)果 膠艾湯對(duì)大鼠雌二醇、孕酮、睪丸酮、內(nèi)皮素與6-酮-前列腺素F1α、血栓素B2作用強(qiáng)弱順序是全方炮制b＞全方炮制a＞部分炮制＞全方生品。結(jié)論 膠艾湯全方炮制b的止血作用最強(qiáng)。

膠艾湯；中藥炮制；雌二醇；孕酮；睪丸酮；內(nèi)皮素；6-酮-前列腺素F1α；血栓素B2

膠艾湯出自《金匱要略·婦人妊娠第二十》[1]，臨床用于治療崩漏，月經(jīng)過(guò)多，先兆流產(chǎn)，產(chǎn)后子宮收縮不全等功血癥，總有效率達(dá)90%以上[2]。其臨床應(yīng)用報(bào)道較多，藥理研究報(bào)道較少，有研究發(fā)現(xiàn)其具有縮宮與止血作用[3-7]。關(guān)于膠艾湯炮制研究則更少，僅對(duì)方中單味藥進(jìn)行了炮制研究[6-8]，但膠艾湯不同炮制組方的藥理研究未見(jiàn)報(bào)道，本研究根據(jù)炮制理論，在前期研究基礎(chǔ)上[8-9]，將方中各藥物進(jìn)行不同的炮制，再組合成4個(gè)制品方，并對(duì)去勢(shì)大鼠進(jìn)行雌二醇（E2）、孕酮（P）、睪丸酮（T）等激素及內(nèi)皮素（ET）、6-酮-前列腺素 F1α（6-Keto-PGF1α）和血栓素B2（TXB2）含量比較實(shí)驗(yàn)，以?xún)?yōu)選出更有效的炮制組合方，為臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

SD大白鼠，清潔級(jí)，雌雄兼取，體質(zhì)量（200±20）g，購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK（湘）2009-004。動(dòng)物飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，標(biāo)準(zhǔn)飼料、全營(yíng)養(yǎng)喂養(yǎng)，自由飲水，籠具每天清洗消毒1次、紫外燈滅菌10 min，每周空氣消毒1次，每天換氣2次，每次約2 h，空調(diào)恒溫，白天明、晚上暗。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)適應(yīng)1周。

1.2 儀器

Stat Fax 2100型酶標(biāo)儀（美國(guó) Awareness Technoligy,Inc公司）；TP1004型電子天平 （奧豪斯國(guó)際貿(mào)易上海有限公司）；TGL20M臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（湖南邁達(dá)儀器有限公司）；DK-S22型電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.3 藥品與試劑

艾膠湯中的阿膠、艾葉、干地黃、當(dāng)歸、川芎、白芍、甘草等藥材購(gòu)于長(zhǎng)沙市老百姓大藥房東塘店，經(jīng)湖南省食品藥品檢驗(yàn)研究院方石林主任藥師鑒定為《中華人民共和國(guó)藥典》正品；宮血寧膠囊（云南白藥集團(tuán)股份有限公司，0.13 g/粒，成人一日口服6粒，批號(hào) 20150612）；E2、P、T 放射免疫測(cè)定試劑盒（上海生物試劑公司，批號(hào) 20150302、20150511、20150408）；ET、6-Keto-PGF1α和 TXB2試劑盒（解放軍總醫(yī)院科技開(kāi)發(fā)中心放免所，批號(hào) 20150705、20150703、20150620）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 藥物的炮制

2.1.1 全方生品 各藥物項(xiàng)下凈選加工或切制的同批飲片。

2.1.2 部分炮制 僅將方中艾葉炒炭、地黃蒸制成熟地黃，其他藥物均生用。

2.1.3 全方炮制a 蛤粉炒阿膠、艾葉炭、熟地炭、當(dāng)歸炭、白芍炭、酒川芎、蜜甘草。

2.1.4 全方炮制b 蒲黃炒阿膠、醋艾葉、熟地黃、酒當(dāng)歸、酒白芍、酒川芎、蜜甘草。

以上各不同炮制組合方中藥物的炮制參照文獻(xiàn)方法炮制[5-7]。

2.2 藥物的提取

稱(chēng)取當(dāng)歸 54 g，川芎 36 g，艾葉 54 g，加藥物重量10倍量水提取揮發(fā)油至油不再增加為止；地黃108 g，白芍72 g，甘草36 g，置不銹鋼鍋中，加8倍量的水浸泡1 h，再煮沸60 min，過(guò)濾，藥渣再加6倍量水煮沸40 min，過(guò)濾，合并濾液，加提取揮發(fā)油時(shí)濾出的藥液，置水浴上濃縮，分別加阿膠生品36 g，或不同炮制品烊化（溶解），揮發(fā)油加0.5%吐溫-80，混勻，再加入藥液中，最后加蒸餾水至664 mL(每mL藥液含飲片0.58 g)備用。貯存于4℃冰箱中。

