帕立骨化醇對糖尿病腎病大鼠炎癥狀態(tài)的影響

蘭凱+楊瑩+秦迎霞+武曉慧+張渭民

摘要：目的 探討帕立骨化醇對糖尿病腎病（DN）大鼠炎癥狀態(tài)的影響。方法 采用鏈尿佐菌素（STZ）腹腔注射的方法構(gòu)建DN大鼠動物模型，將造模成功的大鼠隨機分為帕立骨化醇組（P組）、DN組（D組），并設(shè)置健康對照組（N組）。P組大鼠每周灌胃帕立骨化醇3次，每次劑量0.4 μg/kg，給藥12 w后檢測各組血超敏C反應(yīng)蛋白（hc-CRP）、白細胞介素6（IL-6）、24 h尿蛋白定量及一般生化指標。結(jié)果 與N組相比，D組和P組hc-CRP、IL-6、24 h尿蛋白定量明顯升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；P組顯著低于D組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 炎癥反應(yīng)在糖尿病腎病病情發(fā)生發(fā)展中起了重要作用，帕立骨化醇可以改善糖尿病腎病大鼠炎癥狀態(tài)。

關(guān)鍵詞：糖尿病腎病；微炎癥；帕立骨化醇

Effect of Parylene Alcohol on Inflammatory State of Diabetic Nephropathy Rats

LAN Kai，YANG Ying，QIN Ying-xia，WU Xiao-hui，ZHANG Wei-min

（School of Clinical Medicine，Xi'an Medical College，Xi'an 710021，Shaanxi，China）

Abstract：Objective To investigate the paricalcitol on diabetic nephropathy（DN）rats inflammation.Methods Using streptozotocin（STZ）intraperitoneal injection method to construct DN rat animal model，the successful model of the rats were randomly divided into paricalcitol group（P group），DN group （D group），and healthy control group（group N）.P group rats were gavaged weekly paricalcitol 3 times at a dose of 0.4μg/kg，12 w after drug serum hypersensitive C reactive protein（hc-CRP），interleukin 6（IL-6），24 h urinary protein and the general biochemical indicators.Results Compared with N group，D group and P group hc-CRP，IL-6，24h urinary protein increased significantly，the differences were statistically significant（P<0.05）；P group was significantly lower than that of D group，the differences were statistically significant（P<0.05）.Conclusion Inflammation plays an important role in the development of diabetic nephropathy patients，can improve the inflammation of paricalcitol in diabetic nephropathy rats.

Key words：Diabetic nephropathy；Inflammation；Paricalcitol

糖尿病腎病是糖尿病引起的危害性最大的一種并發(fā)癥，是糖尿病患者主要死亡原因之一，因此早期干預(yù)非常重要。炎癥反應(yīng)是糖尿病腎病持續(xù)進展的重要因素，抑制炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生已成為目前治療糖尿病腎病重要途徑之一。近年來有研究發(fā)現(xiàn)活性維生素D類似物帕立骨化醇具有減少糖尿病腎病大鼠尿蛋白及腎臟保護作用[1]，但具體作用機制尚不清楚，可能與抑制微炎癥狀態(tài)有關(guān)，目前這方面的研究較少。本研究擬通過帕立骨化醇對糖尿病腎病大鼠hc-CRP、IL-6、24 h尿蛋白的影響，探討其對糖尿病腎病微炎癥狀態(tài)的影響。

1材料與方法

1.1動物模型的建立與分組 清潔級封閉群雄性SD大鼠30只，體質(zhì)量（210±20）g。20只大鼠造模，10只為健康對照組（N組）。大鼠造模后禁食10 h，單次無菌腹腔注射65 mg/kg鏈脲菌素（購于美國Sigma公司）。72 h后取尾靜脈血測空腹血糖（FBG），F(xiàn)BG≥16.65 mmol/L確定為糖尿病大鼠，3 w后24 h尿蛋白量≥30 mg確認糖尿病腎病大鼠模型制備成功；健康對照組注射等量的檸檬酸緩沖液。造模成功的糖尿病腎病大鼠隨機分成：帕立骨化醇治療組（P組，10只），將帕立骨化醇溶于丙二醇中，以0.4 μg/kg的劑量3次/w灌胃；糖尿病腎病組（D組，10只）。D組與N組給予等量丙二醇灌胃，連續(xù)12w。12 w后收集24 h尿，心臟取血4～5 ml。

