海南豇豆多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素殘留及其膳食風(fēng)險評估

陽辛鳳　李萍萍　劉春華　樂淵

摘要：[目的]探明海南產(chǎn)區(qū)豇豆中多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素的殘留水平及膳食暴露風(fēng)險情況，為豇豆風(fēng)險監(jiān)管提供科學(xué)依據(jù)。[方法]應(yīng)用超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法對采白海南省的295份豇豆樣品中多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素殘留進行檢測，通過風(fēng)險商（HT）對3種農(nóng)藥殘留膳食風(fēng)險進行評估。[結(jié)果]295份豇豆樣品中有242份（82.0%）樣品農(nóng)藥殘留為陽性，多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素在樣品中的檢出率分別為45.8%、64.4%和28.8%，殘留值范圍分別為0.016-3.049、0.015-1.710和0.011-0.312mg/kg。通過食用豇豆攝入多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素殘留的最高H1分別為0.200、0.262和0.718。[結(jié)論]海南產(chǎn)區(qū)豇豆中多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素的膳食暴露風(fēng)險在可接受水平，不會給公眾健康帶來危害。

關(guān)鍵詞：豇豆；農(nóng)藥殘留；風(fēng)險評估；海南

中圖分類號：S481.8 文獻標(biāo)志碼：A 文章編號：2095-1191（2017）11-2010-06

0引言

[研究意義]豇豆（Vigna unguiculata L. Walp）口感清脆，營養(yǎng)價值高，是我國居民餐桌上的家常菜。海南省氣候溫暖，全年均適宜豇豆種植及收獲。豇豆是海南大宗瓜菜之一，也是冬季重要的反季節(jié)瓜菜，是當(dāng)?shù)剞r(nóng)民重要的收人來源。豇豆生產(chǎn)過程中極易受病蟲危害（Ekesi et a1.，2012；Akoto et a1.，2013），因豇豆是花果同期作物，菜農(nóng)常在豇豆收獲期施用農(nóng)藥以控制花期病蟲害，豇豆農(nóng)藥安全間隔期難以保證，農(nóng)藥殘留隱患嚴(yán)重。因此，對豇豆農(nóng)藥殘留進行膳食風(fēng)險評估，對保障消費者膳食安全及促進海南豇豆產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展均具有重要意義。[前人研究進展]目前，對豇豆中農(nóng)藥殘留及其膳食暴露評估研究尚不多，已有的研究表明，有機磷類、有機氯類、菊酯類和氨基甲酸酯類等是豇豆農(nóng)藥殘留監(jiān)測的熱點，檢出和超限量值的農(nóng)藥既有合法農(nóng)藥，也有超范圍使用農(nóng)藥和禁用農(nóng)藥（Mawussi et a1.，2009；Sonchieu et a1.，2010；金旭忠等，2012；Akotoet a1.，2013；段云等，2014）。多哥南部地區(qū)豇豆中檢出了超限量值的狄氏劑、異狄氏劑、環(huán)氧七氯和硫丹殘留（Mawussi et a1.，2009）。Sonchieu等（2010）對喀麥隆國內(nèi)豇豆中有機氯、有機磷、菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留進行檢測，檢出了高濃度的禁用農(nóng)藥林丹（0.24+0.51 mg/kg）。浙江杭州市市供豇豆中農(nóng)藥殘留超標(biāo)主要是氨基甲酸酯類農(nóng)藥，其中以克百威最嚴(yán)重，同時發(fā)現(xiàn)克百威、氧化樂果和水胺硫磷等禁用農(nóng)藥濫用現(xiàn)象嚴(yán)重（金旭忠等，20 12）。Akoto等（2013）報道加納的豇豆樣品中β-六六六、β-硫丹、P，P-DDE和P，P-DDD殘留超過限量值，而七氯和p，p-DDD殘留的估計平均攝入量（Estimated averagedailv intake，EADI）超過了日允許攝入量（Acceptabledailv intake，ADI），具有較高的慢性毒性安全風(fēng)險。海南豇豆有機磷、菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留普遍，30.52%的豇豆中含有機磷農(nóng)藥殘留，其中1.74%的豇豆有農(nóng)藥多殘留現(xiàn)象，部分樣品的氧化樂果、毒死蜱、水胺硫磷、三唑磷、克百威、甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氯氰菊酯和聯(lián)苯菊酯殘留值超過最大殘留限量值；膳食風(fēng)險評估表明食用海南豇豆而攝入有機磷等農(nóng)藥的風(fēng)險商均小于1，各類人群可能存在的健康風(fēng)險均在可接受范圍內(nèi)（段云等，2014；Duanet a1.，2016）。加納、尼日利亞、多哥等國家的豇豆樣品中毒死蜱、樂果和二嗪農(nóng)超過限量值，但膳食暴露評估結(jié)果表明其健康風(fēng)險在可接受水平（Donker eta1.，2015）。由于各個國家和地區(qū)在豇豆栽培生產(chǎn)過程中農(nóng)藥投入和管理方式不同，故豇豆殘留的農(nóng)藥種類和殘留值等差異明顯。目前對豇豆中農(nóng)藥殘留進行膳食風(fēng)險評估所覆蓋的農(nóng)藥還很少，大多數(shù)農(nóng)藥包括豇豆生產(chǎn)中常用的農(nóng)藥均未進行評估，風(fēng)險隱患大，不能滿足風(fēng)險管理的需求。[本研究切入點]多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素均為廣譜性農(nóng)藥，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用。雖然我國尚未對多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素在豇豆上使用進行登記，GB 2763-2016也僅規(guī)定了阿維菌素在豇豆中最大殘留限量值（MRL）為0.05mg/kg，但根據(jù)全國農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測結(jié)果，多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素在豇豆中殘留頻次高，有些樣品殘留水平超過了MRL，安全隱患問題較大。目前尚無針對豇豆中多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素殘留進行膳食風(fēng)險評估的文獻報道，消費者食用豇豆后多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素的生物膳食暴露量尚不明確。[擬解決的關(guān)鍵問題]應(yīng)用超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法對采自海南省的295份豇豆樣品中多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素殘留進行檢測，通過風(fēng)險商（Hazard index，HI）對3種常用農(nóng)藥殘留膳食風(fēng)險進行評估，以掌握海南產(chǎn)區(qū)豇豆中多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素的殘留水平，進而評估及掌握其膳食風(fēng)險水平，明確消費者食用豇豆而攝入多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素的潛在健康風(fēng)險，為海南產(chǎn)區(qū)豇豆質(zhì)量安全風(fēng)險管理提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗材料