2.3 對(duì)去卵巢成年大鼠E2、P、T的測(cè)定

取SD雌性大鼠，用乙醚作淺麻醉，常規(guī)消毒，摘除雙側(cè)卵巢，分籠飼養(yǎng)，5 d后逐只作陰道涂片，檢查上皮角化細(xì)胞，每天一次，連續(xù)5 d，檢查剔除因摘除卵巢不全而出現(xiàn)動(dòng)情期的大鼠，隨機(jī)將去卵巢大鼠按體質(zhì)量分成去卵巢空白對(duì)照組和生品組、部分炮制組、全方炮制a、全方炮制b及陽(yáng)性對(duì)照組，另設(shè)正常空白組，每組10只。灌胃給予膠艾湯各炮制組合方5.8 g/kg，空白組灌胃等體積0.5%吐溫-80，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃宮血寧，一天一次，連續(xù)一周，于末次給藥1 h后，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，放射免疫法測(cè)定 E2、P、T 含量[10-11]。

2.4 對(duì)雄性大鼠 ET、6-Keto-PGF1α、TXB2的測(cè)定

取SD雄性大鼠，空白對(duì)照組和生品組、部分炮制組，全方炮制a，全方炮制b，陽(yáng)性對(duì)照組，每組10只。灌胃給予膠艾湯各炮制組合方5.8 g/kg，空白組灌胃等體積0.5%吐溫80，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃宮血寧，一天一次，連續(xù)一周，于末次給藥1 h后，腹主動(dòng)脈取血，加入放有肝素（1%）溶液的離心管內(nèi)抗凝，在4℃下以3 000 r/min離心10 min，分離血漿，按試劑盒說(shuō)明，采用放射免疫分析法測(cè)定ET、6-keto-PGF1α和 TXB2含量。

2.5 統(tǒng)計(jì)分析

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 對(duì)去卵巢成年大鼠性激素E2、P、T的作用

實(shí)驗(yàn)表明，各組動(dòng)物造模后，E2、P、T等均顯著下降，與正常空白組比P＜0.01，說(shuō)明造模成功。給藥后膠艾湯各組各指標(biāo)均有增加，但生品組增加不明顯，與模型組比P＞0.05，其余各組與模型組比P＜0.05 或 P＜0.01；各炮制組作用均強(qiáng)于生品組，除全方炮制 b 具有顯著性差異（P＜0.05）外，其余無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；全方炮制a與b作用也強(qiáng)于宮血寧組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。 詳見(jiàn)表 1。

表1膠艾湯各炮制品組合方對(duì)激素水平的影響 （n=10，±s）

表1膠艾湯各炮制品組合方對(duì)激素水平的影響 （n=10，±s）

注：與模型組比 *P＜0.05，**P＜0.01；與生品組比 ＃P＜0.05。

炮制方法正常空白組模型空白生品組部分炮制組全方炮制a全方炮制b宮血寧組劑量/（g·kg-1）--5.8 5.8 5.8 5.8 0.6 E2/（pg·mL-1）74.2±17.1**37.5±10.3 47.5±16.9 50.3±12.9*56.1±17.5**63.8±15.8**＃55.7±14.6**P/（ng·mL-1）1.07±0.21**0.68±0.18 0.74±0.17 0.83±0.22 0.87±0.18*0.91±0.19*＃0.86±0.20*T/（pg·dL-1）3.82±0.65**2.16±0.72 2.73±0.83 2.89±0.63*2.93±0.59*3.16±0.77**2.91±0.82*

3.2 對(duì)雄性大鼠 ET、6-keto-PGF1α和 TXB2的影響

實(shí)驗(yàn)表明，給藥后膠艾湯各組ET和TXB2等指標(biāo)均有增加，但生品組TXB2增加不明顯，與空白組比 P＞0.05， 其余各給藥組與空白組比 P＜0.05 或0.01；6-keto-PGF1α均有所降低，各給藥組與空白組比 P＜0.05 或 P＜0.01； 各炮制組作用均強(qiáng)于生品組，除全方炮制b與生品組比具有顯著性差異P＜0.05外，其余無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，詳見(jiàn)表2。

表2膠艾湯各炮制品組合方對(duì)ET、6-keto-PGF1a和TXB2的影響 （n=10，±s）

表2膠艾湯各炮制品組合方對(duì)ET、6-keto-PGF1a和TXB2的影響 （n=10，±s）

注：與生品組比 *P＜0.05。

炮制方法正常空白組生品組部分炮制組全方炮制a全方炮制b宮血寧組劑量/（g·kg-1）-5.8 5.8 5.8 5.8 0.6 ET/（pg·mL-1）93.6±19.1*120.5±22.8 138.7±21.6 140.1±19.9 145.3±22.8*144.2±20.5 6-keto-PGF1a/（pg·mL-1）221.3±22.7*195.6±24.5 187.4±21.9 180.5±18.9 172.8±21.6*182.7±22.8 TXB2/（pg·mL-1）196.8±18.8*210.7±21.7 220.3±19.8 225.8±20.3 237.6±22.9*222.5±21.6

