L35楊微體快繁技術的研究

李景濤 ，劉英軍 ，解小鋒 ，段春玲 ，趙文超 ，沈善超 ，周彩琴 ，范志強 *

（1.山東省林木種苗和花卉站，山東 濟南250014；2.山東省經濟林管理站；3.諸城市萬景源農業科技有限公司）

L35楊為歐美楊，雌株，干直，抗逆性強，適應范圍廣，育苗及造林成活率高，速生。楊樹作為我省人工栽培面積最大的樹種，目前普遍出現了種質退化以及病毒病嚴重的情況，造成這一現象最重要的原因是以苗繁苗、繁育種苗所用的種條老化，病毒積累嚴重，造成種條質量差。利用微體快繁技術，可部分脫去病毒，使楊樹良種復幼復壯，利用組培苗建設標準化采穗圃，用采穗苗的種條做為繁殖材料來建設良種繁育圃，可提高種苗的質量，對于推動良種的產業化健康發展具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料的選擇

供試品種為L35楊，取春季大田生長的頂芽和帶腋芽的莖段作為外植體。

1.2 實驗方法

1.2.1 無菌體系的建立和外植體的誘導

取帶腋芽的莖段，剪去葉片，留葉柄基部，用流水沖洗干凈，在超凈工作臺上，用75%的酒精浸30秒，根據材料的幼嫩程序，0.1%的升汞溶液處理7～15min、無菌水沖洗5遍。切取頂芽和莖段接種到1/2MS空白培養基中。培養條件：溫度25℃，光照度2000～2500LX，光照每天12小時。

1.2.2 分化培養基的篩選

基本培養基為MS附加3%蔗糖，激素采用三因素 （6-BA，GA3，NAA，）， 三水平 （6-BA 0.05、0.1、0.15 mg/L ；GA3 0、0.1、0.2 mg/L ；NAA 0.01、0.02、0.03 mg/L）的正交實驗設計，以分化系數為主要觀測指標，同時觀測愈傷組織的大小。實驗設計如下表

表1 不同濃度激素對L35楊試管苗增殖影響正交實驗設計L9（33）

切取誘導培養形成的頂芽和腋芽，切取2～3cm的嫩梢，轉入上述9種不同培養基中，每個組合25株，培養條件同上，培養25天后統計實驗結果。

1.2.3 生根培養基的篩選

基本培養基為1/2MS附加2%蔗糖，添加不同濃度 IBA（0.1、0.5、1.0、2.mg/L），研究單一生長素 IBA對生根率和愈傷情況的影響。

從繼代MS培養基中選取發育正常的長2.0cm以上的新梢作為生根材料，插入上述生根培養基中。每種處理25株生根苗，培養條件同上，觀察統計生根率和愈傷組織狀況。

2 實驗結果與分析

2.1 無菌體系的建立和外植體的誘導

實驗結果表明：L35楊外植體最適升汞處理時間為9min，經升汞表面消毒轉到1/2MS空白培養基中，平均污染率為75%。成活的外植體在培養基中培養7～9天后，頂芽開始生長，腋芽萌動，20天后長成2cm左右的嫩梢。

2.2 分化培養基的篩選

外植體在9個分化培養培養基中培養10天左右均開始誘導出不定芽，25天后各組合均誘出不定芽和愈傷組織，具體結果如表2：

表2 不同濃度激素對L35楊試管苗增殖影響結果

通過對實驗結果的統計分析表明：L35楊試管苗理論最適分化培養基為：MS+6-BA0.15mg/L+NAA0.03mg/L，與組合7相同，分化系數可達到4.6，愈傷組織偏大。實際最適分化培養基為MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.02mg/L，分化系數可達4.0，愈傷組織大小適中。同時通過極差分析,三種激素對對L35楊試管苗分化的影響程度為 6-BA＞NAA＞GA3，6-BA對L35楊的分化系數影響最大。

鑒于在實際生產中，愈傷組織偏大會造成基部易褐化，在接種時會造成較大的工作量，因而在實際生產上采用的分化培養基為：MS+IBA0.1mg/L+NAA0.02mg/L+3%蔗糖。通過連續的分化培養，驗證分化培養基的穩定性。

表3 不同IBA濃度對L35楊試管苗生根的影響

2.3 生根培養基的篩選

接種到上述四種生根培養基中小苗培養15天左右長出放射狀不定根，20天后統計4個組合的生根率，結果如表3：

由上述實驗結果可知，L35楊的生根對IBA的反應較為敏感，四個不同濃度處理生根率均較高，但愈傷都較大，不利于馴化。根據這一實驗結果，將IBA 的濃度降為（0.01、0.02、0.05mg/L）三個梯度，以0.1做對照。實驗結果如下：

表4 低濃度IBA對L35楊試管苗生根的影響

實驗結果表明：L35楊試管苗最適生根培養基為1/2MS+IBA0.02mg/L+2%蔗糖生根率為97.22%，誘導的根系較多，呈白色放射狀，愈傷大小合適，長勢良好，馴化后成活率高。

3 結論

本實驗通過對L35楊微體快繁體系的研究，確定了最佳分化培養基為MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.02mg/L+3%蔗糖，分化系數為4.0，分化系數較高，分化苗生長勢較好，愈傷適中。最適生根培養基為1/2MS+IBA0.02mg/L+2%蔗糖 ，生根率為97.22%，生根率較高，生根質量好，根系呈放射狀，愈傷組織小，有利于馴化成活。L35楊微體快繁體系的建立，為L35楊的工廠化和規模化育苗打下了基礎。