奶牛隱性乳房炎葡萄球菌分離株藥敏試驗

高 翔 ， 崔少凡 ， 楊晨晨 ， 沙金丹 ， 林思彤 ， 趙敬翠 ， 張德顯 ， 劉明春

(1.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院 ， 遼寧沈陽110866 ； 2.遼寧省朝陽市建平縣畜產(chǎn)品安全監(jiān)察所 ， 遼寧朝陽122400)

奶牛隱性乳房炎葡萄球菌分離株藥敏試驗

高 翔1， 崔少凡1， 楊晨晨1， 沙金丹1， 林思彤1， 趙敬翠2， 張德顯1， 劉明春1

(1.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院 ， 遼寧沈陽110866 ； 2.遼寧省朝陽市建平縣畜產(chǎn)品安全監(jiān)察所 ， 遼寧朝陽122400)

為了解遼寧部分地區(qū)奶牛隱性乳房炎葡萄球菌的耐藥性，采用生化鑒定試驗對采集的奶牛隱性乳房炎陽性乳樣進行了葡萄球菌的鑒定，采用肉湯微量稀釋法測定葡萄球菌分離株對22種抗菌藥物的敏感性。結(jié)果顯示，31株奶牛隱性乳房炎葡萄球菌分離株對22種抗菌藥物均產(chǎn)生了不同程度的耐藥性，對氨芐西林、苯唑西林、青霉素、頭孢氨芐、頭孢唑林、林可霉素及磺胺甲噁唑耐藥率為100%，對喹諾酮類藥物敏感。100%葡萄球菌分離株同時耐5類以上(含5類)抗菌藥物，以耐7類抗菌藥物為主，占38.7%，其余依次為5耐、6耐及8耐，比率分別為35.5%、19.4%和6.5%。

葡萄球菌 ； 耐藥性 ； 隱性乳房炎 ； 奶牛

奶牛乳房炎是威脅奶牛養(yǎng)殖業(yè)的棘手問題，根據(jù)臨床表現(xiàn)分為臨床型和隱性型兩種[1]，我國將乳汁中體細胞數(shù)量高于50萬/mL判定為隱性乳房炎[2]。隱性乳房炎具有發(fā)病率高、無明顯臨床癥狀、乳頭及乳汁無明顯的病理變化、病因復(fù)雜、難以診治和防治困難的特點，對奶業(yè)生產(chǎn)的影響大大超過了臨床型的乳房炎。葡萄球菌是引起奶牛隱性乳房炎的主要病原菌[3-5]，有關(guān)奶牛乳房炎葡萄球菌分離株耐藥性的報道越來越多[6-8]，給奶牛乳房炎的防治帶來較大困難，嚴重威脅著人類的健康。本試驗對采自遼寧沈陽、阜新、錦州三市患隱性乳房炎奶牛的乳樣進行葡萄球菌的分離鑒定，并對分離株進行耐藥性測定，分析其耐藥情況，以了解遼寧地區(qū)奶牛隱性乳房炎的耐藥現(xiàn)狀，對該地區(qū)奶牛隱性乳房炎的防治及耐藥性監(jiān)控具有指導(dǎo)意義。

1 材料與方法

1.1 材料 營養(yǎng)肉湯(NB)、MH培養(yǎng)基、高鹽甘露醇培養(yǎng)基，購自北京奧博星生物技術(shù)有限公司；葡萄球菌屬生化鑒定管，購自杭州天和微生物試劑有限公司；藥敏試驗藥物標準品和金黃色葡萄球菌ATCC29213，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2 方法

1.2.1 乳樣采集 牛乳房常規(guī)擠奶消毒，棄前3把奶，取樣，置于滅菌離心管中，標記、封口，于4 ℃保溫箱中保存，盡快送至實驗室。乳樣采集自遼寧沈陽、阜新、錦州三市的規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場臨床表現(xiàn)正常的泌乳期奶牛。

1.2.2 葡萄球菌的分離鑒定 采用體細胞計數(shù)儀按常規(guī)方法測定乳樣中的體細胞數(shù)，根據(jù)SCC結(jié)果，將隱性乳房炎陽性乳樣涂抹于高鹽甘露醇培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)24 h。根據(jù)菌落形態(tài)做初步判斷并將分離的病原菌接種于葡萄球菌屬生化常規(guī)鑒定管中，過夜培養(yǎng)，對照說明書判定細菌類型。

