不同加工方法對延胡索3種生物堿含量的影響

龍全江，張穎，徐雪琴

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不同加工方法對延胡索3種生物堿含量的影響

龍全江，張穎，徐雪琴

安徽中醫藥高等專科學校，安徽蕪湖 241000

目的 比較不同加工方法對延胡索藥材中有效成分的影響。方法 采用HPLC測定延胡索中原阿片堿、去氫紫堇堿、延胡索乙素的含量。色譜柱：Agilent HC-C18（2）柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（三乙胺調pH 5.3）＝26∶74；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測波長：280 nm；進樣量：10 μL。在上述色譜條件下，3種成分均得到很好分離，各成分質量與峰面積在相應范圍內線性關系良好（2≥0.999 6），平均加樣回收率分別為100.31%、99.34%、99.34%（RSD≤2.70%）。結果 大號規格（鮮品直徑2.0～3.0 cm）煮制時間5～6 min、中號規格（鮮品直徑1.5～1.9 cm）煮制時間2～4 min、小號規格（鮮品直徑0.7～1.4 cm）煮制時間1～2 min者中原阿片堿、去氫紫堇堿、延胡索乙素的含量及3種生物堿總含量比各組其他樣品高，經煮制加工的延胡索藥材樣品中3種生物堿的含量總體低于蒸制加工所得的延胡索藥材。結論 本研究為延胡索藥材產地加工工藝的確定提供了依據。

延胡索；蒸制；煮制；生物堿；高效液相色譜法

延胡索為罌粟科植物延胡索W.T.Wang的干燥塊莖，具有顯著的鎮痛、鎮靜、催眠作用，對冠心病、心律失常、胃潰瘍等多種疾病有較好的治療效果[1]。《中華人民共和國藥典》收載的產地加工方法為“置沸水中煮至恰無白心時，取出，曬干”[2]。延胡索主產于浙江東陽、磐安等地，陜西、安徽、江蘇、湖北、湖南等地也產[3]。產地加工傳統習慣上主要依據藥材大小掌握不同的煮制時間，煮至中心有一小白點時即可[4]。查閱文獻發現，有研究者以延胡索乙素為考察指標，分析了不同采收期及不同加工方法對延胡索藥材的影響，結果以蒸制加工延胡索乙素含量高[5]；張麗宏等[6]以延胡索乙素、原阿片堿為指標的研究，認為微波法比煮法為好；孫乙銘等[7]同樣以延胡索乙素、原阿片堿為指標對產地加工工藝進行研究。

中藥以多成分起效為其作用特點，延胡索中所含延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索丙素（原阿片堿）等生物堿類化學成分[8-9]具有很強的鎮痛、鎮靜和抗心律失常等多種生理活性[1]。本研究在對延胡索產地加工方法進行實地調研的基礎上，結合生產實際情況，通過測定不同加工方法的延胡索藥材中去氫紫堇堿、延胡索乙素、原阿片堿3種生物堿成分的含量，對其產地加工方法進行全面考察和探討，更加客觀、全面地評價產地不同加工方法對延胡索藥材質量的影響。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜檢測儀（包括G1322A在線脫氣機、G1312B二元梯度泵、G1329B自動進樣器、G1316A柱溫箱、G4212B DAD檢測器、Agilent 1260色譜工作站），Agilent HC-C18（2）色譜柱（5 μm，4.6 mm×250 mm，NO.588905-902），DV215CD十萬分之一電子分析天平（美國OHAUS），JK-250DB型超聲波清洗器（合肥金尼機械制造有限公司）。

延胡索乙素對照品（批號CFN99553，純度98%）、去氫紫堇堿對照品（批號CFN90330，純度98%）、原阿片堿對照品（批號CFN99399，純度98%），武漢天植生物技術有限公司；乙腈（色譜純），天津市大茂化學試劑廠，娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。

2 樣品采集與制備

延胡索鮮藥材于2014年5月5日采自安徽省蕪湖縣花橋鎮，不同大小規格的樣品均采自同一塊藥田，全部樣品經本校中藥生藥教研室汪榮斌副教授鑒定為罌粟科植物延胡索W.T.Wang的塊莖。

延胡索鮮藥材經淘洗，凈選，除去外皮等非藥用部分，略晾干多余水分，按大小對藥材進行分檔，大、中、小規格分別編號為A、B、C，依據傳統經驗，鮮品直徑大號為2.0～3.0 cm，中號為1.5～1.9 cm，小號為0.7～1.4 cm。根據傳統加工方法調研情況，取不同檔樣品（每份500 g）分別進行蒸、煮制備，取出，繼續曬至干。曬干的成品呈不規則扁球形，表面黃色或黃褐色，具不規則網狀皺紋。曬至藥材不再減失質量，判斷為藥材已曬干，計算折干率。折干率（%）＝曬干后成品質量÷鮮藥材質量×100%。樣品加工方法、加工后性狀、折干率、含水量見表1（f為加工前放置2周樣品）。