Waters Quattro Premier XE超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國Waters公司），其中Waters AcquityUPLC液相色譜儀配有四元梯度泵和自動進樣器。ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（50.0mm×2.1mm；1.7μm（美國Waters公司），柱前端配備ACQUITYUPLCBEHC18預(yù)柱（5.0mm×2.1mm；1.7μm）（美國Waters公司）。標(biāo)準(zhǔn)溶液啶蟲脒和阿維菌素（1000μg/mL，以乙腈為溶劑，單標(biāo)）、多菌靈（500μg/mL，以乙醇為溶劑）購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心（天津）；液相色譜（HPLC）級乙腈、甲醇和二氯甲烷購自美國Fisher Scientific公司；醋酸銨和氯化鈉均為國產(chǎn)分析純，購自國藥集團化學(xué)試劑北京有限公司；超純水（18.2 MfLcm）以美國Millipore公司Milli-Q*超純水系統(tǒng)制備獲得；0.22μm PTFE有機相針式微孔濾膜和氨基固相萃取（SPE）小柱（500 mg，6mL）購自安譜實驗科技（上海）股份有限公司。

將標(biāo)準(zhǔn)溶液以乙腈為溶劑進行逐級稀釋，得到10μg/mL的多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，再進一步以甲醇/水（60/40，v/v）進行稀釋配制得到系列濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，系列濃度的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作液以不含目標(biāo)農(nóng)藥的空白樣品進行前處理得到的基質(zhì)溶液作為溶劑配制。

1.2樣品采集與制備

295份豇豆樣品采白海南省豇豆種植基地、批發(fā)市場、超市和農(nóng)貿(mào)市場，獲得樣品后立即于0-4℃存放直至抵達實驗室進行制樣。在實驗室，將豇豆切成小段放入勻漿機中勻漿，將勻漿轉(zhuǎn)入樣品瓶中于-20℃貯藏。

