氣相色譜一質譜法測定枸杞中28種農藥殘留

林祥群　盧春霞　羅小玲　唐宗貴

摘要：建立了氣相色譜-質譜法檢測枸杞中28種農藥殘留的分析方法。樣品經乙腈提取，carb/NH₂固相萃取柱凈化，DB-17MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）色譜柱分離，選擇離子監測模式（SIM）檢測，外標法定量。結果表明，28種農藥在0.01～5.00μg/mL范圍內呈良好線性（r²>0.99），方法檢出限為0.008～0.085μg/g，定量限為0.027～0.280μg/g，加標回收率為71.0%～106.0%，相對標準偏差為0.96%～12.30%。該方法靈敏度高、定性定量準確，可滿足枸杞樣品中農藥多殘留的檢測要求。

關鍵詞：枸杞；農藥殘留；氣相色譜-質譜法（GC-MS）；多殘留檢測；固相萃取；前處理

中圖分類號：TQ450.2⁺63 文獻標志碼：A 文章編號：1002—1302（2016）01—0285—05

枸杞是我國傳統的藥食同源植物，具有補腎養肝、潤肺明目之功效，同時也是我國主要的出口創匯農產品，主要出口韓國、日本、東南亞及歐美地區等。枸杞屬于香甜細嫩的花果類植物，在生長過程中，病蟲害種類多、發生頻率高，往往大量使用多種農藥進行防治，造成枸杞農藥殘留嚴重，致使枸杞食用、藥用安全性受到影響。目前，農藥殘留已成為當前影響我國枸杞質量安全、出口創匯的主要因素。我國目前仍未規定枸杞中農藥殘留的限量標準。因此，探討簡單、快速、準確的枸杞農藥多殘留分析方法對控制枸杞農藥殘留污染、促進枸杞產業健康發展具有重要意義。目前，關于枸杞中農藥殘留分析方法的研究報道較少，主要有液相色譜法、液相色譜-串聯質譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質譜法等；但以上方法均是針對每一類藥物進行檢測，目前枸杞中使用的農藥多達幾十種，無法滿足農藥多殘留分析要求。本試驗以枸杞生長過程中常用的農藥為研究對象，采用氣相色譜-質譜法（GC-MS）結合固相萃取技術，建立簡單、準確、可靠的枸杞中28種農藥多殘留分析方法，該方法前處理簡單、快速、凈化效果好、定性準確、靈敏度高、回收率穩定，各項檢測指標均能滿足目前我國農藥殘留監測要求。

1材料與方法

1.1材料與試劑

earb/NH₂固相萃取柱（500 mg/500 mg/6 mL，德國CNW公司）；丙酮、正己烷（色譜級，美國J.T.Baker公司）；乙腈（色譜級，德國Merck公司）；甲苯（色譜級，德國CNW公司）；敵敵畏、敵百蟲、乙酰甲胺磷、甲拌磷、氧樂果、久效磷、樂果、百菌清、毒死蜱、對硫磷、三唑酮、馬拉硫磷、三氯殺螨醇、丙溴磷、聯苯菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、噠螨靈、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯、苯醚甲環唑、二甲戊樂靈、克螨特、丙環唑、戊唑醇、咪鮮胺均購自中國國家標準物質中心，濃度均為1 000 mg/L。其余試劑為分析純，試驗用水為超純水。

1.2儀器與設備

Agilent7890A氣相色譜儀，7000B Triple Quad GC/MS質譜儀（Agilent公司）；MassHunter數據處理軟件；Rapid Trace全自動固相萃取工作站（美國Biotage公司）；MS3 basic渦旋混合器（德國IKA公司）；T18 ULTRA TURRAX（德國IKA公司）；R-210旋轉蒸發器（瑞士步琦公司）；KQ-500DB超聲波清洗器（昆山市超聲儀器公司）。

1.3方法

1.3.1溶液配制 單標儲備液的制備：分別量取標準溶液各1.0 mL，用丙酮稀釋成100 mg/L的標準儲備液，-20℃下保存備用。混合標準工作液的制備：吸取一定量的各標準儲備液置于同一容量瓶中，用丙酮稀釋成合適濃度的工作溶液。

1.3.2樣品前處理 稱取（5.00±0.01）g枸杞于50 mL離心管中，加入5 mL水和15 mL乙腈，15 000 r/min勻漿提取1 min，加入2 g氯化鈉，渦旋混合1 min，6 000 r/min離心5 min，取上層有機相至濃縮瓶中。離心管中再加15 mL乙腈，重復提取1次，抽取并合并上層有機相，40℃旋轉蒸發至1～2 mL，待凈化。earb/NH2固相萃取柱用4 mL乙腈+甲苯（體積比3：1）預淋洗，待液面到達柱吸附層時，迅速將上述待凈化液轉移至凈化柱上，再用2 mL乙腈+甲苯（體積比3：1）洗滌樣液瓶并轉移上柱，重復3次，用25 mL乙腈+甲苯（體積比3：1）洗滌凈化柱，收集流出液于濃縮瓶中，40℃旋轉蒸發至近干，加入5 mL正己烷再旋轉蒸發至干，用正己烷+丙酮（體積比1：1）定容至1 mL，過0.22μm有機相濾膜，用于氣質測定。

