云南某犬場犬狂犬病滅活疫苗免疫抗體效價評估

杜曉鵬 ， 毛愛國 ， 徐 陶 ， 張 垚 ， 唐樹生

(公安部昆明警犬基地 ， 云南昆明650204)

云南某犬場犬狂犬病滅活疫苗免疫抗體效價評估

杜曉鵬 ， 毛愛國 ， 徐 陶 ， 張 垚 ， 唐樹生

(公安部昆明警犬基地 ， 云南昆明650204)

采用直接免疫熒光病毒中和試驗(FAVN)，對云南某犬場狂犬病滅活疫苗免疫28 d后的犬群隨機抽樣44只(份)，檢測血清中狂犬病病毒抗體效價。結(jié)果顯示，44只受試犬，14只陽性(≥0.50 IU/mL)，陽性率31.82%(14/44)；狂犬病滅活疫苗免疫1次的31只受試犬(幼犬14只、訓(xùn)練犬17只)，3只陽性，陽性率9.68%(3/31)；免疫2次及2次以上的13只受試犬(3只訓(xùn)練犬，10只種犬)，11只陽性，陽性率84.62%(11/13)。調(diào)查顯示，該犬場狂犬病滅活疫苗免疫覆蓋率為100%。筆者建議：在犬12月齡前，應(yīng)進行兩次狂犬病滅活疫苗免疫；在幼犬3月齡后進行第1次免疫，間隔1個月后進行第二次狂犬病滅活疫苗加強免疫，消除狂犬病免疫空擋，以后每年進行1次免疫；對于監(jiān)測過程中，出現(xiàn)血清中和抗體效價低于0.50 IU/mL的犬只，應(yīng)及時加強免疫1次；并加強犬場周圍流浪犬、流浪貓管理。

狂犬病 ； 中和抗體 ； 效價 ； 評估

Corvesponding author:TANG Shu-sheng

狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabiesvirus)感染引起的一種致死性人獸共患病，病死率幾乎高達(dá)100%。目前，對狂犬病尚無有效的治療方法，及時接種疫苗是預(yù)防狂犬病的最有效措施之一。因此，對動物接種有效的狂犬病疫苗是預(yù)防狂犬病最好的辦法。

2016年2月，筆者對云南某犬場的犬群進行狂犬病血清中和抗體效價抽樣檢測，隨機抽樣犬場內(nèi)幼犬、訓(xùn)練犬、種犬共44只(份)，以犬免疫后血清中的狂犬病病毒中和抗體效價≥0.50 IU/mL為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，當(dāng)血清中和抗體效價≥0.50 IU/mL時，犬的抗體可有效保護其免受狂犬病病毒攻擊，當(dāng)?shù)陀?.50 IU/mL 時，犬的抗體不能有效保護其免受狂犬病病毒的攻擊[2]。結(jié)果顯示，44只受試犬，14只陽性(≥0.50 IU/mL)，陽性率31.82%(14/44)；狂犬病疫苗免疫1次的31只受試犬(14只幼犬、17只訓(xùn)練犬)，3只陽性，陽性率9.68%(3/31)；免疫2次及2次以上的13只受試犬(3只訓(xùn)練犬、10只種犬)，11只陽性，陽性率84.62%(11/13)。據(jù)調(diào)查，該犬場幼犬在3月齡后進行第1次狂犬病滅活疫苗免疫，以后每年加強注射1次狂犬病滅活疫苗；種犬及訓(xùn)練犬每年注射狂犬病滅活疫苗1次，其免疫覆蓋率為100%。

1 材料與方法

1.1 受試犬 為該犬場正常飼養(yǎng)、受訓(xùn)的幼犬、訓(xùn)練犬和種犬，身體健康、狂犬病滅活疫苗免疫28 d后的犬。幼犬14只，為3月齡以上犬只，進行過第1次狂犬病滅活疫苗免疫；訓(xùn)練犬20只(份)，為6月齡以上犬只，進行過第1次狂犬病滅活疫苗免疫；種犬10只，為18月齡以上犬只，進行過2次以上狂犬病滅活疫苗免疫。