樣品的提取和純化按照《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定（NY/T 761-2008）》（中華人民共和國農(nóng)業(yè)部，

1.3超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析

采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對目標(biāo)農(nóng)藥進行定性和定量分析，液相色譜參數(shù)和質(zhì)譜參數(shù)參照文獻報道（Yang et a1.，2016）進行設(shè)置。目標(biāo)農(nóng)藥母離子和子離子見表1。采用MassLynx 4.1進行數(shù)據(jù)采集與分析，以保留時間定性，建立基質(zhì)匹配校正標(biāo)準(zhǔn)曲線，外標(biāo)法定量。

1.4準(zhǔn)確度與精密度

對豇豆樣品進行加標(biāo)，分別在0.01、0.05和0.50mg/kg 3個水平進行添加回收試驗，每個添加水平重復(fù)5次，計算平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.5膳食暴露評估

基于豇豆樣品農(nóng)藥殘留檢測結(jié)果進行膳食風(fēng)險評估，其中未檢出樣品其殘留值以定量限（LOQ）的1/2計。

運用Excel 2007的Percentile統(tǒng)計功能，計算不同百分位點的農(nóng)藥殘留值；采用以下公式計算膳食暴露量和膳食風(fēng)險（Blasco et a1.，2006）：

EDI（mg/kg·d）=F×C/K （1）

HI=EDI/ADI （2）

公式（1）中，EDI（Estimated daily intake）為農(nóng)藥的估計日攝入量；c為樣品農(nóng)藥殘留平均值（mg/kg）；F為每人每日平均蔬菜攝入量，對于成年人，F(xiàn)為0.2762kg/d（金水高，2008）；K為成人平均體重（60 kg）。

公式（2）中，HI用于表示農(nóng)藥對人體的長期健康風(fēng)險，HI的計算依據(jù)是FAO/WHO食品標(biāo)準(zhǔn)；ADI（Acceptable daily intake）為日允許攝入量（mg/kg·d），農(nóng)藥的ADI引用自《食品中農(nóng)藥最大殘留限量（GB 2763-2016）》（中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會等，2016）。當(dāng)HI≥1.000時，提示對消費者健康有不可接受的風(fēng)險，當(dāng)HI<1.000時，提示風(fēng)險可接受。

2結(jié)果與分析

2.1方法驗證結(jié)果

以系列濃度的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液上機測定，以濃度對峰面積作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到校正曲線，并根據(jù)信噪比S/N=3和S/N=10確定各農(nóng)藥的檢出限（LOD）和LOQ。結(jié)果表明，校正曲線線性關(guān)系滿意，相關(guān)系數(shù)為0.9971-0.9999，多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素的LOD均為0.003mg/kg，LOQ均為0.01mg/kg。空白豇豆中添加不同濃度的多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素（0.01、0.05和0.50mg/kg），檢測其回收率范圍為85.5%-107.3%，RSD為0.9%-9.2%，精確度和靈敏度均符合檢測要求。即該方法適用于豇豆樣品中多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素的檢測。

通過加標(biāo)回收對分析方法進行監(jiān)控和質(zhì)量控制，結(jié)果表明，各批次的加標(biāo)樣品中3種目標(biāo)農(nóng)藥的回收率為71.8%～118.2%，表明檢測結(jié)果準(zhǔn)確可信。

2.2豇豆樣品農(nóng)藥殘留分析結(jié)果

295份豇豆樣品農(nóng)藥殘留檢測結(jié)果（表2）顯示，多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素殘留平均值分別為0.153、0.206和0.016mg/kg，殘留值范圍分別為0.016-3.049、0.015-1.710和0.011-0.312mg/kg。殘留值最高的是多菌靈（3.049mg/kg），是歐盟規(guī)定的多菌靈在豇豆中MRL（0.20mg/kg）的15倍；阿維菌素殘留最大值為0.312mg/kg，是歐盟規(guī)定的阿維菌素在豇豆中MRL（0.01mg/kg）的31倍。

