雞新城疫滅活疫苗乳化工藝優化

劉欣愿++王強++楊祥波

摘要：目的：探索出應用國產礦物油佐劑配制雞新城疫疫苗的最優方案。方法：將新城疫病毒與國產的礦物油佐劑配制雞新城疫疫苗，通過調節乳化因素（水相和油相的比例、乳化劑攪拌轉數、乳化時間）進行單因素試驗制備疫苗，并確定最佳乳化條件，從而制備出穩定性更高的油乳劑滅活疫苗。結果：雞新城疫油乳劑滅活疫苗穩定性，受乳化制備中乳化時間、攪拌轉數、水相和油相比例的影響。結論：試驗結果表明，最佳的乳化時間是45分鐘，最佳的攪拌轉數是6000轉/分，最佳油相和水相比例為7∶3。

關鍵詞：雞新城疫；疫苗；乳化因素；穩定性

基金項目：大學生科技創新科研項目，吉農院合字[2016]第053號

中圖分類號： S852.5 文獻標識碼： A DOI編號： 10.14025/j.cnki.jlny.2017.11.020

我國于1935年發現雞新城疫，目前在全國范圍內仍普遍存在，并且是我國養雞業危害最大、經濟損失最嚴重的禽病之一。該病是由新城疫病毒引起的一種主要侵害雞的急性高度接觸傳染性疾病。雞新城疫疫苗現今應用廣泛的是油乳劑滅活疫苗。而佐劑是一種非特異性免疫增強劑，可增強機體的免疫應答能力或改變免疫應答的類型。為提高疫苗免疫效果，增強動物機體對疾病的抵抗能力，選擇合適的佐劑尤為重要，通過對生物制品企業的調研了解到，目前一些生物制品企業大部分選擇進口疫苗，雖然免疫效果相對與國產佐劑疫苗要好，但成本相對較高，影響企業產品在市場上的競爭力。

雞新城疫疫苗的研究主要集中在不同類型的佐劑疫苗和不同廠家的佐劑疫苗對雞新城疫疫苗抗體水平的影響，而對國產礦物油佐劑乳化條件優化方面的文章近幾年未見報道。結合實際生產中成本問題和實驗室的條件，本研究將新城疫病毒與國產的礦物油佐劑配制雞新城疫疫苗，并通過調節乳化因素（水相和油相的比例、乳化劑攪拌轉數、乳化時間）進行單因素試驗，通過理化相關試驗確定最佳乳化條件，從而制備出穩定性更高的油乳劑滅活疫苗，從而為生物制品企業提供成本相對較低、免疫效果好、副反應小的油佐劑乳化方案。

1材料與方法

1.1 材料與設備

1.1.1主要材料國產礦物油佐劑司本 80（法國梅里亞公司）、 吐溫 80（法國梅里亞公司）、注射用水（南京梅里亞公司）含有病毒的雞胚尿囊液（已滅活）、硫柳汞。

1.1.2生產設備 TDL-5離心機、高速勻漿機、普通冰箱、恒溫箱、高壓蒸汽滅菌鍋。

1.2方法

1.2.1油相的配制

將國產礦物油佐劑加入乳化劑司本80中，體積比為94∶6，加入硫柳汞，在116℃、40分鐘條件下高壓蒸汽滅菌，制備出油相。

1.2.2水相的配制 將含有病毒的雞胚尿囊液（已滅活）加入乳化劑吐溫80中，體積比為94∶6，加入硫柳汞，在116℃、40分鐘條件下高壓蒸汽滅菌，制備出水相。

1.2.3國產礦物油佐劑乳化時間條件優化

將水相加入油相，油水比例為7∶3；乳化50分鐘（勻漿機轉速6000轉/分鐘，乳化溫度25℃以下）；分別在40分鐘、45分鐘、50分鐘進行取樣并標注（40分鐘樣品為A01，45分鐘樣品為A02，50分鐘樣品為A03）；乳化后靜置；取樣對樣品進行相關穩定性檢驗和理化檢驗。

1.2.4國產礦物油佐劑油水相比例條件優化

分別按油相：水相比例為3∶2，7∶3，2∶1，將油相和水相混合，并分別標記為A04，A05，A06；乳化45分鐘（勻漿機轉速6000轉/分鐘，乳化溫度25℃以下）；乳化后取樣，對樣品進行相關穩定性檢驗和理化檢驗。

1.2.5國產礦物油佐劑攪拌轉數條件優化

將水相加入油相，油水比例為7∶3；將勻漿機轉數分別設置為5000轉/分鐘，6000轉/分鐘，7000轉/分鐘進行乳化，并分別標記A07，A08，A09；乳化45分鐘（乳化溫度25℃以下）；乳化后取樣，對樣品進行相關穩定性檢驗和理化檢驗。

1.2.6穩定性檢驗

將上述A01，A02，A03，A04，A05，A06，A07，A08，A09每組樣品分別抽取一瓶，用破壞方法（離心15分鐘，3000轉/分鐘或400轉/分鐘）來檢驗疫苗穩定性。將每組樣品放入37℃恒溫箱內，每日觀察，持續21天，記錄結果。判定標準：疫苗經離心或高溫放置后，若在容器底部出現水滴或分層，則表明疫苗破乳，判定疫苗不穩定。

2 結果與討論

從表1和表2看出，在乳化時間、油水相比例、乳化劑攪拌轉速中，A02、A05和A09分別為最佳條件，從觀察日開始到觀察結束，一直沒有破乳且沒有分層。而在其他條件下疫苗均出現了破乳的現象。

3 結論

最佳的乳化時間，不但可保證產品質量，也能提高生產效率，降低能源消耗。乳化時間過短則無法乳化完全，時間過長則會破壞已經形態完好的油包水顆粒。研究結果顯示，最接乳化時間為45分鐘。

乳化過程中的攪拌速度也會影響乳劑的性質。乳化速度太小無法形成穩定的油包水顆粒，速度太大則會破壞抗原的免疫原性，影響乳劑質量，并且攪袢速率過高容易導致破乳，影響其穩定性。研究結果顯示，乳化速度為6000轉/分鐘時乳化效果最好。

油水相比例對疫苗的黏度有較大影響，隨著油相比例不斷增加，水相比例減少，油乳劑疫苗的黏度會越來越小。因此，合適的油水比例才能保證生產出最佳黏度的油乳劑疫苗，產出高質量的油乳劑滅活疫苗。研究結果顯示，最佳的油水相比例為7∶3。

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作者簡介：劉欣愿，在讀本科生，研究方向：生物技術。

通訊作者：楊祥波，碩士，講師，研究方向：生物技術在植物中的應用。