1.2 檢測試劑 標(biāo)準(zhǔn)血清：購自國際獸醫(yī)局(OIE)狂犬病參考實驗室，由農(nóng)業(yè)部狂犬病及野生動物與人獸共患病診斷實驗室提供。陰性血清：由農(nóng)業(yè)部狂犬病及野生動物與人獸共患病診斷實驗室制備并提供。熒光抗體：由農(nóng)業(yè)部狂犬病及野生動物與人獸共患病診斷實驗室制備并提供。狂犬病病毒CVS-11細(xì)胞毒：由農(nóng)業(yè)部狂犬病及野生動物與人獸共患病診斷實驗室提供。待檢血清：在受試犬前肢頭靜脈采血至少3 mL，靜置2 h，1 500r/min離心30 min，分離血清，冷凍保存或冷鏈運輸至實驗室，備用。出現(xiàn)溶血需重新采取血樣并分離血清。

1.3 方法

1.3.1 樣本處理 待檢血清分別在56 ℃滅活30 min。

1.3.2 檢測 采用“直接免疫熒光病毒中和試驗(FAVN)”對待檢血清中狂犬病病毒抗體效價進行檢測，以100 TCID50的狂犬病病毒完全被血清抑制作為判定標(biāo)準(zhǔn)。

具體方法：按照OIE標(biāo)準(zhǔn)操作方法進行，主要操作步驟包括，首先對標(biāo)準(zhǔn)血清和待檢血清分別按31，32，33，……312進行稀釋；接著在其加入100 TCID50的CVS-11感作1 h后，再加入BHK-21細(xì)胞，培養(yǎng)48 h；最后丙酮固定后，加熒光標(biāo)記抗體染色，熒光顯微鏡下讀取結(jié)果。以100 TCID50CVS-11的復(fù)制完全被抑制(即沒有一個熒光細(xì)胞)作為最終抑制效價判定結(jié)果。根據(jù)Spearman-Karber公式計算血清效價。

2 結(jié)果與分析

以犬免疫后血清狂犬病病毒中和抗體效價≥0.50 IU/mL為陽性標(biāo)準(zhǔn)，達(dá)到或超過0.50 IU/mL即具有效保護水平。結(jié)果顯示，全部44只受試犬，14只陽性，陽性率31.82%(14/44)；狂犬病滅活疫苗免疫1次的31只幼犬、訓(xùn)練犬，3只陽性，陽性率9.68%(3/31)；狂犬病滅活疫苗免疫2次的3只訓(xùn)練犬，陽性率100%(3/3)；狂犬病疫苗免疫2次以上的10只種犬，8只陽性，陽性率80.00%(11/13)。如表1所示。以下所有數(shù)據(jù)分析均通過SPSS 19完成。

表1 血清抗體效價檢測結(jié)果

2.1 犬群總體血清中和抗體效價陽性率 所有受試犬血清中和抗體效價陽性率為31.82%，這些犬具有較高的狂犬病保護性抗體(≥0.50 IU/mL)，可保護其免受狂犬病病毒的感染[4]，而抗體效價低于0.50 IU/mL的犬群則存在一定風(fēng)險。

2.2 不同年齡階段群體血清中和抗體效價陽性率 幼犬、訓(xùn)練犬、種犬血清中和抗體效價結(jié)果見圖1，從圖中看出：幼犬中和抗體效價陽性率為7.14%，免疫1次的訓(xùn)練犬為11.76%，短期內(nèi)2次免疫過的訓(xùn)練犬為100%，種犬為80%；幼犬、訓(xùn)練犬抗體效價平均陽性率低于80%。對4個組別進行卡方檢驗，結(jié)果顯示，組別間存在顯著性差異(P<0.05)。

