冷凝集對XS-4000i自動血細胞分析儀的影響及處理

陳龍琴，于帥，樂家新，肖征

(中國人民解放軍總醫院海南分院檢驗中心海南三亞572013)

冷凝集對XS-4000i自動血細胞分析儀的影響及處理

陳龍琴，于帥，樂家新，肖征

(中國人民解放軍總醫院海南分院檢驗中心海南三亞572013)

目的探討冷凝集對XS-4000i自動血細胞分析儀檢查結果的影響及處理方法。方法同一冷凝集標本分別采用手握標本10 min，手握20 min，37℃水浴標本30 min，血漿置換和置換血漿加手握10 min，進行血常規檢測，比較五種方法的效果差異。結果手握10 min、手握20 min和置換血漿加手握10 min均獲得滿意的血常規檢測結果，MCHC值由540 g/L降至361～376 g/L，血漿置換和37℃水浴標本30 min效果較差，MCHC降至426～455 g/L。結論手握10 min、手握20 min和置換血漿加手握均可以用于冷凝集標本血常規檢測的前處理。

冷凝集；XS-4000i；血細胞分析儀

血液冷凝集素綜合征是一種當血液溫度低于某一特定溫度時，循環中自身抗體就會與紅細胞抗原相結合的自身免疫性疾病。冷凝集閾值溫度很少高于30℃，通常低于25℃，無癥狀患者尤其如此[1]。而若室溫條件發生凝集即會影響血常規檢測結果。由于冷凝集素主要為IgM，少部分是IgG和IgA，而IgM抗體對紅細胞I類抗原具有特異性，除直接對紅細胞有作用外，也可影響淋巴細胞、中性粒細胞、單核細胞、巨噬細胞和血小板計數，使白細胞(WBC)、血小板(PLT)的結果假性減低?，F已有冷凝素對德國BAYER公司生產的ADVIA-120，日本Sysmex公司生產的SF-3000和中國邁瑞公司生產BC3000三類不同儀器檢測影響的報道，此三種設備采用的細胞化學染色加光散射法和電阻抗法，而對于細胞熒光染色法加電阻抗法的Sysmex XS-4000i檢測影響暫未見報道，尤其海南地區氣溫較高，冷凝集發生較少，容易被忽視。

1 資料與方法

1.1 患者及標本情況患者以頭痛、嘔吐入急診科，總膽紅素26.6 μmol/L，直接膽紅素8.8 μmol/L，室溫處于細沙樣凝集狀態，管壁可見細小顆粒，MCHC 540 g/L高于正常值上限的360 g/L，且在紅細胞直方圖中發現異常波峰，見圖1，離心后標本血漿未見乳糜、溶血等可引起血清濁度增大的因素。

1.2 儀器與試劑日本Sysmex公司生產的XS-4000i自動血細胞分析儀及配套原裝試劑，該儀器利用電阻抗原理檢測紅細胞和血小板，用十二磺基硫酸鈉法測量血紅蛋白濃度，半導體激光流式細胞原理結合化學熒光染色技術進行白細胞計數和分類[2]。

圖1 標本側壁可見凝集顆粒，血常規結果可見MCV 102.7 fL，MCH55.5 ng，MCHC 540 g/L。Flag標記紅細胞凝集？渾濁/HB干擾？；RBC直方圖可見雙凸特征。

1.3標本處理方法及流程對同一標本在五種不同處理條件下進行血常規檢測，分別為手握標本10 min，手握標本20 min，37℃水浴標本30 min，使用生理鹽水置換離心后標本上層70%血漿，置換血漿+手握10 min，每次檢測后室溫放置半小時。MCHC最低值且涂片時紅細胞為游離狀態為最終結果，同時對冷凝集標本進行涂片檢查以發現血常規改變原因。實驗室溫度20℃。

2 結果

血常規檢測中，手握10 min、手握20 min和置換血漿+手握均可使MCHC轉為正常，而水浴和置換血漿暫未改善冷凝集對血常規結果的影響，其中置換血漿+手握MCHC效果最好，可將MCHC值降至最低，見表1。在保溫處理中手握法和置換血漿+手握相對于冷凝集的影響中可觀察到保溫WBC、RBC、MCV、HCT、MCH、MCHC變化明顯，而Hb、MCV、PLT、白細胞分類比例變化不明顯。同時冷凝集在涂片和鏡檢可觀察到明顯的紅細胞凝集團，其中紅細胞凝集團中可見白細胞和血小板。在紅細胞直方圖中可觀察到處理條件有效的手握10 min、手握20 min和置換血漿+手握方法，均可見異常波峰減低至正常，見圖2和圖3。

表1 不同處理條件的紅細胞冷凝集標本在Sysmex XS-4000i儀器的血常規檢測結果

圖2 (左圖)保溫處理前可見RBC聚集，部分WBC包裹于紅細胞凝集團中，且涂片可見顆粒(×1 000)；(右圖)置換血漿+手握后在37℃孵箱進行涂片可見涂片和鏡下細胞分布轉為正常(×1 000)。

圖3 手握10 min、手握20 min、置換血漿+手握均使得異常紅細胞峰降低，而水浴處理和置換血不能有效降低異常紅細胞峰。

3 討論

XT 4000i的Hb檢測采用光電比色法，利用溶血劑裂解紅細胞釋放出Hb，后者與溶血劑中的有關成分結合形成Hb衍生物，采用特定波長下測定吸光度變化換算出HBG含量。本研究中Hb未受冷凝集影響，表明凝集的紅細胞已全部被溶血劑破壞。但有報道顯示，嚴重冷凝集標本會形成不均勻的凝集塊，造成紅細胞吸樣不均勻或者凝集塊不能被完全溶解而使Hb假性偏高或假性偏低，需要結合標本狀態綜合判斷[3]。