295份豇豆樣品中有242份檢測結(jié)果呈陽性，即每份陽性樣品中至少含有一種農(nóng)藥且其殘留值高于LOQ。3種目標(biāo)農(nóng)藥在豇豆樣品中檢出殘留頻次分別為多菌靈135（45.8%）、啶蟲脒190（64.4%）和阿維菌素85（28.8%），以啶蟲脒的檢出頻次最高。3種目標(biāo)農(nóng)藥較高的檢出頻次表明其在豇豆實際生產(chǎn)中經(jīng)常被使用。將3種目標(biāo)農(nóng)藥殘留值與相應(yīng)的MRL進行比較，比較時優(yōu)先參照國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)，對于國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)中尚未規(guī)定MRL的則參照歐盟標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)GB 2763-2016，28份（9.49%）豇豆樣品的阿維菌素殘留值超過了MRL，由于GB 2763-2016尚未制定豇豆中多菌靈和啶蟲脒的MRL，因此缺乏依據(jù)對豇豆樣品中多菌靈和啶蟲脒殘留值超限量情況進行評價。根據(jù)歐盟標(biāo)準(zhǔn)，共174份（59.0%）豇豆樣品殘留水平高于MRL，其中多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素殘留高于MRL的樣品數(shù)量及頻次分別為64（21.7%）、124（42.0%）和85（28.8%），其中啶蟲脒超MRL頻次最高。

豇豆樣品農(nóng)藥多殘留檢測結(jié)果見圖1。豇豆樣品農(nóng)藥多殘留較普遍，共131份（44.4%）豇豆樣品檢測出農(nóng)藥多殘留，包括94份（31.9%）樣品檢出2種農(nóng)藥殘留和37份（12.5%）樣品檢出3種農(nóng)藥殘留，表明豇豆在生產(chǎn)過程中使用了不同類型的農(nóng)藥以控制不同病蟲害。

2.3豇豆農(nóng)藥殘留膳食暴露評估結(jié)果

基于295份豇豆樣品中3種目標(biāo)農(nóng)藥殘留的膳食暴露評估結(jié)果見表3。當(dāng)目標(biāo)農(nóng)藥殘留值為平均值時，3種農(nóng)藥的HI總和（0.079）遠(yuǎn)小于1.000，提示不具有健康風(fēng)險。在目標(biāo)農(nóng)藥殘留值范圍內(nèi)，多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素的HI范圍分別為0.001～0.200、0.002～0.262和0.025～0.718，均小于1.000，提示單一農(nóng)藥殘留時均不具有健康風(fēng)險；但3種農(nóng)藥的HI總和范圍為0.028～1.180，其中當(dāng)3種農(nóng)藥同時以最高值殘留于樣品中時HT達1.180，提示具有健康風(fēng)險。為此利用Excel 2007的Percentile函數(shù)計算出不同百分位點時相應(yīng)的農(nóng)藥殘留值，進一步對99.5和99.9百分位點時對應(yīng)的農(nóng)藥殘留值進行膳食暴露評估。當(dāng)目標(biāo)農(nóng)藥殘留值為99.5百分位點時，無論是單殘留還是多殘留，農(nóng)藥HI總和均小于1.000，提示不具有健康風(fēng)險；當(dāng)目標(biāo)農(nóng)藥殘留值為99.9百分位點時，單殘留時均不具有健康風(fēng)險，但多殘留時3種農(nóng)藥HI總和（1.083）大于1.000，提示具有不可接受的風(fēng)險。在對295份豇豆樣品的檢測中未發(fā)現(xiàn)同一份樣品中3種目標(biāo)農(nóng)藥殘留值均高于99.9位點，因此，實際樣品的風(fēng)險在可接受范圍。

由表3可知，3種目標(biāo)農(nóng)藥中，無論是按殘留平均值計算還是按99.5位點和99.9位點計算，對HL總和貢獻最大的關(guān)鍵性農(nóng)藥均為阿維菌素，其次是啶蟲脒和多菌靈。如在最高殘留值時，阿維菌素、啶蟲脒和多菌靈的估計膳食暴露量分別是ADI的71.8%、26.2%和20.0%，因此，在豇豆生產(chǎn)中合理使用阿維菌素，從而減少豇豆中阿維菌素殘留是降低膳食暴露量最有效的方法。