1.2一般指標檢測 24 h尿蛋白定量、空腹血糖（FBG）、血肌酐（Scr）、血鈣、血磷和甲狀旁腺激素（PTH）。

1.3hc-CRP、IL-6測定 hc-CRP采用全自動生化分析儀測定，血清IL-6采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 計量資料數(shù)據(jù)用（x±s）表示。多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用LSD-t檢驗。采用SPSS17.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析。

2結(jié)果

2.1治療12 w后各組大鼠指標變化： P、D組24 h尿蛋白量、空腹血糖、肌酐和PTH均高于N組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）；P組24 h尿蛋白量、肌酐顯著低于D組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）；P組血鈣、血磷與N組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

2.2治療12 w后各組大鼠血hc-CRP、IL-6指標變化：P組和D組hc-CRP、IL-6水平高于N組（均P<0.05）；P組hc-CRP、IL-6水平低于D組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05），見表2。

3討論

糖尿病腎病是糖尿病患者臨床最為常見的慢性微血管并發(fā)癥之一，嚴重影響糖尿病患者預(yù)后。隨著糖尿病發(fā)病率不斷提高，該病呈現(xiàn)逐年上升趨勢，但其確切的發(fā)病機制尚不明確。研究發(fā)現(xiàn)，氧化和抗氧化系統(tǒng)的失衡使患者體內(nèi)炎癥因子合成增多，可引起腎小球濾過屏障的損傷，導(dǎo)致蛋白尿的發(fā)生，而微量蛋白尿是糖尿病腎病的早期標志[2]。炎癥介質(zhì)和氧化應(yīng)激等因素在糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展中起了重要作用，糖尿病腎病患者hc-CRP、IL-6較正常人群明顯升高，目前臨床沒有有效的干預(yù)手段。

目前研究發(fā)現(xiàn)帕立骨化醇作為一種維生素D類似物，可通過細胞內(nèi)特異的維生素D受體（vitamin D receptor，VDR）介導(dǎo)發(fā)揮其生物活性，不僅具有調(diào)節(jié)鈣磷代謝的生物學(xué)作用，還可通過抑制RAS系統(tǒng)、炎癥因子分泌、細胞外基質(zhì)沉積、系膜細胞增殖等途徑改善糖尿病腎病病理生理過程，具有獨立于鈣磷代謝以外的腎臟保護作用[3-4]。研究表明帕立骨化醇可以使糖尿病腎病大鼠腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化及小管間質(zhì)改變減輕，同時伴有腎保護作用，并且未發(fā)生高鈣血癥等問題[5-6]。帕立骨化醇可以通過抑制腎素合成基因表達的環(huán)腺苷酸信號通路，阻斷部分環(huán)腺苷酸與環(huán)腺苷酸反應(yīng)原件結(jié)合區(qū)對腎素基因啟動子的活化，可以抑制腎素基因轉(zhuǎn)錄啟動，從而減少腎素的合成[7-8]。目前大量研究集中在帕立骨化醇對糖尿病腎病大鼠腎素抑制及腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化等機制上，對糖尿病腎病炎癥介質(zhì)的影響相關(guān)研究較少。

Hc-CRP是一種非特異的炎癥標志物，近年來的研究揭示了hc-CRP直接參與了炎癥反應(yīng)，并且是心腎血管疾病最強有力的預(yù)示因子與危險因子。IL-6可由多種細胞合成，包括活化的T細胞和B細胞、單核巨核細胞、內(nèi)皮細胞、上皮細胞以及成纖維細胞等[9-10]。其可以刺激肝細胞合成急性期蛋白，參與炎癥反應(yīng)[11]。研究發(fā)現(xiàn)，在糖尿病患者的胰島細胞中，一些細胞因子如IL-6、IFN-γ、TNF-α通過誘導(dǎo)刺激COX-2表達，使PGE2合成增加，造成胰島β細胞功能障礙和退化[12-14]。本研究發(fā)現(xiàn)在帕立骨化醇治療12 w后糖尿病腎病大鼠血hc-CRP、IL-6指標較未治療組明顯下降，帕立骨化醇可能具有抑制炎癥反應(yīng)的作用，其作用途徑有待于經(jīng)一步研究。

糖尿病腎病大鼠存在微炎癥反應(yīng)，是糖尿病慢性并發(fā)癥重要誘因之一，可直接導(dǎo)致腎功能減退。炎癥反應(yīng)在糖尿病腎病病情發(fā)生發(fā)展中起了重要作用，通過本研究發(fā)現(xiàn)帕立骨化醇可以改善糖尿病腎病大鼠微炎癥狀態(tài)，給糖尿病腎病的治療提供了新思路。

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