XT 4000i的RBC計數、PLT計數、HCT、MCV、MCH和MCHC均采用電阻抗方法測定，其中受冷凝集影響RBC和HCT假性減低，MCH和MCHC假性增高，PLT和MCV未見明顯改變。電阻抗法檢測紅細胞和血小板時，細胞通過小孔時，形成相應大小的脈沖，脈沖的多少即紅細胞和血小板的數目，高度代表單個脈沖細胞的體積，當聚集的紅細胞通過小孔時，不能作為有效體積紅細胞計數，進入紅細胞分布區域，導致紅細胞計數區細胞數量減少，但正常體積范圍的紅細胞被計數并計算MCV值，因此MCV受影響較小。因HCT=MCV×RBC，RBC減低則HCT減低[4]。血小板體積較小且數量較多不易受紅細胞包裹影響，PLT計數未受明顯影響，同沙超敏等[5]和梁培松等[3]報道一致。另外對于冷抗體自身免疫性溶血貧血和陣發性冷性血紅蛋白尿的患者還需要注意保溫室出現溶血現象，大量紅細胞碎片使PLT計數假性增高[6]。

XS-4000i中的WBC和白細胞分類計數采用的是細胞化學熒光染色加散色法檢測，其中WBC受冷凝集影響發生假性減低，白細胞分類未受冷凝集影響。當紅細胞凝集時不能短時間內被溶血劑溶解，光散射法雖能通過高角度檢測WBC內部結構，通過低角度檢測WBC體積來識別WBC，但對包裹于未被溶解紅細胞團中的WBC無法檢測，致使WBC計數假性偏低，也只會出現假性偏低的可能[7]。另外通過血涂片結果和白細胞分類未受冷凝集影響可推測，冷凝集所致的紅細胞聚集形成的白細胞包裹是沒有選擇性，即冷凝集狀態下白細胞分類占比仍然是可信的。

相對于手握10 min、手握20 min和置換血漿，置換血漿+手握顯示出最佳MCHC效果，然而置換血漿需把握好血漿置換量，操作中避免震蕩，且最多僅能吸取上清的70%，否則容易吸取到PLT和WBC，導致PLT和WBC假性減低[3]。本研究中手握20 min同置換血漿+手握的血常規結果較接近，手握20 min的結果可作為真實結果，但如果對于冷凝集效價高，閾值溫度也高的標本單純通過保溫難以獲得效果，仍需要通過置換血漿降低冷凝集效價，同時聯合保溫措施才能得到真實可靠的結果。在實驗過程中水浴30 min和置換血漿處理方法，對冷凝集未見改善，原因分析為水浴箱距離血細胞分析儀距離遠，在運輸過程中標本表面水分蒸發，溫度下所致。而血漿置換法因處理過程中未對鹽水進行溫浴處理，且置換后缺少保溫措施，使得冷凝集素活化。置換血漿+手握10 min剛好彌補了置換血漿時未保溫的問題，使得結果轉為正常。如果有條件實驗室，應在血細胞分析儀旁邊放置一小型血液加溫器，效果將更加明顯。

冷凝集素綜合征可見于支原體肺炎、淋巴瘤、自身免疫性溶血性貧血、傳染性單核細胞增多癥、上呼吸道感染、乙肝、肺癌、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)等疾病[1]。在一項回顧性兒童支原體肺炎中發現，在疾病發展的中間一段時間可以出現冷凝集實驗百分之百陽性，而受檢測時間的限制首次發現冷凝集的陽性率在38.3%～67.5%[8]。三亞地區氣溫較高，出現冷凝集患者多為冷凝集素閾值溫度寬或效價較高，具有一定的臨床意義，有待進一步為臨床提供冷凝集信息。尤其對于外科手術患者，室溫冷凝集將極大增加術中意外風險。

總之，對于冷凝集標本需要慎重對待，對于有意義的冷凝集素抗體應及時同臨床溝通獲得雙方的知情，而對于實驗室檢查應注意紅細胞直方圖是否有異常波峰，是否有異常紅細胞凝集報警，是否有標本凝集現象，是否有MCHC＞360 g/L，并及時同科室值班人員交接班，避免漏檢漏診。

[1]樂家新,馬駿龍,徐菡,等.紅細胞冷凝集對不同類型血細胞分析儀檢測結果的影響探討[J].醫療衛生裝備,2009,30(2):69-71.

[2]樂家新,徐菡,蘭亞婷,等.Sysmex XS-800i血細胞分析儀性能評價與白細胞分類探討[J].醫療衛生裝備,2008,29(12):86-88.

[3]梁培松,王結珍,張秀明,等.冷凝集對血常規檢測結果的影響及消除方法探討[J].國際檢驗醫學雜志,2014,35(8):1055-1056.

[4]叢玉隆,樂家新.現代血細胞分析技術與臨床[M].北京:人民軍醫出版社,2005:1.

[5]沙超敏,蘭亞婷,劉軍,等.冷凝集對血常規自動化分析的影響和處理[J].臨床檢驗雜志(電子版),2014,3(3):988-691.

[6]蔣浩琴,徐黎明,呂元.冷凝集和紅細胞碎片對血液分析儀測定干擾案例報道[J].檢驗醫學,2012,27(11):951-954.

[7]陳燕,許立新.紅細胞冷凝集對不同類型血細胞分析儀檢測結果的影響分析[J].中外醫學研究,2015,13(17):53-55.

[8]呂明,霍曉筠.40例兒童肺炎支原體肺炎冷凝集試驗回顧性分析[J].遼寧醫學雜志,2000,14(06):308-309.

R446.11+3

B

1003—6350（2017）12—2041—03

2017-01-11)

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.12.051

于帥。E-mail：18210508221@163.com