小鼠脂肪組織石蠟切片制作方法

董學易，孫慧誌，趙秀蘭，趙 楠，劉 芳

小鼠脂肪組織石蠟切片制作方法

董學易1,2，孫慧誌1，趙秀蘭1,2，趙 楠1,2，劉 芳1,2

脂肪組織；石蠟制片；HE染色

常規病理制片將脂肪組織和其他組織同時用手工或者自動脫水機進行脫水、透明、浸蠟、包埋，其它組織制成的蠟塊切片完整，而脂肪組織制成的石蠟切片易空洞或缺損，較難切成完整的切片。優良的脂肪組織切片在病理臨床診斷和科學研究中占有重要地位[1-2]，現階段病理技術人員對脂肪組織切片存在困難[3]。我們在日常工作中對小鼠的脂肪組織進行多次實驗，獲得較為滿意的脂肪組織切片，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 昆明系小鼠正常脂肪組織標本，10%中性福爾馬林、95%乙醇、無水乙醇、二甲苯，均購自天津致遠公司。蘇木精、伊紅染液均購自北京中杉金橋公司。石蠟(熔點60～65 ℃)購自Leica公司。Leica RM2235型輪轉切片機購自德國。

1.2 方法

1.2.1 石蠟包埋脂肪組織 正常昆明系小鼠的脂肪組織標本10塊，大小均為1.5 cm×1 cm×0.2 cm，實驗組和對照組各5塊，10塊脂肪組織均用10%中性福爾馬林固定36 h，對照組采用常規制片程序進行處理，實驗組采用特殊處理制片程序進行處理。具體程序處理時間詳見表1，浸蠟溫度均為61 ℃。

表1 脂肪組織特殊處理與常規處理程序表

1.2.2 切片、染色 實驗組與對照組經兩種不同方法處理后，用Leica RM2235型輪轉切片機進行切片，切片厚4 μm。水浴鍋溫度42 ℃，烤片溫度70 ℃，烤片2 h后行常規HE染色。

2 結果

脂肪組織經特殊程序處理后，肉眼可見脂肪組織的石蠟塊完整，石蠟切片可見完整的脂肪組織(圖1A、B)。鏡下可見脂肪組織的細胞結構清晰透明，核質著色良好，無擠壓和皺縮現象；細胞內的脂滴被溶解成一大空泡，胞核扁圓形，被脂滴推擠到細胞一側，呈橢圓或多角形，有的連同部分胞質呈新月形，有的細胞則聚集呈蜂窩狀(圖1C)。實驗組5例蠟塊中，優質的HE染色切片達100%。

①A①B①C②A②B②C

圖1 A.實驗組脂肪組織的石蠟塊，脂肪組織形態保持完整；B.實驗組水浴鍋中的石蠟切片可見完整的脂肪組織，無皺褶、無缺損；C.實驗組脂肪細胞結構清晰，分界清楚，核質著色良好，細胞核被脂滴擠到一邊，呈蜂窩狀 圖2 A.對照組脂肪組織的石蠟塊，脂肪組織形態保持完整；B.對照組載玻片上的石蠟切片可見明顯的空洞和缺損，脂肪組織不完整；C.對照組脂肪組織結構不完整，有空洞，完整部分的脂肪細胞結構尚清晰，分界清楚

脂肪組織經常規程序處理后，肉眼可見脂肪組織的石蠟塊完整(圖2A)，與實驗組無明顯差異；但石蠟切片不完整，存在許多空洞及破損(圖2B)。鏡下可見脂肪組織形態不完整，僅部分脂肪細胞結構清晰，核質著色良好；可見細胞內的脂滴被溶解成一大空泡(圖2C)。對照組5例蠟塊中，無1例有完整的HE染色切片，結果均不合格。

3 討論

優質的病理切片是保證臨床準確診斷和科學研究的重要基礎。由于脂肪組織特殊的結構，決定其必須延長在乙醇和二甲苯中的脫水、脫脂時間；只有脂肪組織中的水分徹底脫干凈、油脂徹底溶解，才能保證后續的石蠟充分浸入脂肪組織中。在制片過程中需注意以下幾點：(1)保證充分的乙醇和二甲苯脫水、脫脂時間；(2)充足的浸蠟時間，且溫度不宜太高；(3)撈片水浴鍋溫度不宜太高。本方法可以適用于乳腺組織標本、脂肪瘤、皮膚等含脂肪比較高的標本，還可用于肥胖基因相關研究的小鼠標本。

本實驗采用特殊程序處理脂肪組織，該方法簡便實用，無需特殊的儀器與試劑，避免以往復雜的處理過程，如微波熱固定、丙酮脫脂固定等程序[4-6]。本實驗在保證切片質量的同時提高了工作效率，滿足臨床診斷和科學研究的需要，值得在科研和臨床上推廣。

[1] 王志宏，吳智春. 蒼白二陳湯對代謝綜合征模型大鼠脂肪組織NF-κB表達的影響[J]. 山東中醫雜志, 2012,31(8):594-596.

[2] 魏艷華，曾 錚. 脂肪組織常規制片的改進[J]. 臨床與實驗病理學雜志, 2015,31(4):467.

[3] 張 健，王 玨，朱禮國，劉 濤. 處理不良的脂肪組織快速改良方法[J]. 臨床與實驗病理學雜志, 2006,22(4):406.

[4] 章栽良，顧天英，顧元忻. 脂肪組織HE制片的探討[J]. 診斷病理學雜志, 2010,17(6):447.

[5] 高靜娜，王銀萍，鄭 彥. 病理HE制片中易出現問題的解決方略[J]. 吉林醫學, 2011,32(20):4205-4207.

[6] 陳 冬，俞 千，陳靚燁，梁偉瓊. 提高脂肪組織制片質量方法的改進[J]. 解剖學研究, 2016,38(1):78-79.

國家自然科學基金(81572872)

1天津醫科大學病理學教研室，天津 3000702天津醫科大學總醫院病理科，天津 300052

董學易，女，碩士，實驗師。E-mail: dxy7235202@126.com 趙秀蘭，女，主任技師，通訊作者。E-mail: sunbaocun@aliyun.com

時間：2017-5-17 23:54 網絡出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170517.2352.030.html

R 36

B

1001-7399(2017)05-0584-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.05.030

接受日期：2017-02-20