圖1 不同年齡階段群體總體血清中和抗體效價檢測結(jié)果

2.3 血清中和抗體效價與免疫次數(shù)的關(guān)系 血清抗體效價與免疫次數(shù)的關(guān)系見圖2所示。

圖2 血清抗體效價與免疫次數(shù)的關(guān)系

整理組別數(shù)據(jù)見表2：免疫1次的犬，血清中和抗體效價陽性率為9.68%(3/31)，免疫2次及2次以上的犬，血清抗體效價陽性率為84.62%(11/13)。對兩個組別進行卡方檢驗，結(jié)果顯示，組別間存在顯著性差異(P<0.05)，說明要使犬產(chǎn)生保護性抗體，需進行2次及2次以上狂犬病滅活疫苗免疫。

表2 血清抗體效價與免疫次數(shù)的關(guān)系

2.4 短期內(nèi)二次免疫過的訓(xùn)練犬血清抗體效價情況 第2次狂犬病滅活疫苗免疫28 d后的3只訓(xùn)練犬，血清中和抗體效價陽性率為100%，結(jié)果見表3。

表3 第2次免疫28 d后犬血清抗體效價檢測結(jié)果

2.5 血清中和抗體效價分布范圍 所有受試犬，血清中和抗體效價分布范圍見圖3。其中，最高值10.26出現(xiàn)在加強免疫28 d后的訓(xùn)練犬。

3 討論

3.1 從該犬場免疫程序及免疫記錄分析，犬群狂犬病疫苗免疫覆蓋率達(dá)到100%。根據(jù)國際慣例，犬的狂犬病免疫覆蓋率是影響狂犬病在動物間傳播和動物傳播給人的直接因素，一般情況下，70%以上的犬群實現(xiàn)免疫是全球公認(rèn)的消除狂犬病的有效方法[3-4]。因此，該犬場已形成犬群與犬群外動物之間的有效屏障。

圖3 血清抗體效價分布范圍

3.2 在44只受試犬中，僅14只陽性，陽性率31.82%(14/44)；狂犬病滅活疫苗免疫1次的31只受試犬(幼犬14只，訓(xùn)練犬17只)，3只陽性，陽性率9.68%(3/31)，雖然該犬場狂犬病疫苗免疫覆蓋率達(dá)到100%，但犬群中和抗體效價陽性率低，犬群存在一定風(fēng)險；免疫2次及2次以上的13只受試犬(訓(xùn)練犬3只，種犬10只)，11只陽性，陽性率84.62%(11/13)，犬群中和抗體效價顯著高于狂犬病疫苗免疫1次的犬只，存在顯著性差異(P<0.05)。

3.3 本次檢測結(jié)果與周桂蘭的研究結(jié)果[5]相似：“連續(xù)免疫注射狂犬病滅活疫苗3次以上的犬(免疫間隔1年)，檢測26只，血清抗體效價均在0.50 IU/mL以上，全部陽性，陽性率100%；連續(xù)免疫注射狂犬病滅活疫苗2次的犬(免疫間隔1年)，檢測17只，15頭陽性，陽性率88.24%；免疫注射狂犬病滅活疫苗1次的犬，檢測24只，15只陽性，陽性率62.50%”。本次檢測中，有3只訓(xùn)練犬，第1次檢測全部不合格，隨后用狂犬病滅活疫苗加強免疫1次，28 d后采血檢測，血清抗體效價均大于0.50 IU/mL，其中1只結(jié)果在10.26 IU/mL以上，陽性率100%；該犬場種犬每年加強注射狂犬病滅活疫苗1次，有的犬注射狂犬病疫苗在5次以上，其檢測陽性率達(dá)80.00%(8/10)。因此，為有效控制狂犬病的發(fā)生，對于12月齡以下的犬，應(yīng)進行至少兩次的狂犬病滅活疫苗免疫。對于監(jiān)測過程中，出現(xiàn)血清中和抗體效價低于0.50 IU/mL的犬只，應(yīng)及時加強免疫1次。

3.4 這次檢測結(jié)果，44只受試犬僅14只陽性，陽性率31.82%(14/44)，可能的原因是31只受試犬僅完成1次免疫。據(jù)調(diào)查，該犬場的幼犬在3月齡后進行第1次狂犬病滅活疫苗免疫，6月齡前后投入訓(xùn)練3個月，結(jié)束后訓(xùn)練人員將犬帶回新的單位，新單位每年進行1次狂犬病滅活疫苗免疫，中間有6～12個月的狂犬病免疫空檔。為減少犬只感染狂犬病的風(fēng)險，建議該犬場在幼犬3月齡后注射第1次狂犬病滅活疫苗后，犬離開犬場前加強1次狂犬病滅活疫苗免疫，以后在新的單位每年度進行1次免疫。3月齡時的免疫起到啟動免疫應(yīng)答的作用，加強免疫則刺激犬只獲得保護性免疫力。

