SIRT6蛋白在非浸潤性膀胱癌中的表達及意義

陳黨生,屈 沖,王九妹

(1.松原市公安消防支隊 衛生隊，吉林 松原138000;2.吉林大學中日聯誼醫院;3.牡丹江醫學院紅旗醫院)

*通訊作者

SIRT6蛋白在非浸潤性膀胱癌中的表達及意義

陳黨生1,屈 沖2,王九妹3*

(1.松原市公安消防支隊 衛生隊，吉林 松原138000;2.吉林大學中日聯誼醫院;3.牡丹江醫學院紅旗醫院)

世界范圍內，膀胱癌的發病率及死亡率均居較高地位，每年大約有13000人因此死亡[1]。在我國，膀胱癌的發生率居泌尿生殖系統惡性腫瘤的第一位，并呈逐年上升趨勢[2]。且有較高的復發率及死亡率[3]。因此探索膀胱癌的有效預后性指標對降低其死亡率有重要意義。SIRT6是在哺乳動物體內發現的酵母沉默信息調節蛋白2(Sir2)同系物,具有乙酰化酶活性和ADP-核酸轉移酶活性，參與腫瘤生長調控、基因損害修復、穩態的維持和有氧酵解，在部分腫瘤發生、發展的抑制方面有重要作用，且可增強部分抗腫瘤藥物的腫瘤抑制作用[4-6]，研究表明：敲除鼠SIRT6后,體內增加了腫瘤的數量,大小,和侵襲性[4]。直腸癌患者中SIRT6表達水平降低。SIRT6異常表達與肝癌和胰腺癌，乳腺癌發病也有關系[7，8]。然而，SIRT6蛋白在膀胱癌發生、發展及治療中的作用尚不明確。本研究的目的是探討SIRT6表達是否可作為膀胱癌患者的預后指標，為膀胱癌患者的靶向治療提供理論依據和實驗基礎。

1 資料與方法

1.1 研究對象

1995年1月-2015年8月期間在牡丹江腫瘤醫院治療的311例僅接受尿道切除術和表阿霉素治療的非浸潤性膀胱癌患者。收集其相關臨床及病理資料，并于術后第一年的3、6、9、12月及以后的每6個月隨訪一次，用膀胱鏡檢記錄他們首次復發及死亡時間。此次研究經醫院倫理委員會批準并與病人簽署了知情同意書。

1.2 方法

SIRT6免疫組織化學染色按照試劑盒說明進行操作。由兩位對病理分級和臨床分期不知情的病理科醫生，在光鏡下對染色進行評估，大部分病例評估結果一致，對有差異的部分也達成了共識。根據陽性細胞數目及染色強度判斷結果。按染色強度分為三組:0(無染色)、1(弱)、2(中度)、3(強)；按陽性細胞百分比分為四組：0(無陽性細胞)、1(<10%)，2(10-50%)，3(51-80%)，和4(>80%)。每張玻片按染色強度分與陽性細胞百分比分乘積作為免疫反應評分:最大可能12,l-5判斷為是陰性，而6-12判斷為陽性。

1.3 統計分析

無病生存期(DFS)定義為從隨訪開始至膀胱癌復發或由于疾病進展導致患者死于膀胱癌的時間。疾病特異性生存率(DSS)被定義為從確定診斷到死于膀胱癌的時間。對腫瘤患者定期隨訪，根據病人最后一次隨訪結果評估病人的復發和死亡情況。采用Pearsonχ2檢驗分析SIRT6表達組與分變量之間關聯,采用Log-rank檢驗和Cox比例風險回歸進行無復發生存率分析。Kaplan-Meier進行生存曲線估計；所有的統計檢驗均為雙側，統計數據采用GraphPad Prism 5.0軟件進行,以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 膀胱癌患者SIRT6的免疫組織學特征

離散性核染色觀察到SIRT6廣泛的表達在樣本的細胞核和細胞質中。在正常的膀胱組織的細胞中，觀察到SIRT6的增強染色(圖1A)。膀胱癌組織區域中SIRT6表現出顯著的降低染色或未染色(圖1B)。進一步研究顯示，同膀胱癌組織相比，SIRT6在正常膀胱組織中表達顯著增強(圖1C)。同時發現不同癌癥等級(1D)和階段(1E)SIRT6的表達存在顯著的差異性。

