淺析4家藥企潔凈室環境檢出菌

李倩，顧珉

蘇州市藥品檢驗檢測研究中心，江蘇蘇州215000

淺析4家藥企潔凈室環境檢出菌

李倩，顧珉

蘇州市藥品檢驗檢測研究中心，江蘇蘇州215000

目的收集4家藥企潔凈室環境中24株微生物并進行初步鑒定，旨在了解潔凈室微生物污染趨勢。方法4家藥企采用平皿法收集潔凈室環境中的微生物，通過Vitek2-compact全自動細菌鑒定及藥敏分析系統鑒定收集到的環境菌并進行分析。結果共檢出8種革蘭氏陽性球菌、3種革蘭氏陽性芽孢桿菌、2種革蘭氏陰性桿菌。其中革蘭氏陽性菌占檢出菌的87.5%，革蘭氏陰性菌占檢出菌的12.5%、革蘭氏陽性球菌占檢出菌的75.0%、革蘭氏芽孢桿菌占檢出菌的12.5%、革蘭氏陰性桿菌占檢出菌的12.5%。結論4家藥企潔凈室收集的24株環境微生物主要檢出菌類為革蘭氏陽性球菌，各潔凈室需采取相應的消毒措施對其控制。

Vitek2-compact；潔凈室；細菌鑒定

隨著新版GMP的實行，藥企越來越重視生產車間的環境監測。不僅要控制空氣中的懸浮氣溶膠粒子，還需監控生產環境中活的微生物。該實驗收集4家藥企潔凈室環境中24株微生物并進行初步鑒定，旨在了解潔凈室微生物污染趨勢，并采取相應措施對污染微生物進行控制。

1 試驗部分

1.1 樣本

2016年1月—12月間4家藥企潔凈室共收集24株環境菌送檢，送檢樣本編號為1#～24#。

1.2 培養基

胰酪大豆胨瓊脂培養基（TSA）

1.3 試劑及試驗耗材

革蘭氏染色試劑、Vitek2-compact配套滅菌生理鹽水、一次性接種環、一次性接種棉簽、GP（革蘭陽性）鑒定卡、GN（革蘭陰性）鑒定卡、BCL（芽孢桿菌）鑒定卡

1.4 儀器

生物安全柜（型號：Esco LA2-4A1）、生化培養箱（型號：LRH-50）、麥氏濁度比濁儀、生物顯微鏡（型號：BX53）、Vitek2-compact全自動細菌鑒定及藥敏分析系統、高壓蒸汽滅菌器（型號：MLS-3781L-PC）。

2 試驗步驟

2.1 待鑒定菌株分離純化

將24株送檢樣本分別劃線轉種至胰酪大豆胨瓊脂培養基（TSA）平板，置32℃培養24 h，得到單菌落。

2.2 革蘭氏染色及鏡檢

從24株樣本轉種的TSA平板挑取單菌落進行革蘭氏染色，將已染色的玻片，放在顯微鏡下觀察，記錄所得結果。

2.3 采用Vitek2-compact全自動細菌鑒定及藥敏分析系統鑒定

根據鏡檢結果，另挑取上述24株樣本菌落適量，將革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌用滅菌生理鹽水制成比濁度約0.5～0.6之間的菌懸液，將革蘭氏陽性芽孢桿菌用滅菌生理鹽水制成比濁度約2.0的菌懸液，并選擇對應的鑒定卡片將制備的菌懸液放入鑒定儀器樣品架上機檢測。

3 鑒定結果分析

從表1可以看出，大多數鑒定結果都在90.00%以上，說明檢測可信度較好，只有一株菌的鑒定結果為85.00%，說明檢測可信度可以接受。24株環境菌中共檢出8種革蘭氏陽性球菌、3種革蘭氏陽性芽孢桿菌、2種革蘭氏陰性桿菌。檢出頻率最高的是沃氏葡萄球菌，其次是藤黃/里拉微球菌。

從圖1和圖2可以看出革蘭氏陽性菌占檢出菌的87.50%，革蘭氏陰性菌占檢出菌的12.50%；革蘭氏陽性球菌占檢出菌的75.00%、革蘭氏芽孢桿菌占檢出菌的12.50%、革蘭氏陰性桿菌占檢出菌的12.50%。

4 對策

從上述菌型分析結果可得出，這4家藥企潔凈室環境菌檢出率最高的是革蘭氏陽性球菌，而居其首位的是沃氏葡萄球菌和藤黃/里拉微球菌，這兩種菌均為潔凈室環境的主要菌群，沃氏葡萄球菌是葡萄球菌屬的一種，主要存在于環境、人與動物的皮膚及粘膜上，顯微鏡下呈葡萄串狀。藤黃/里拉微球菌主要分布在空氣、土壤、水、動植物體表。這兩種菌極有可能為潔凈室人員帶入，應做好進出人員的防護，還必須加強潔凈室環境滅菌消毒的管理與監控。