4 討論

4.1 對(duì)激素影響

中醫(yī)崩漏是指婦女非周期性子宮出血，其發(fā)病急驟，暴下如注，大量出血者為“崩”；病勢(shì)緩，出血量少，淋漓不絕者為“漏”。與西醫(yī)功血癥類(lèi)似，以青春期和更年期婦女多見(jiàn)。青春期少女下丘腦-垂體-卵巢軸尚未建立，更年期婦女卵巢衰退，導(dǎo)致激素水平下降，孕酮為孕激素，睪丸酮有較強(qiáng)的孕激素樣作用，其治療功血主要作用機(jī)制是雌激素作用下持續(xù)增生的子宮內(nèi)膜轉(zhuǎn)化為分泌期，從而達(dá)到止血效果，亦可起到藥物性刮宮作用[12]。實(shí)驗(yàn)表明，膠艾湯對(duì)去勢(shì)大鼠激素水平均有提高作用，炮制品作用強(qiáng)于生品，說(shuō)明膠艾湯治療崩漏其方中藥物須采用科學(xué)的炮制方法，方能發(fā)揮最佳療效。

4.2 對(duì) ET影響

ET是目前所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的縮血管物質(zhì)，主要通過(guò)與靶細(xì)胞膜上的ET受體結(jié)合引起生物效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)表明，膠艾湯能增強(qiáng)大鼠血漿中ET的含量，說(shuō)明膠艾湯具有增加血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌內(nèi)皮素的作用，其止血作用與其縮血管物質(zhì)ET增加有關(guān)。

4.3 對(duì) 6-Keto-PGF1α與 TXB2影響

TXA2和PGI2是調(diào)節(jié)血管壁緊張性的一對(duì)重要血管活性物質(zhì)。TXA2可促進(jìn)血小板聚集和血栓形成而止血，PGI2具有抑制血小板聚集和促進(jìn)血管擴(kuò)張作用，二者在血液中迅速代謝為無(wú)活性的TXB2與6-Keto-PGF1α[13]。本實(shí)驗(yàn)研究表明，膠艾湯能顯著升高大鼠血漿中TXB2和降低6-Keto-PGF1α的含量，說(shuō)明其對(duì)血小板聚集、血管痙攣收縮或形成具有促進(jìn)作用，這與其止血功效吻合，且炮制后作用顯著增強(qiáng)。說(shuō)明中藥炮制的重要性、科學(xué)性與臨床療效的關(guān)聯(lián)性。

膠艾湯對(duì)家兔子宮收縮作用、對(duì)大鼠凝血酶原時(shí)間與纖維蛋白溶解活性強(qiáng)弱順序是全方炮制b＞全方炮制a＞部分炮制＞全方生品[14]，與本文研究結(jié)果一致。

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（本文編輯 蘇 維）

Effects of Jiaoai Decoction with Different Processing Methods on Hormone and Clotting Mechanism of Animals

JIANG Xiaohuang,JIANG Mengliang*,HE Weihe,LI Hong,ZENG Ting,HE Pingxin,ZHAO Xinyu,ZHANG Biaobiao,ZHAO Zihan,DENG Xiaoxiao
(Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China)

Objective To optimize processing method of Jiaoai decoction.Methods The effects of Jiaoai decoction with four different methods,all crude drugs,part proccesing drugs,all drugs processing a,all drugs processing b,on hormone and clotting mechanism in rats were compared.Results The effects order of Jiaoai decoction on estradiol,progesterone,testosterone,ET,6-Keto-PGF1α and TXB2 of rats was all drugs processing b ＞all drugs processing a＞ part proccesing drugs ＞ all crude drugs.Conclusions The hemostatic effect of all drugs processing bin Jiaoai decoction was the strongest.

Jiaoai decoction;Chinese crude drug processing;estradiol； progesterone； testosterone； ET； 6-Keto-PGF1α；TXB2

R283；R285.5

A

doi：10.3969/j.issn.1674－070X.2017.06.003

本文引用：蔣曉煌，蔣孟良，賀衛(wèi)和，李 紅，曾 婷，何坪欣，趙新昱，張彪彪，趙梓含，鄧瀟瀟.膠艾湯不同炮制組方對(duì)動(dòng)物激素水平與凝血機(jī)制的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017,37（6）：591-593.

2016-08-06

湖南省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（14JJ2107）。

蔣曉煌，男，碩士，主要從事中藥炮制研究。

* 蔣孟良，男，教授，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：hhjmL@163.com。

本文引用：譚旭儀，陳獻(xiàn)韜，高書(shū)圖，段小波.補(bǔ)腎、活血、祛痰法對(duì)激素性股骨頭壞死模型血液流變學(xué)的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017,37（6）：594-598.