3討論

本研究結(jié)果顯示，豇豆樣品農(nóng)藥多殘留較普遍。鑒于我國尚未對多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素在豇豆上進行登記，因此，豇豆樣品中多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素殘留陽性表明在豇豆生產(chǎn)環(huán)節(jié)存在農(nóng)藥超登記范圍使用問題。我國目前豇豆上登記使用的農(nóng)藥僅順式氯氰菊酯、乙基多殺菌素、溴氰蟲酰胺、代森錳鋅等幾種殺蟲劑和殺菌劑，可選擇使用的農(nóng)藥品種少，防治效果不夠理想，農(nóng)民在豇豆生產(chǎn)中常選擇多菌靈等易于獲得、價廉、防治效果好的農(nóng)藥。為此，管理部門應(yīng)加強農(nóng)藥使用的監(jiān)管和宣傳，提高農(nóng)民規(guī)范用藥意識，保證海南豇豆產(chǎn)業(yè)有序發(fā)展；其次，建議加強豇豆農(nóng)藥登記和MRL的制定工作，使農(nóng)民有合法的農(nóng)藥使用。

盡管近年來豇豆中較普遍存在多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素殘留，并有超標(biāo)情況出現(xiàn)，但風(fēng)險評估結(jié)果顯示，評估人群的多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素殘留膳食暴露帶來的風(fēng)險仍在控制范圍內(nèi)，只有在長期食用的豇豆中多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素殘留超過99.9百分位點值時才可能產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險。雖然豇豆中多菌靈和啶蟲脒的殘留平均值和最大殘留值均高于阿維菌素，但由于受ADI值影響，多菌靈和啶蟲脒的膳食暴露風(fēng)險卻低于阿維菌素，相對來看，多菌靈的膳食暴露風(fēng)險最低，即使長期食用多菌靈殘留量為最高值的豇豆，其膳食暴露風(fēng)險仍可接受。

豇豆是海南人民喜好的食物來源，3種目標(biāo)農(nóng)藥中阿維菌素是豇豆農(nóng)殘膳食暴露的主要來源，在評估人群中其貢獻率最高，達71.8%。建議在對豇豆中3種目標(biāo)農(nóng)藥進行監(jiān)管的基礎(chǔ)上，重點控制阿維菌素的殘留，以有效降低豇豆中3種目標(biāo)農(nóng)藥殘留帶來的潛在膳食暴露風(fēng)險。

對農(nóng)藥殘留的膳食風(fēng)險評估常存在一些不確定因素（Liu et a1.，2013），本研究也同樣存在一些不確定因素，主要有：（1）在進行3種目標(biāo)農(nóng)藥殘留膳食暴露評估時僅以蔬菜為基礎(chǔ)進行計算和評估，未考慮其他食品，如水果、谷物和肉類等；同時，許多已登記的農(nóng)藥也未同時進行計算和評估，以上因素會導(dǎo)致膳食暴露量低估，因此，還需更大范圍的采樣調(diào)查和評估以減少誤差。（2）評估結(jié)果所依據(jù)的是未經(jīng)清洗和烹調(diào)等處理的豇豆樣品的殘留數(shù)據(jù)，現(xiàn)實生活中，新鮮蔬菜在被食用之前會進行加工處理，如去皮、水洗、燙漂、烹調(diào)等，農(nóng)藥殘留量多數(shù)會因此降低（Keikotlhaile et a1.，2010；Bonnechere，et a1.，2012；Yang et a1.，2012；Bajwa and Sandhu，2014；Huan eta1.，2015），從而導(dǎo)致膳食暴露量高估。

4結(jié)論

本研究結(jié)果表明，雖然海南產(chǎn)區(qū)豇豆樣品中多菌靈、啶蟲脒和阿維菌素的殘留檢出率較高，但通過食用豇豆攝入3種目標(biāo)農(nóng)藥所致的估計膳食暴露量均低于GB 2763-2016所規(guī)定的日允許攝入量，風(fēng)險商均小于1.000，不會對公眾健康產(chǎn)生危害。3種農(nóng)藥中，阿維菌素對膳食暴露量的貢獻率最大，減少豇豆中阿維菌素殘留是降低膳食暴露量的有效方式，建議在豇豆生產(chǎn)過程加強對阿維菌素的管理及合理使用阿維菌素。

（責(zé)任編輯麻小燕）