表1 延胡索藥材樣品加工性狀、折干率及含水量

3 方法與結果

3.1 色譜條件

色譜柱：Agilent HC-C18（2）柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（三乙胺調pH 5.3）＝26∶74；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測波長：280 nm；自動進樣，進樣量10 μL。在此條件下，理論塔板數按延胡索乙素峰、原阿片堿峰和去氫紫堇堿峰計算均不低于3000[10]。空白溶劑色譜圖中在與延胡索乙素、去氫紫堇堿、原阿片堿色譜峰相應位置上無峰，說明此系統條件無干擾。色譜圖見圖1。

3.2 對照品溶液制備

精密稱取原阿片堿對照品1.46 mg、去氫紫堇堿對照品2.09 mg、延胡索乙素對照品3.36 mg，置于1000 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，溶解，即得對照品溶液。

3.3 供試品溶液制備

精密稱取樣品粉末0.5 g，加水25 mL，超聲提取2次，30 min/次，過濾，合并濾液，定容至100 mL容量瓶中，過0.45 μm微孔濾膜，取續濾液，即得。

注：A.混合對照品；B.供試品；1.原阿片堿；2.去氫紫堇堿；3.延胡索乙素

3.4 線性關系考察

取3種對照品溶液，按“3.1”項下色譜條件分別依次進樣2.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、30.0 μL，測定峰面積。以對照品進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程。原阿片堿＝1270.8＋0.004 3，2＝0.999 9，在0.002 92～0.043 8 μg范圍內線性關系良好；去氫紫堇堿＝2108.2－1.847 2，2＝0.999 6，在0.004 18～0.062 7 μg范圍內線性關系良好；延胡索乙素＝906.56－1.421 2，2＝0.999 6，在0.006 72～0.100 8 μg范圍內線性關系良好。

3.5 精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液，重復進樣6次，結果原阿片堿峰面積RSD＝2.71%，去氫紫堇堿峰面積RSD＝1.70%，延胡索乙素峰面積RSD＝2.70%，表明精密度良好。

3.6 重復性試驗

取同一批號樣品，按“3.3”項下方法分別制備6份供試品溶液，原阿片堿、去氫紫堇堿和延胡索乙素平均含量分別為1.87、0.33、0.56 mg/g，RSD分別為2.19%、2.17%、2.18%，表明方法重復性良好。

3.7 穩定性試驗

取同一供試品溶液，在0、1、2、3、4、5、6、7、8 h進樣測定，原阿片堿峰面積RSD＝4.04%，去氫紫堇堿峰面積RSD＝1.56%，延胡索乙素峰面積RSD＝1.79%，表明供試品溶液在8 h內穩定。

3.8 加樣回收率試驗

精密稱取6份已知含量的樣品各0.25 g，添加各對照品溶液適量，按樣品含量測定項下方法操作，測得原阿片堿、去氫紫堇堿和延胡索乙素平均加樣回收率分別為100.31%、99.34%、99.34%，RSD分別為1.60%、2.27%、2.70%，見表2。

表2 3種生物堿加樣回收率試驗

3.9 樣品的測定

取各制備好的樣品，分別制備供試品溶液，按“3.1”項下色譜條件測定3種成分含量，結果見表3。

表3 延胡索樣品中3種生物堿含量測定結果（mg/g，以干燥品計）

4 討論

比較延胡索產地加工方法發現，經煮制加工的延胡索藥材中原阿片堿、去氫紫堇堿、延胡索乙素的含量及3種生物堿總含量總體低于蒸制加工所得的延胡索藥材，從多指標成分角度分析，延胡索藥材產地加工采用蒸法較好。

在對延胡索藥材傳統加工企業調研時發現，不同大小藥材的煮制時間不同，一般大者5～6 min，小者3～4 min。試驗中根據藥材大小分別設定加工時間并通過藥材切面觀察藥材加工程度。從原阿片堿、去氫紫堇堿、延胡索乙素的含量及3種生物堿總含量變化看，大號規格（鮮品直徑2.0～3.0 cm）煮制時間5～6 min者被檢測成分含量高，中號規格（鮮品直徑1.5～1.9 cm）煮制時間2～4 min者被檢測成分含量高，小號規格（鮮品直徑0.7～1.4 cm）煮制時間1～2 min者被檢測成分含量高。上述規格試驗樣品繼續延長煮制時間則被檢測成分含量下降。試驗還對煮法與蒸法進行了比較研究，在加工時間相同情況下，蒸法比煮法加工者被檢測成分含量高。試驗結果表明，不合理延長煮制時間，有效成分會有所損失，而蒸法則保留有效成分較好。

