草蓯蓉的質量標準研究

樊紅軍 王 輝* 谷 杰 張 航 楊樹東

（長春市食品藥品檢驗中心，吉林 長春 130012）

草蓯蓉的質量標準研究

樊紅軍 王 輝* 谷 杰 張 航 楊樹東

（長春市食品藥品檢驗中心，吉林 長春 130012）

目的建立草蓯蓉的質量標準。方法用薄層色譜（TLC）法鑒別草蓯蓉藥材；以高效液相色譜（HPLC）法測定藥材中齊墩果酸的含量。結果通過TLC，能有效的進行區別，易于識別。齊墩果酸進樣量在0.1～2.5 μg 范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系（r＝1.000）；平均回收率為99.0%，RSD＝1.8%（n＝6）。結論所建標準可有效控制草蓯蓉的質量。

草蓯蓉；齊墩果酸；薄層色譜法；高效液相色譜法

草蓯蓉為列當科草蓯蓉屬多年生草蓯蓉的干燥全草[1]，寄生于樺木科赤楊屬Alnus植物的根上草本植物。 長白山地區的“地道藥材”和民間藥材，東北三寶之一。別名東北不老草，為國家二級保護植物[2]。近年在草蓯蓉中發現含有多糖、草蓯蓉苷、草蓯蓉環烯醚萜苷等化學成分。具有補腎壯陽、腰膝冷痛、腎虛陽萎、滋陰補陽、膀胱炎和潤腸通便等[3]。現代藥理學研究證明在提高人體免疫、抗腫瘤[4-5]、抗炎、保護肝臟[6-10]等方面有療效。目前未對其質量標準進行收載，本文通過TLC及高效液相色譜法，對草蓯蓉及其相似品鎖陽、肉蓯蓉進行同步考察，建立草蓯蓉的質量標準，對其質量控制有重要意義。

1 儀器、試藥及對照藥材

1.1 儀器：LC-1100 HPLC高效液相色譜儀；D101-1A干燥箱；GR-202電子分析天平；色譜柱Dima C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；硅膠GF254（生產廠家：青島海洋化工廠，規格200×200 mm批號：20140108 ）。

1.2 試藥：甲苯 （天津市北聯精細化學品開發有限公司，批號20151120，分析純）；乙酸乙酯（生產廠家：北京化工廠，批號：20160107，分析純）；醋酸（生產廠家：天津市北聯精細化學品開發有限公司，批號20130520，分析純）；甲醇（生產廠家：北京化工廠，批號：20150514，分析純）；乙腈（生產廠家Bioreacs，LOT：908765，CAS：75-05-8，色譜醇）；磷酸（生產廠家北京化工廠，批號：20140625，分析純）；水（超純水）。

1.3 對照品：肉蓯蓉（提供：中國食品藥品檢定研究院，批號：121101-200402）；鎖陽（提供：中國食品藥品檢定研究院，批號：121393-200401）；齊墩果酸（提供：中國藥品生物制品檢定所 批號：110705-200306，純度為94.9%）。

2 樣品的來源

采集和購買，共收集10批樣品，經吉林農業大學韓梅教授鑒定，具體來源見表1。

3 草蓯蓉的TLC鑒別

取樣品粉末1 g，加入甲醇100 mL，超聲提取1 h，過濾，濾液濃縮至約2 mL，作為供試品溶液。另取草蓯蓉自采7號樣品、肉蓯蓉、鎖陽各1 g作為對照藥材，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2015年版通則0502）試驗，吸取供試品溶液5～10 μL、對照藥材溶液各5 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。此方法能區別草蓯蓉及其類似品鎖陽肉蓯蓉[11]的鑒別。同時10樣品薄層色譜圖一致，10批樣品紫外檢視后，噴以10%硫酸乙醇試液，加熱至斑點顯色清晰，薄層色譜圖一致。薄層色譜圖見圖1。結果此方法能作為草蓯蓉薄層鑒別方法。

表1 10份樣品來源

圖1 TLC色譜圖[A紫外光燈（254 nm）（1為草蓯蓉樣品；2為肉蓯蓉；3為鎖陽）；B紫外光燈（254 nm）。（1～10為1-10號樣品點樣10 μL；11為1號樣點樣5 μL；12為1號樣點樣10 μL；13～15為1號樣的3次重復）；C 10%硫酸乙醇試液日光（1～10為1～10號樣品點樣10 μL；11為1號樣點樣5μL；12為1號樣點樣10 μL；13～15為1號樣的3次重復）]

表2 樣品回收率

4 含量測定

4.1 標準品溶液的制備：精密稱取齊墩果酸對照品適量，置100 mL量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。（每1 mL中含齊墩果酸0.0996 mg）。

4.2 供試品溶液的制備：取本品粉末（過二號篩）約0.5 g，精密稱定，加入甲醇100 mL，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）1 h，冷卻至室溫，搖勻，濾過，用甲醇洗滌提取器，每次20 mL，分3次洗滌，濾過，合并濾液，蒸干，殘渣用甲醇溶解后，轉移至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