2.2 膀胱癌臨床病理特征及SIRT6表達情況

311例非浸潤性膀胱癌組織中SIRT6陰性表達率為63%,陽性率為37%；比較發現SIRT6的表達與腫瘤的病理分級、臨床分期、大小、單多發呈明顯的正相關，見表1。

2.3 SIRT6蛋白表達與膀胱癌患者預后間的關系

311例病例數據進行Kaplan-Meier生存分析顯示SIRT6陽性的腫瘤患者較陰性者有更好的DFS和DSS(10年無病生存率：73%比57%，P=0.013；10年疾病特異性生存率：92% vs 82%，P=0.031，見圖2A和2B。對患者進行病理分級和臨床分期發現，SIRT6表達陽性比陰性者DFS和DSS明顯提高(圖2C和2D)。這些數據表明SIRT6表達水平是判斷膀胱癌預后的獨立指標。利用多因素分析評價SIRT6和其他臨床病理狀態與膀胱癌預后的關系。結果顯示，這311例患者的病理分級，臨床分期，單多發都不是影響預后的因素。而SIRT6表達是影響預后的因素(DFS：HR=0.875；95% CI，0.799-0.959；P=0.004；DSS：HR=0.765；95% CI，0.643-0.910；P=0.002)。

圖1 A：正常的膀胱組織細胞，SIRT6染色增強。B：膀胱癌組織細胞SIRT6表達情況。C：膀胱癌組織與正常膀胱組織中SIRT6表達情況比較。D：不同癌癥病理分級SIRT6表達情況；E：不同臨床分期SIRT6的表達情況。

表1 淺表性膀胱癌臨床病理特征及SIRT6表達情況(n=311)

3 討論

SIRT6有脫乙酰蛋白酶活性,作為腫瘤抑制因子在腫瘤生成過程發揮重要作用[9]。已有研究表明,SIRT6主要位于細胞核[9,10];然而,在研究中,我們發現SIRT6在膀胱癌和癌旁正常組織的細胞核和細胞質中均有表達,且在膀胱癌組織內的表達水平較正常癌旁組織有下調。提示：SIRT6在腫瘤組織與癌旁正常組織中呈現異質性表達。同時我們還發現：SIRT6表達與膀胱癌臨床分期和病理分級呈正相關。隨腫瘤類型的不同、腫瘤發生發展的不同階段,SIRT6的表達也相差甚遠,SIRT6發揮的作用也不相同。引起這種差異的原因還有待于進一步研究。

此外，我們還發現SIRT6高表達者膀胱癌復發風險和病死率降低,而且在Ta,G1,2期和T1,G3期腫瘤患者中SIRT6高表達者較陰性表達者DFS和DSS均顯著提高。因此，我們推測SIRT6在膀胱癌患者預后中起著重要作用，并可作為判斷膀胱癌患者預后的標記物。最近研究表明，SIRT6能夠誘導大量的癌細胞凋亡不會對正常細胞造成威脅，可通過誘導DNA損傷修復增強表阿霉素的抗腫瘤作用[11]。且目前表阿霉素仍是膀胱癌患者聯合手術治療的一線化療藥物，因此：SIRT6的研究為膀胱癌患者的個體化治療提供了一定的理論依據。然此觀點尚需進一步的研究與證實。

圖2A和2B Kaplan-Meier生存分析311例患者中SIRT6陽性組與陰性組間DFS和DSS的差異；圖2C和2D：311例患者的不同病理分級和臨床分期，SIRT6陽性組與陰性組間DFS和DSS的差異

本研究表明：SIRT6在正常膀胱組織中表達明顯高于膀胱癌組織，且與腫瘤的病理分級、臨床分期、大小、單多發呈明顯的正相關；生存分析：SIRT6表達陽性組比陰性組有更長的術后DFS和DSS,提示：SIRT6蛋白可作為膀胱癌預后評估的有效評價指標。對膀胱癌的診斷和靶向治療有一定的科學意義。

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1007-4287(2017)05-0859-03

王九妹(1986-)，住院醫師，碩士學位，研究方向：免疫性皮膚病與性病，腫瘤分子生物學。

2016-08-17)