3.5 本次檢測中，30只受試犬抗體效價低于0.50 IU/mL，其末次免疫時間與檢測時間間隔1～12個月；其中間隔時間為1個月的11只犬，其抗體效價維持在0.04～0.38 IU/mL之間，其他19只犬，抗體效價也處于較低水平，在0.04～0.38 IU/mL之間。依據(jù)這個結(jié)果，筆者建議該犬場犬只在3月齡后的第一次免疫后，間隔1個月后進行第2次狂犬病滅活疫苗加強免疫。

3.6 在大規(guī)模犬只養(yǎng)殖中，為減少血清中和抗體效價低帶來的感染風(fēng)險，應(yīng)對犬場周圍的流浪犬、流浪貓加強管理，可以采取捕捉后絕育、注射狂犬病滅活疫苗的方式，減少其無序繁殖以及傳播狂犬病的風(fēng)險；如果流浪犬、流浪貓危害嚴(yán)重，應(yīng)與當(dāng)?shù)卣畡游锛部夭块T共同面對解決。

[1] 愈永新.狂犬病和狂犬病疫苗[M].2版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2009:65.

[2] 魏德友，劉軍，朱錫，等. 2007 年北京市豐臺區(qū)犬只狂犬病病毒抗體效價調(diào)查分析[J].中國獸醫(yī)學(xué)報，2008，28(12):1404-1406.

[3] WHO. Expert consultation on rabies (First report) [ J]. Geneva,2004, 13 : 48-58.

[4] Coleman P G , Dye C . Immunization coverag e required to prevent outbreaks of dog rabies[ J]. 1996, 14(3): 185-186.

[5] 周桂蘭.犬免疫注射獸用狂犬病疫苗后血清抗體效價的研究及分析[D].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

Evaluation of the efficacy of immune antibody for inactivated rabies vaccine at a dog farm in Yunnan

DU Xiao-peng , MAO Ai-guo , XU Tao , ZHANG Yao , TANG Shu-sheng

(The ministry of public security police dog base in kunming, Kunming 650204, China)

To monitor the serum antibody titer of rabies in a dog farm in Yunnan using the fluorescent antibody virus neutralization test(FAVN)， 44 dogs were randomly sampled 28 days post immunization with rabies vaccine. The results showed that the there were 14 positive samples (≥0.50 IU/mL) in 44 tested dog positive rate was 31.82% (14/44). Injection of inactivated rabies vaccine for once, there were 3 positive samples and the positive rate was 9.68% (3/31) in 31 tested dogs (14 puppies; 17 trained dogs). When vaccination twice or more than twice, 13 tested dogs (3 trained dogs; 10 breeding dogs) contained 11 positive samples and the positive rate was 84.62% (11/13). This investigation showed that rabies inactivated vaccine immunization coverage was 100% in the dog farm. The authors suggest that dogs should be carried out twice with inactivated rabies vaccine before 12 months of age,once at the age of 3 month and the second time at the age of 4 months. Since then, dogs should be immunized once a year. In the case of the neutralizing antibody titer in serum ,if it is lower than that of the 0.50 IU/mL, the dogs should be vaccinated again timely. Moreover, the stray dogs and cats around the dog farms need to be considered in the control and management program.

Rabies ; neutralizing antibody ; potency ; evaluation

2016-11-02

公安部應(yīng)用創(chuàng)新計劃項目(2011YYCXKMJQ166)

杜曉鵬(1965-)，男，副研究員，本科，從事警犬疾病防治工作，E-mail:dxp_2007@163.com

唐樹生，E-mail:kmjqjd@126.com

S851.3

A

0529-6005(2017)05-0092-03