4.3 色譜條件。色譜柱：Dima C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.5% 磷酸溶液（85∶15）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：210 nm；柱溫：室溫 ℃；進樣量：10 μL。理論板數按齊墩果酸峰計算應不低于3000。色譜圖見圖2。

圖2 高效液相色譜圖（A.溶劑空白；B.齊墩果酸標準品；C.草蓯蓉藥材）

4.4 線性關系考察：分別精密吸取1.0 μL、5.0 μL、10 μL、15 μL、25 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標，進樣量（μg）為橫坐標，測得回歸方程為Y=426.33X+28.531，相關系數r=1.000（n=6）。結果表明，齊墩果酸進樣量在0.1～2. μg，具有良好的線性關系。

4.5 精密度試驗：精密吸取同一標準品溶液，注入液相色譜儀，連續測定6次，RSD為0.1%，實驗結果表明儀器精密度良好。

4.6 最低檢測限測定：按信噪比等于3（S/N=3），作為最低檢測限，測得該方法中齊墩果酸的檢測限為12.5 ng/mL。

4.7 重復性試驗：取同一批號的樣品，精密稱定6份，分別依法提取制成供試液。按正文方法測定其含量。RSD為2.2%，重復性試驗結果表明，本法重復性良好。

4.8 穩定性考察：精密吸取供試品溶液10 μL，每隔2 h進樣測定一次，共測定24 h，計算含量，RSD為0.2%，穩定性試驗結果，供試品溶液在24 h內基本穩定。

4.9 加樣回收率試驗：稱取已知含量0.14 mg/g）的樣品6份，每份約0.5 g，分別精密加入對照品貯備液（約0.1 mg/mL）3.0 mL按正文方法制備及測定，計算加樣回收率，測得6次平均回收率為99.0%，RSD為1.8%，試驗結果表明：供試品回收率較高，RSD在規定范圍內，結果見表2。

4.10 樣品含量測定：按照上述色譜條件及方法，測定10個不同產地草蓯蓉藥材的含量，產地見表1，結果見表3。

表3 樣品含量測定結果

5 討 論

在TLC鑒別項下的供試品展開條件試驗中，筆者曾分別用甲醇∶醋酸∶水（2∶1∶7）和甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸（20∶4∶0.5）展開劑分別在硅膠G板和硅膠GF254板展開，結果發現甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸（20∶4∶0.5）分離點多，分離效果好。硅膠G板展開發現，草蓯蓉與偽品鑒別不明顯，而在硅膠GF254展開能有效鑒別草蓯蓉及其相似品鑒別明顯，同時斑點穩定，不同產地斑點一致，可作為草蓯蓉薄層色譜質量控制方法，同時能有效區別真偽。

在HPLC含量測定項下筆者曾考察不同提取溶劑甲醇、60%乙醇和80%乙醇，不同提取方法回流和超聲，通過實驗結果選著上述提取方法。考察不同流動相分別為甲醇-0.5% 磷酸溶液（90∶10）、甲醇-0.5% 磷酸溶液（80∶20）、甲醇-水（85∶15）和乙腈-0.5% 磷酸溶液（85∶15），發現乙腈-0.5% 磷酸溶液（85∶15）沒有干擾，分離效果好。可作為草蓯蓉質量標準含量控制方法。草蓯蓉不良反應小[12]，同時為鹿鞭回春膠囊的原藥材，通過對質量標準研究發現草蓯蓉同鎖陽及肉蓯蓉的成分有差別，能夠真偽鑒別。草蓯蓉有不可替代的功效。

[1] 楚玉南,戴續紅,吳華新.草蓯蓉生物學特性初探[J].中國林副特產, 2009(3):104.

[2] 陳慶紅,張睿,馮秀春,等.長白山區草蓯蓉研究現狀與病危機制[J].現代農業科技,2015(14):80-81.

[3] 冉先德.中華藥海[M].哈爾濱:哈爾濱出版,1995:1281.

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[5] 沈明花,尹宗柱.草蓯蓉提取物對二乙基亞硝胺誘發的肝臟癌前病變大鼠抗氧化活力的影響[J].中國中藥雜志,1999,24(12):746-749.

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Study on Quality Standard of Bosehniakia rossica

FAN Hong-jun, WANG Hui, GU Jie, ZHANG hang, YANG Shu-dong
(Changchun Institute for Food and Drug Control, Changchun,130012, China)

ObjectiveTo establish the quality standard of Bosehniakia rossica.MethodsIt was identified by TLC, at the same time the content of oleanolic acid in Bosehniakia rossica was determined by HPLC.ResultsThe TLC spots of syringin and echinocystic acid were clear and easy to identify. The linear range of ginsenoside in Bosehniakia rossica were 0.1-2.5 μg(r=1.000)with an average recovery of 99.0%(RSD=1.8%, n=6).ConclusionEstablished quality standard can be used for the quality control of Bosehniakia rossica.

Bosehniakia rossica.; Oleanolic acid; TLC; HPLC

R282.710.3

B

1671-8194（2017）12-0004-02

吉林省中藥材地方標準[吉食藥監科[2015]304號]

*通訊作者:E-mail: wanghui20141111@163.com