高效分子排阻法對幾種頭孢類抗生素聚合物的研究探討

馬曉彬 許立君

（新疆昌吉州食品藥品檢驗所，新疆 昌吉 831100）

高效分子排阻法對幾種頭孢類抗生素聚合物的研究探討

馬曉彬 許立君

（新疆昌吉州食品藥品檢驗所，新疆 昌吉 831100）

頭孢類抗生素包括頭孢曲松鈉、頭孢呋辛鈉、頭孢唑啉鈉、頭孢噻肟鈉和氨曲南等，是目前臨床上常用的抗感染藥物。減少抗生素過敏反應的重要方法之一是控制聚合物的含量。本文根據《中國藥典》2010版二部所規定的Sophdax G-10凝膠色譜法，對注射用頭孢曲松鈉、注射用頭孢唑林鈉、注射用頭孢噻肟鈉、注射用頭孢呋辛鈉存放于不同溫度條件下，對所產生聚合物的含量的影響進行了研究。

抗生素；頭孢聚合物；凝膠色譜法；溫度

β-內酰胺類抗生素包括青霉素類、頭孢類和非典型的β-內酰胺類。頭孢類包括頭孢呋辛鈉、頭孢噻肟鈉、頭孢曲松鈉、頭孢唑啉鈉和氨曲南等，是目前臨床上常用的抗感染藥物。然而它們的過敏問題長期以來引起了人們的密切關注，研究證明，β-內酰胺類導致的速發型過敏反應不一定是由藥物本身所引起的，而和其中的高分子雜質有關[1]，因此控制聚合物的含量是減少此類抗生素過敏反應的重要方法之一。《中國藥典》2010版對22個品種43個制劑標準進行了控制[2]，本文按《中國藥典》2010版二部所規定的Sophdax G-10凝膠色譜法[3]，對注射用頭孢呋辛鈉、注射用頭孢噻肟鈉、注射用頭孢曲松鈉、注射用頭孢唑林鈉、存放于不同溫度條件下，對所產生聚合物的含量的影響進行了研究，并就結果進行探討。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：島津LC-20AT高效液相色譜儀；METTLER AE240電子天平；WE202電熱恒溫干燥箱

1.2 試藥：藍色葡聚糖2000（Sigma-Aldrich公司）；磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉（均為分析純）；頭孢呋辛對照品（來源：中國藥品生物制品檢定院，批號：130493-200704，純度：91.6%），頭孢噻肟對照品（來源：中國藥品生物制品檢定院，批號：130483-200904，純度：90.6%），頭孢曲松對照品（來源：中國藥品生物制品檢定院，批號：130480-200302，純度：84.1%），頭孢唑林對照品（來源：中國藥品生物制品檢定院，批號：0421-9603，純度：99.3%）；注射用頭孢呋辛鈉（某藥廠，批號：SH4121011，規格：0.75g），注射用頭孢噻肟鈉（某藥廠，批號：00330353，規格：1.0 g），注射用頭孢曲松鈉（某藥廠，批號：01720501，規格：2.0 g），注射用頭孢唑林鈉（某藥廠，批號：B130830110，規格：0.5 g），注射用氨曲南（某藥廠，批號：130319，規格：0.5 g）；試驗用水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件。色譜柱：PX-G10葡聚糖凝膠色譜柱（天津譜祥科技有限公司，柱長0.4 m，內徑14 mm，40～120 μm）；流動相：1、0.1 mol/L的磷酸鹽緩沖液（pH 7.0）[0.1mol/L磷酸氫二鈉溶液-0.1 mol/L磷酸二氫鈉溶液（61∶39）]，2、0.025 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH 7.0）[0.025 mol/L磷酸氫二鈉溶液-0.025 mol/L磷酸二氫鈉溶液（61∶39）]；進樣量為100 μL；檢測波長：254 nm；流速：1.5 mL/min。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的配制：①精密稱取頭孢呋辛對照品適量，加水溶解并定量稀釋制成1 mL中約含40 μg的溶液。②精密稱取頭孢噻肟對照品適量，加水溶解并定量稀釋制成1 mL中約含100 μg的溶液。③精密稱取頭孢曲松對照品適量，加水溶解并定量稀釋制成1 mL中約含0.1 mg的溶液。④精密稱取頭孢唑林對照品適量，加水溶解并定量稀釋制成1 mL中約含10 μg的溶液。

2.2.2 系統適用性溶液的配制：取注射用頭孢呋辛鈉、注射用頭孢噻肟鈉、注射用頭孢曲松鈉、注射用頭孢唑林鈉0.2 g，至10 mL容量瓶中，分別《中國藥典》2010版二部中[3]規定濃度的藍色葡聚糖2000溶液溶解稀釋至刻度，搖勻。

