精子DNA碎片率與體外受精實(shí)驗(yàn)室結(jié)局的關(guān)系

【摘要】 目的 探討精子DNA碎片率與體外受精（IVF）實(shí)驗(yàn)室結(jié)局的關(guān)系。方法 對(duì)IVF治療的男性患者開(kāi)展常規(guī)精液檢查、精子DNA碎片率檢查以及精子核蛋白不成熟度檢查。分析精子DNA碎片率與IVF優(yōu)胚率的關(guān)系。結(jié)果 精子DNA碎片率與男性年齡呈正相關(guān)（r=0.184， P=0.019<0.05）， 與前向運(yùn)動(dòng)精子百分率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.219， P=0.008<0.05）， 與優(yōu)胚率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.220， P=0.008<0.05）， 與精子濃度、正常精子百分率、IVF受精率無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。精子核蛋白不成熟度與精子濃度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.327， P=0.001<0.05）， 與正常精子百分率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.226， P=0.008<0.05）， 與男性年齡、前向運(yùn)動(dòng)精子百分率、優(yōu)胚率、IVF受精率無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。結(jié)論 開(kāi)展精子DNA碎片率檢測(cè)， 可對(duì)IVF優(yōu)胚率起到一定的預(yù)測(cè)作用。

【關(guān)鍵詞】 體外受精；精子DNA碎片率；優(yōu)胚率

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.12.040

精子DNA碎片率可對(duì)機(jī)體遺傳物質(zhì)DNA所受的損傷進(jìn)行有效反映， 對(duì)精子DNA碎片率開(kāi)展檢測(cè)， 可對(duì)精子的功能狀況進(jìn)行有效預(yù)測(cè)[1-5]。本次研究就通過(guò)對(duì)開(kāi)展IVF治療的男性患者開(kāi)展常規(guī)精液檢查、精子DNA碎片率檢查以及精子核蛋白不成熟度檢查， 探討精子DNA碎片率與體外受精實(shí)驗(yàn)室結(jié)局的關(guān)系。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2016年1～3月本院收治的患有不育癥， 開(kāi)展體外受精-胚胎移植（IVF-ET）治療的患者， 共112對(duì)。男112例， 年齡23～41歲， 平均年齡（31.5±5.1）歲；女112例， 年齡20～40歲， 平均年齡（29.6±3.8）歲。對(duì)少弱精子癥較為嚴(yán)重的患者， 或獲卵數(shù)<5個(gè)進(jìn)行排除。

1. 2 研究方法 首先對(duì)男性患者的精液進(jìn)行采集以及處理。按照WHO實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)上的相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行操作。采集精液前禁欲2～7 d， 采集方法為手淫法， 采集后置于恒溫板， 溫度控制37℃， 于1 h內(nèi)開(kāi)展檢測(cè)。采用計(jì)算機(jī)對(duì)精子濃度， 以及前向運(yùn)動(dòng)百分率進(jìn)行分析， 采用Diff-Quik然后對(duì)精子的形態(tài)學(xué)開(kāi)展分析。采用染色質(zhì)擴(kuò)散法對(duì)精子DNA碎片開(kāi)展檢測(cè)， 于預(yù)制載玻片上涂抹含精瓊脂糖精液， 通過(guò)變性、去核蛋白、脫水、染色后， 借助顯微鏡對(duì)精子進(jìn)行觀(guān)察。如精子存在大、中暈環(huán)， 則為正常精子， 其余為碎片異常精子。以碎片精子數(shù)與計(jì)數(shù)總數(shù)（500個(gè)）之比為精子DNA碎片率[6]。精子核蛋白不成熟度采用苯胺藍(lán)染色法進(jìn)行檢測(cè)， 檢測(cè)試劑購(gòu)自山東德惠生物技術(shù)有限責(zé)任公司， 檢測(cè)方法參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。按照常規(guī)方法， 為患者開(kāi)展降調(diào)節(jié)， 同時(shí)開(kāi)展促排卵， 于卵口取IVF常規(guī)法授精， 授精完成16～18 h， 對(duì)受精情況進(jìn)行觀(guān)察。第3天對(duì)胚胎發(fā)育情況進(jìn)行觀(guān)察。如胚胎的評(píng)分為6Ⅰ、6Ⅱ、7Ⅰ、7Ⅱ、8Ⅰ、8Ⅱ， 則為優(yōu)質(zhì)胚胎。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析， 雙測(cè)檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 影響精子DNA碎片率的相關(guān)因素 精子DNA碎片率與男性年齡呈正相關(guān)（r=0.184， P=0.019<0.05）， 與前向運(yùn)動(dòng)精子百分率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.219， P=0.008<0.05）， 與優(yōu)胚率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.220， P=0.008<0.05）， 與精子濃度、正常精子百分率、IVF受精率無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。見(jiàn)表1。

2. 2 影響精子核蛋白不成熟度的相關(guān)因素 精子核蛋白不成熟度與精子濃度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.327， P=0.001<0.05）， 與正常精子百分率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.226， P=0.008<0.05）， 與男性年齡、前向運(yùn)動(dòng)精子百分率、優(yōu)胚率、IVF受精率無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

目前臨床上對(duì)精子DNA損傷的檢測(cè)手段主要包括兩種， 一種是直接法， 另一種是間接法。直接法是通過(guò)將探針直接結(jié)合入精子DNA發(fā)生損傷的部位， 對(duì)DNA的斷裂進(jìn)行直接檢測(cè)[7]。間接法是通過(guò)對(duì)碎片化DNA易于變性的特點(diǎn)進(jìn)行利用， 對(duì)碎片化DNA的變性易感性進(jìn)行檢測(cè)[8]。精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析（SCSA）法的檢測(cè)基礎(chǔ)為流式細(xì)胞技術(shù)， 可測(cè)定樣本量大， 測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定性強(qiáng)， 更為可靠。但該檢測(cè)方法成本高， 花費(fèi)昂貴， 普及度不高。因此本次研究采用的是精子染色質(zhì)擴(kuò)散試驗(yàn)（SCD）法， 該方法檢測(cè)結(jié)果同SCSA相關(guān)性良好， 且花費(fèi)低， 耗時(shí)短[9-11]。

本次研究結(jié)果顯示， 精子DNA碎片率與男性年齡呈正相關(guān)（r=0.184， P=0.019<0.05）， 與前向運(yùn)動(dòng)精子百分率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.219， P=0.008<0.05）， 與優(yōu)胚率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.220， P=0.008<0.05）， 與精子濃度、正常精子百分率、IVF受精率無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。與相關(guān)的研究結(jié)果相符[2]。有學(xué)者通過(guò)設(shè)置生育對(duì)照組， 并未發(fā)現(xiàn)精子DNA碎片率與年齡呈相關(guān)性， 提示年齡對(duì)于精子DNA碎片率所起的并非主要作用[3]。同時(shí)本次研究結(jié)果顯示， 精子核蛋白不成熟度與精子濃度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.327， P=0.001<0.05）， 與正常精子百分率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.226， P=0.008<0.05）， 與男性年齡、前向運(yùn)動(dòng)精子百分率、優(yōu)胚率、IVF受精率無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。和前人的研究結(jié)果相符[12-14]。

綜上所述， 開(kāi)展精子DNA碎片率檢測(cè)， 可對(duì)IVF優(yōu)胚率起到一定的預(yù)測(cè)作用。

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[收稿日期：2017-02-09]