口腔舌厚度與舌鱗狀細胞癌淋巴結轉移的關系

張琦雪 張曉芳 盧雪嬌

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口腔舌厚度與舌鱗狀細胞癌淋巴結轉移的關系

張琦雪 張曉芳 盧雪嬌

目的 探討口腔舌厚度與舌鱗狀細胞癌淋巴結轉移及預后的關系。方法 采用三步法，檢測96例舌鱗狀細胞癌患者口腔舌厚度。結果 口腔舌厚度測量值與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤部位、侵襲深度，腫瘤分期及分化程度、是否轉移等并不存在相關性(P>0.05)；而淋巴結受累者口腔舌厚度測量值明顯上調(P<0.05)，而無淋巴結受累者其測量值與正常組相比差異無統計學意義(P>0.05)，口腔舌厚度測量值的增加與淋巴結受累有關。結論 口腔舌厚度測量值水平與舌鱗狀細胞癌的淋巴結轉移及預后有一定的相關性，但還需進一步系統研究。

舌鱗狀細胞癌；預后；不同口腔舌厚度；淋巴結轉移；相關性

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1162～1164)

舌鱗狀細胞癌占全身惡性腫瘤發病率的第六位，多數患者患病后初次就診已經伴有廣泛的淋巴結轉移或者遠端的轉移，就已處于該病的晚期，失去根治手術的機會，耽誤了治療的最佳時機，早期診斷對疾病的及時發現及治療具有重要的臨床意義，從而盡可能避免對患者的過度治療或延誤治療[1-2]。近年來研究發現，在不同口腔舌厚度在癌瘤區域淋巴結轉移中具有重要的作用[3]，臨床中我們發現在舌鱗狀細胞癌的發病中存在不同口腔舌厚度增厚。本研究收集舌鱗狀細胞癌患者不同口腔舌厚度的表達情況、淋巴結轉移資料，通過分析舌鱗狀細胞癌癌瘤區淋巴結轉移及預后與不同口腔舌厚度的演變規律，進一步探討舌鱗狀細胞癌的淋巴結轉移預后情況。

1 資料與方法

1.1 病例收集

納入我院口腔外科2012年1月至2015年1月行舌鱗狀細胞癌手術切除的96例患者病例樣本，經病理檢查均確診為原發性舌鱗狀細胞癌，納入研究的所有患者均為初診的患者，且在術前未進行任何放療、化療及分子靶向治療等。96例中男性74例，女性22例，年齡42～78歲，平均年齡為(61.34±1.13)歲。在術中取材之后，腫瘤的位置以病理組織報告為標準，患者入組后進行口腔舌厚度的測量，同時進行病理學的監測，對舌鱗狀細胞癌組織的病理學進行分型，腫瘤的浸潤程度按照國際抗癌聯盟標準分類[4]，淋巴分化以及轉移采用的國際WHO的診斷標準[5]進行分析判斷，對所有手術治療的患者從出院到死亡進行隨訪觀察，每月1次。同時納入健康人群23例作為對照組，所有受試者簽訂知情同意書，收集標本前該臨床試驗研究通過了醫院倫理委員會的批準。