2.2.3 供試品溶液的制備：①樣品處理：取樣品（注射用頭孢呋辛鈉、注射用頭孢噻肟鈉、注射用頭孢曲松鈉、注射用頭孢唑林鈉）分別置室溫下（22 ℃）放置7 d；置干燥箱中于37 ℃放置7 d；置干燥箱中于80 ℃放置24 h；取出，放冷至室溫（注：注射用頭孢呋辛鈉為過期不合格樣品）。②取經處理的樣品（注射用頭孢呋辛鈉、注射用頭孢噻肟鈉、注射用頭孢曲松鈉、注射用頭孢唑林鈉）各0.2 g，精密稱定，分別置10 mL量瓶中，加水溶解稀釋至刻度，搖勻。③取未經處理的樣品（注射用頭孢呋辛鈉、注射用頭孢噻肟鈉、注射用頭孢曲松鈉、注射用頭孢唑林鈉）各0.2 g，精密稱定，分別置10 mL量瓶中，加水溶解稀釋至刻度，搖勻（注：注射用頭孢呋辛鈉為過期不合格樣品）。

2.2.4 測定法：按《中國藥典》2010版二部中[3]注射用頭孢呋辛鈉、注射用頭孢噻肟鈉、注射用頭孢曲松鈉、注射用頭孢唑林鈉聚合物項下的測定方法分別用兩種濃度的流動相測定。

2.3 系統適用性試驗：①各樣品中的理論塔板數和拖尾因子均符合規定；②藍色葡聚糖2000峰的保留時間在兩種流動相系統中的比值均符合規定；③在相應色譜系統中對照品溶液中主峰與供試品溶液中的聚合物與藍色葡聚糖2000峰保留時間的比值均符合規定；④取對照溶液連續進樣5次，其峰面積的RSD均符合規定；⑤高聚體的峰高與單體與高聚體之間的谷高比值：a.以pH 7.0的0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液為流動相時，4種樣品（注射用頭孢呋辛鈉、注射用頭孢噻肟鈉、注射用頭孢曲松鈉、注射用頭孢唑林鈉）均能很好的分離；b.pH 7.0的0.025 mol/L磷酸鹽緩沖液為流動相時，除注射用頭孢曲松鈉外，其他3種樣品（注射用頭孢呋辛鈉、注射用頭孢噻肟鈉、注射用頭孢唑林鈉）均能很好的分離（藥典規定流動相濃度：注射用頭孢呋辛鈉0.025 mol/L、注射用頭孢噻肟鈉0.1 mol/L、注射用頭孢曲松鈉0.1 mol/L、注射用頭孢唑林鈉0.1 mol/L）。見圖1。

圖1

2.4 樣品測定，見表1。

3 討 論

3.1 通過以上試驗證明，pH 7.0的0.025 mol/L磷酸鹽緩沖液作為流動相時，注射用頭孢唑林鈉、注射用頭孢噻肟鈉均能很好的分離。考慮到緩沖鹽對色譜柱有一定的影響，應選用較低濃度的緩沖鹽作為流動相，據此可對《中國藥典》2010版二部中注射用頭孢唑林鈉、注射用頭孢噻肟鈉聚合物測定方法中所選用的流動相（原標準均以0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液作為流動相）進行優化，改用0.025 mol/L磷酸鹽緩沖液作流動相。

3.2 通過以上試驗證明，固體狀態下注射用頭孢曲松鈉、注射用頭孢唑林鈉、注射用頭孢噻肟鈉、注射用頭孢呋辛鈉隨著處理溫度的升高，聚合物含量有不同程度的升高，但均未超出標準規定。而固體狀態下頭孢菌素類聚合速度與含水量和貯存溫度有關，低水分樣本，即使在較高溫度下貯存，高分子雜質增加的速度也不快[4]。因此新疆氣候比較干燥（室內濕度相對較小），對該品種的聚合物的產生影響不大。

3.2 通過此次試驗樣品在固體狀態下，經加熱處理，聚合物含量仍然在限度范圍之內，由此可見溫度對以上頭孢類聚合物的影響不大，那么如果有效的控制頭孢類藥品的水分，即可降低聚合物的產生。藥典標準中對頭孢聚合物檢查限度，沒有明確的臨床數據支持，該限度是否合理，有待于大家共同探討。

[1] 金少鴻,胡昌勤.β-內酰胺類抗生素過敏反應的研究進展[J].中國新藥雜質,1994,4(3):38.

[2] 侯玉榮,袁濯佐.β-內酰胺類抗生素中高分子雜質的研究和檢測方法進展[J].藥學與臨床研究,2012,20(3):240.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典二部[S].2010年版.北京:中國醫藥科技出版社2010:181.

[4] 胡昌勤,孫學蘭.固體狀態下頭孢菌素聚合反應的探討[J].中國抗生素雜質,1991,16(2):106.

表1 樣品測定表

R917；R978.1+1

B

1671-8194（2017）12-0049-02