表1 24株環境菌Vitek2-compact鑒定結果

4.1 消毒劑消毒

消毒劑分非氧化型和氧化型，非氧化型消毒劑如季銨鹽類化合物一般不具備殺滅芽孢的能力，其殺菌譜較窄，對綠膿桿菌等革蘭陰性菌作用也較差，對細菌芽孢基本無效[1]。而氧化型消毒劑如過氧乙酸、二氧化氯、次氯酸鹽等可在不同程度上殺滅芽孢[2]。有文獻報道國外現普遍采用戊二醛噴灑，且加入陽離子表面活性劑（如季銨鹽）能明顯增強戊二醛對細菌芽孢的滅殺作用[3]。檢出革蘭氏陽性芽孢桿菌的藥企潔凈室需引起重視，根據潔凈室檢出菌選擇合理的殺孢子劑。藥企潔凈室的日常消毒劑的種類必須多余一種，可減少微生物出現耐藥性的風險。各藥企潔凈室需根據消毒劑的殺菌譜、功效等選擇合理的潔凈室消毒劑。

4.2 空氣消毒

4.2.1 紫外線照射法紫外線在波長250～270 um時殺菌作用最強，可殺滅各種微生物包括細菌繁殖體、細菌芽孢、真菌等[4]。但各藥企潔凈室的紫外燈燈管吊裝高度、照射時間、日照射次數、季度檢測紫外燈輻射強度、使用的環境溫濕度等都必須符合要求。

圖1 24株環境菌污染趨勢分析圖

圖2 24株環境菌菌型分析統計圖

4.2.2 臭氧消毒法臭氧可殺滅細菌繁殖體、真菌等。在密閉的空間內、無人狀態下，采用20 mg/m3濃度的臭氧作用30min，對自然菌的殺滅率達到90.0%以上[5]。

4.2.3 過氧化氫干霧滅菌比傳統甲醛熏蒸更有優勢，體現在無毒、無色、無味、log4-log6的光譜高效滅菌效果，整體滅菌只需3～4 h，表面空間均無殘留，不需清潔處理等。過氧化氫干霧消毒效果優于臭氧消毒，體現在臭氧很難達到殺滅孢子的效果，一般只能殺活菌，而過氧化氫殺菌效力廣譜高效，可同時殺滅200種微生物，30 min對黑色枯草芽孢、嗜熱脂肪芽孢桿菌的殺滅率穩定[6]。

4.3 化學與物理方法聯用消毒

常采用的物理因子有熱力、紫外線、微波、超聲波、電離輻射。將這些物理因子與化學消毒劑聯用，也可使用兩種或兩種以上化合物組成復方消毒劑，也可獲得更好的殺菌效果[7]。

5 結語

通過對4家藥企潔凈室收集的24株環境微生物分析鑒定得出潔凈室中主要檢出菌類為革蘭氏陽性球菌，各潔凈室需采取相應的消毒措施來控制其檢出的環境菌。在日常生產及檢驗時收集潔凈室環境微生物對企業潔凈室的微生物的質控和微生物數據庫的建立具有重要意義，并有助于評價潔凈室清潔或消毒規程的制定。

[1]魏秋華.抗菌劑的研究進展[J].中國消毒學雜志，2003，20（1）：31-35.

[2]黃俠.新型過氧乙酸殺芽孢劑在制藥潔凈室中的應用[J].中國藥事，2015，29(4)：446-449.

[3]張天寶，肖遠志，王延輝，等.復方戊二醛與鄰苯二甲醛消毒劑對細菌芽孢殺滅效果的研究[J].中國消毒學雜志，2016，33（4）：301-304.

[4]祖偉，班海群，沈瑾，等.手術室空氣消毒方法與效果的研究現狀[J].中國消毒學雜志，2014，31（3）：277-280.

[5]WS/T367-2012醫療機構消毒技術規[S].北京：中華人民共和國衛生部，2012：23-36.

[6]宋大海.過氧化氫（干霧）滅菌及其在藥廠的應用[J].機電信息，2015（20）：44-49.

[7]王芳.不同消毒因子協同殺菌作用研究進展[J].中國消毒學雜志，2000，17（3）：155-158.

R117

A

1672-5654（2017）04（a）-0056-03

2017-01-05）

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.10.056

李倩(1985-)，女，江蘇鹽城人，碩士，主管藥師，主要從事藥品、保健品、化妝品的微生物檢測及潔凈室檢測工作。