1.2 口腔舌厚度測量

口腔舌厚度參照國際測量標準，舌厚度為舌癌組織上皮到最深肌肉及基質的長度，對于舌癌組織形成潰瘍的患者，測量的厚度應當為潰瘍底到舌癌最深的部位。

1.3 RNA提取及qPCR檢測

對96例舌鱗狀細胞癌組織采用RNA提取試劑盒進行RNA提取，采用TaqMan RNA試劑盒檢測不同口腔舌厚度的VEGF測量值。采用RNU6作為內參進行校正。對口腔舌厚度采用二步法進行檢測，第一步是通過莖環引物來合成互補DNA，再通過RNA的逆轉錄系統對10 ng RNA進行逆轉了反應體系進行反應，在PCR管加入10 μl的逆轉錄緩沖液，總的RNA濃度調整到2 ng/μl，最后加入5 μl的逆轉錄引物，在冰上混勻之后反應5 min，行梯度變形反應，反應條件為94 ℃、30 s，60 ℃、30 s，72 ℃、60 s，72 ℃、7 min，一次遞減；第二步采用Platinum SYBR Green qPCR的反應體系，該體系具體形式：Taqman RNA的特異性引物與2×Taqman Universal混合液相互混合之后通過逆轉錄PCR反應，再加入5 μl cDNA到RNA的酶溶液中，將體積擴增至20 μl，通過循環反應94 ℃、30 s，60 ℃、30 s，72 ℃、60 s，72 ℃、7 min，遞減的擴張40個循環之后，對實驗結果進行分析，采用熒光實時定量反應，按照PCR操作說明，Ct的檢測值應當在20～32之外的需要進行第2次檢測。應用△Ct=Ct不同口腔舌厚度-CtRNU6的計算公式計算不同口腔舌厚度的VEGF測量值。

1.4 統計學檢測

所有納入分析研究的數據應用SPSS 21.0的統計軟件建立數據庫，將不同口腔舌厚度分為2組，小于平均值為低表達組，大于平均值作為高表達組。通過分析不同口腔舌厚度與發病相關因素分析以逐步回歸法篩選有統計學意義的變量，對臨床病理因素之間的風險情況采用logistic回歸分析，組間比較用方差分析，組間均數比較采用t檢驗，組間率的比較用卡方檢驗，兩兩比較采用LSD檢驗。應用Kruskal-wallis H檢驗進行多組間數據的比較，具有統計學差異的以P<0.05表示。

2 結果

2.1 口腔舌厚度測量值與舌鱗狀細胞癌臨床病理特征的相關性

96例舌鱗狀細胞癌組織口腔舌平均厚度為5.436 mm，95%CI為0.323～0.534。測量值低于平均值的有42例，高于平均值的有54例，口腔舌厚度測量值與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤部位、侵襲深度、腫瘤分期、分化程度及遠處轉移等無相關性(P>0.05)；而淋巴結受累者口腔舌厚度測量值明顯上調(P<0.05)，而無淋巴結受累者其測量值與正常組相比差異無統計學意義，P>0.05，見表1。

表1 口腔舌厚度測量值與舌鱗狀細胞癌臨床病理特征的相關性

2.2 口腔舌厚度測量值與淋巴結轉移風險的關系

采用logistic回歸分析口腔舌厚度測量值與淋巴結轉移的相關性，口腔舌厚度測量值上升會增加舌鱗狀細胞癌淋巴結轉移的風險性，通過調整風險,其OR=5.16，95%CI為1.27～20.83，P=0.03，見表2。

表2 口腔舌厚度測量值與淋巴結轉移風險的關系

2.3 口腔舌厚度與VEGF表達相關性

口腔舌厚度與VEGF表達具有相關性，見表3。

表3 舌鱗狀細胞癌患者口腔舌厚度與VEGF表達的關系

3 討論

近年來舌鱗狀細胞癌的發病率呈逐年上升的趨勢，雖然治療水平不斷提高，但是患者的生存率并未得到明顯提高，其轉移與復發仍是其死亡的主要原因[4]。國內外目前對舌鱗狀細胞癌的診斷研究主要集中在病因學、遺傳基因、早期診斷手段的研究，治療方面研究主要集中在放射、化學以及手術方法改進等方面，雖然取得了一定進展，但該病的發病率及死亡率并未得到明顯降低，說明研究的深度尚不足，研究還處于基礎階段尚未應用于臨床。由于舌鱗狀細胞癌作為惡性腫瘤，對人類生命具有重大的威脅[5-6]。因此，進一步尋找有關舌鱗狀細胞癌復發、轉移生物標記物及敏感特異是該病有效治療、提高生存率的關鍵點。其次做好舌鱗狀細胞癌發病的預防及早期發現，減少其發病率和轉移率，是今后研究的重要方向[7]。