1.2.3 藥敏試驗 采用微量肉湯稀釋法測定22種抗菌藥物對31株葡萄球菌分離株的MIC，以金黃色葡萄球菌ATCC29213作為質(zhì)控菌。測定方法及判斷標準參考2013年美國臨床實驗室標準化研究所的標準[9]。

2 結(jié)果與分析

2.1 遼寧地區(qū)奶牛隱性乳房炎葡萄球菌鑒定結(jié)果 共采集乳樣257份，其中陽性乳樣104份，共鑒定出31株葡萄球菌。

2.2 遼寧地區(qū)奶牛隱性乳房炎葡萄球菌藥敏試驗結(jié)果與分析 22種抗菌藥物對31株奶牛隱性乳房炎葡萄球菌分離株的藥敏試驗結(jié)果見表1。葡萄球菌分離株對氨芐西林、苯唑西林、青霉素、頭孢氨芐、頭孢唑林、林可霉素及磺胺甲噁唑耐藥率為100%，而對喹諾酮類藥物較敏感。葡萄球菌分離株最少耐13種藥物，最多同時耐19種藥物；其中11株菌株對18種抗菌藥物耐藥，占35.5%。耐16～18種抗菌藥物的菌株數(shù)占總菌株數(shù)的80.6%(見圖1)。

2.3 葡萄球菌分離株耐藥譜分析 試驗選取的22種抗菌藥物分屬9類：四環(huán)素類5種，青霉素類4種，喹諾酮類3種，頭孢菌素類3種，酰胺醇類2種，磺胺類2種，氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、林可胺類各1種。試驗結(jié)果表明，同類藥物之間存在不同程度的交叉耐藥現(xiàn)象，因此從每一類藥物中選取1種藥物作為代表來分析多藥耐藥情況。31株葡萄球菌分離株共形成18種耐藥譜(見表2)，耐7類藥物的比率最高，達38.7%；其中以tpclhms耐藥譜菌株數(shù)最高，達19.4%。

表1 22種抗菌藥物對31株奶牛隱性乳房炎葡萄球菌的MIC測定結(jié)果

圖1 葡萄球菌對22種抗菌藥物多重耐藥情況

表2 31株奶牛隱性乳房炎葡萄球菌s對9類抗菌藥物的耐藥譜

p：青霉素類； c：頭孢菌素類； a：氨基糖苷類； m：大環(huán)內(nèi)酯類； t：四環(huán)素類； l：林可胺類； h：酰胺醇類； q：喹諾酮類； s：磺胺類

3 討論

隨著臨床上抗菌藥物頻繁及大規(guī)模使用，導(dǎo)致越來越多的菌株產(chǎn)生耐藥性。有報道顯示，從四川攀西地區(qū)奶牛場分離的葡萄球菌對青霉素、阿莫西林產(chǎn)生了耐藥性[10]，新疆石河子地區(qū)奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌對氟苯尼考高度敏感達100%[11]，而河南某牛場分離的金黃色葡萄球菌對青霉素類藥物耐藥情況嚴重，而對喹諾酮類抗生素較為敏感[12]。本試驗結(jié)果顯示，分離自遼寧部分地區(qū)的奶牛隱性乳房炎葡萄球菌對磺胺類、青霉素類、頭孢菌素類和林可霉素的耐藥情況嚴重，但對氧氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星敏感。由此可見，從不同地區(qū)分離的葡萄球菌對抗菌藥物的耐藥性可能存在相似性，也可能存在差異，這可能與各地區(qū)之間的用藥習(xí)慣及是否合理使用抗菌藥物有關(guān)。根據(jù)本試驗結(jié)果，建議被調(diào)查的牛場選用恩諾沙星等喹諾酮類藥物治療奶牛隱性乳房炎，并做到科學(xué)合理用藥。

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2016-09-27

遼寧省科學(xué)技術(shù)廳農(nóng)村科技特派行動、農(nóng)民技術(shù)員培訓(xùn)項目(2013030055-201)

高翔(1993-)，女，碩士生，主要從事獸醫(yī)藥理與毒理學(xué)研究，E-mail：1437909960@qq.com

劉明春，E-mail：liumingchun@sina.com

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