調研中還發現，延胡索藥材存在加工前趁鮮放置（連帶泥土）一段時間后再加工的現象，試驗中另設該組樣品（連帶泥土放置2周）進行比較研究。結果表明，在相同加工條件下，趁鮮放置會使被檢測成分含量下降，可見延胡索產地加工應以采收后即行加工為好。另外，不同加工品規格之間被檢測成分含量差異明顯，規格越小的延胡索藥材有效成分含量越高。

綜上所述，不同加工方法對延胡索藥材有效成分含量有影響。不同規格其煮制時間、煮制程度、蒸制時間、蒸制程度等都可能影響測定結果，因此，制定規范化的操作規程很有必要。本研究為制定延胡索產地加工工藝規范提供了參考依據。

[1] 龍全江,徐雪琴,王曉閣.延胡索化學成分、藥理作用與產地加工技術研究概況[J].甘肅中醫學院學報,2014,31(5)：78-80.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫藥科技出版社,2015：139.

[3] 徐雪琴,龍全江.不同產地延胡索采收加工技術調查與分析[J].現代中藥研究與實踐,2015,29(6)：7-9.

[4] 龍全江.中藥材加工學(第二版)[M].北京：中國中醫藥出版社,2010：69.

[5] 任江劍,徐建中,俞旭平.不同采收期和不同加工方法對延胡索藥材的影響[J].中藥材,2009,32(7)：1026-1028.

[6] 張麗宏,游修琪,肖碧英,等.不同加工方法對延胡索質量的影響[J].中成藥,2011,33(3)：471-476.

[7] 孫乙銘,俞旭平,徐建中,等.延胡索產地加工的工藝研究[J].中國現代應用藥學,2011,28(10)：923.

[8] 湯法銀,聶愛國,李艷玲.中藥延胡索的研究進展[J].臨床和實驗醫學雜志,2006,5(2)：185-186.

[9] 許翔鴻,王崢濤,余國奠,等.延胡索中生物堿成分的研究[J].中國藥科大學學報,2002,33(6)：483-486.

[10] 田永亮,竇志英,曹柳,等.延胡索產地醋煮工藝研究[J].時珍國醫國藥,2010,21(5)：1184-1186.

Effects of Different Processes on Contents of Three Alkaloid Ingredients in Coridalis Rhizoma

LONG Quan-jiang, ZHANG Ying, XU Xue-qin

Objective To explore the effects of different processes on the contents of three alkaloid ingredients in Coridalis Rhizoma. Methods The contents of three alkaloid ingredients (protopine, dehydrocorydaline, tetrahydropalmatine) were determined by HPLC. Agilent HC-C18(2) column (4.6 mm × 250 mm, 5 μm) was set at 35 ℃; acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution (triethylamine adjusted pH 5.3) (26:74) was set as mobile phase; the flow rate was 1.0 mL/min and detection wavelength was set at 280 nm; the injection volume was 10 μL. The three components were separated well under these chromatographic conditions. The linear relationship between the mass of each component and the peak area was good (2≥0.999 6). The average recoveries were 100.31%, 99.34%, and 99.34%, respectively (RSD≤2.70%). Results The contents of protopine, dehydrocorydaline, tetrahydropalmatine and the total contents of three alkaloids were higher than other groups in large size samples (diameter of fresh products was 2.0–3.0 cm) which were boiled 5–6 minutes, the medium size samples (diameter of fresh products was 1.5–1.9 cm) which were boiled 2–4 minutes and the small size samples (diameter of fresh products was 0.7–1.4 cm) which were boiled 1–2 minutes. The contents of alkaloid in boiled process were lower than steamed process. Conclusion The results of study provide an experimental basis for origin processing of Coridalis Rhizoma.

Coridalis Rhizoma; steaming process; boiling process; alkaloids; HPLC

10.3969/j.issn.1005-5304.2017.07.021

R282.4

A

1005-5304(2017)07-0090-04

安徽省高等教育振興計劃人才項目-省級專業帶頭人資助項目（2013年）；蕪湖市科技計劃產學研合作重點項目（2013cxy03）

（2016-08-27）

（2017-01-09；編輯：陳靜）