臨床實踐研究發現，多數早期舌鱗狀細胞癌在發病的初期并無明顯的臨床癥狀，在首次就診時大部分舌鱗狀細胞癌患者已經進入中晚期，因此舌鱗狀細胞癌患者預后極差，生存率較低[8]。通過大量的臨床研究發現，舌癌淋巴轉移是重要的轉移方式，然而對其診斷方面并無有效的早期診斷指標，因此尋找早期診斷舌癌轉移的有效方法是當今口腔腫瘤亟待解決的問題[9]。近年來的研究直接對癌組織淋巴浸潤深度及病理分級作為評估淋巴轉移的有效方法，但是該方法存在較大的主觀性，對評估結果造成一定的誤差，因此對臨床疾病的診斷并不為良好的方法[10]。部分研究通過采用術前的MRI檢測，但該項操作價格昂貴，操作復雜，因此不適于普通人群的檢測[11]。我們通過長期的臨床觀察發現，口腔舌厚度對疾病的發展具有一定的預測作用，而有關口腔舌厚度與預后的關系鮮見報道。因此我們通過本研究以探討兩者之間的相關性。

腫瘤轉移是1個復雜的過程，有賴于新生血管的生成，不同口腔舌厚度具有增強微血管通透性，為腫瘤的浸潤轉移提供條件，刺激內皮細胞促進腫瘤血管生成。腫瘤細胞中不同VEGF的水平上調，具有促進腫瘤的生長的作用[12-13]。本研究通過分析不同口腔舌厚度在舌鱗狀細胞癌中的表達與VEGF和淋巴結轉移及舌鱗狀細胞癌發生發展及預后的關系，為舌鱗狀細胞癌的抗血管生成治療研究提供理論依據。結果顯示，不同口腔舌厚度測量值與患者的一般資料如年齡、性別、以及腫瘤的特征如大小、發病的部位、侵襲深度，腫瘤的分期及分化程度、是否轉移等并不存在相關性；而淋巴受累方面，淋巴受累組的不同口腔舌厚度測量值明顯上調，不同口腔舌厚度測量值明顯上調與淋巴結受累轉移的風險有關，同時發現不同口腔舌厚度與VEGF差異表達具有相關性，對早期舌鱗狀細胞癌的診斷具有一定的作用。

綜上所述，我們發現口腔舌厚度在舌鱗狀細胞癌具有相關性，與淋巴結轉移有著密切的相關性，提示口腔舌厚度可能與舌鱗狀細胞癌的轉移侵襲等影響預后的因素有關，該VEGF差異性表達推測可能是舌鱗狀細胞癌早期的潛在靶點，但是本研究不足的是病例數還較少，不同口腔舌厚度在舌鱗狀細胞癌中的作用機制和靶基因生物學預測和闡明有待于進一步研究。

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(編輯：吳小紅)

Relationship between Oral Tongue Thickness and Lymph Node Metastasis of Tongue Squamous Cell

ZHANGQixue,XIAOFangzhang,LUXuejiao.OralCavityHospitalAffiliatedtoChinaMedicalUniversity,Shenyang,110000

Objective To study the thickness of the tongue and oral tongue squamous cell carcinoma lymph node metastasis and prognosis.Methods The tongue thickness of 96 patients with squamous cell carcinoma was detected by 3 steps.Results

There was no correlation between the measured values of oral tongue thickness and the age,sex,tumor size,tumor location,depth of invasion,tumor stage and degree of differentiation,whether metastasis or not (P>0.05),and the thickness of oral tongue was significant (P<0.05).There was no significant difference between the measured values and the normal group (P>0.05).The increase of oral tongue thickness was related to lymph node involvement.Conclusion Oral tongue thickness measurement and level tongue squamous cell carcinoma with lymph node metastasis and prognosis of relevant,but need to be further studied.

Squamous cell carcinoma;Prognosis;Different oral tongue thickness;Lymph node metastasis;Correlation

110000 遼寧省沈陽市中國醫科大學附屬口腔醫院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.07.036

R739.86

A

1001-5930(2017)07-1162-03

2016-08-08

2017-04-10)