1.3.3色譜、質譜條件 色譜條件：色譜柱：DB-17MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm，美國Agilent公司）；升溫程序：初始溫度70℃，恒溫1 min，以8℃/min的速率升溫至210℃，再以20℃/min的速率升溫至290℃，保持12 min；進樣口溫度280℃；進樣方式：脈沖不分流；載氣：高純度氦氣；流速：1.2 mL/min；進樣量：1.0 μL。質譜條件：電子轟擊（EI）電離模式；電離能量70 eV；掃描方式：選擇離子監測（sIM）；離子源溫度：230℃；四級桿溫度：150℃；GC-MS接口溫度：280℃；溶劑延遲：3.75 min。

1.3.4標準曲線、方法檢出限及定量限 將28種農藥混合溶液稀釋成10.0、5.0、2.0、0.5、0.2、0.1、0.05、0.02、0.01、0.002μg/mL系列標準工作液，采用“1.3.3”節的方法進行分析，以進樣質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸計算，求得28種農藥的線性方程、相關系數。在陰性樣品中添加28種農藥標準品，計算3倍信噪比（S/N>～3）和10倍信噪比（S/N≥10）時所對應的樣品質量濃度，分別作為方法的檢出限（LOD）、定量限（LOQ）。

1.3.5方法回收率及精密度試驗 采用對陰性樣品進行加標回收試驗來考察方法的準確度、精密度，對空白枸杞樣品，分別添加不同濃度的農藥混合標準溶液，按照“1.3.2”節的方法進行樣品前處理，在“1.3.3”節條件下測定，計算樣品加標回收率。每個添加水平重復6次，測得各組分的峰面積，計算其相對標準偏差。

2結果與分析

2.1色譜條件優化

選擇合適的色譜柱是農藥多殘留分析的前提，本試驗考察了DB-5MS、DB-17MS等2種不同極性的色譜柱，通過標準工作液進樣來比較兩者對28種農藥的分離效果。結果顯示，DB-5MS、DB-17MS均能實現組分的基本分離，但乙酰甲胺磷、久效磷等有機磷農藥在DB-17MS色譜柱上的峰形（圖1）優于DB-5MS色譜柱。

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2.2質譜條件優化

按照出峰順序對測物進行分組，分時段完成所有離子的檢測。保留時間接近的化合物被分進一組進行多離子同時掃描。采用SIM方法，每種化合物分別選擇1個定量離子、2～3個定性離子，以響應值較高且干擾較少的離子進行定量，以特征離子及離子問的相對豐度比進行定性。28種化合物優化的定量離子及定性離子等參數見表1。SIM掃描每個組分定量離子流圖見圖2。

2.3樣品前處理條件優化

比較了乙腈、丙酮、丙酮+正己烷（5：5）等溶劑對28種農藥的提取效果，結果表明，枸杞復水后加乙腈提取效果最好，這可能與樣品中加入水促進了枸杞中糖分溶解，從而提高了乙腈的滲透能力有關。加入NaCl后，乙腈可從混合溶液中快速分離，有利于后續操作。丙酮提取液中干擾物較多，不利于下一步凈化。丙酮+正己烷（5：5）的提取效率低于以上2種提取溶劑。因此，本試驗采用乙腈作為提取溶劑。

目前多農殘分析主要采用固相萃取柱吸附雜質方式來凈化，本試驗對比了C18、Florisil、carb/NH₂3種吸附劑的凈化效果。由于枸杞基質復雜，含有較多的糖類、蛋白質及色素等，C18對這些雜質的吸附能力弱，凈化效果較差。Florisil柱雖然對雜質有較強的吸附能力，但對極性較強的有機磷農藥也有吸附能力，增強洗脫液極性，可將此類組分洗脫，但雜質也會被同步洗脫。carb/NH₂的凈化效果最好，但對百菌清等含有芳香族結構的農藥也產生明顯吸附效果，在洗脫液中加入25%左右的甲苯可以破壞吸附劑和此類農藥的相互作用。同時，甲苯的存在可防止堿性敏感的農藥在堿性吸附劑（NH₂）上的降解。因此，本試驗選擇carb/NH₂作為固相萃取柱，乙腈+甲苯（體積比3：1）為洗脫溶劑。

2.4標準曲線、方法檢出限和定量限

28種農藥混合標準溶液，采用外標法定量，在“1.3.3”節條件下分析，以定量離子峰面積（y）對質量濃度（x）得出校正曲線，通過回歸分析得出回歸方程、決定系數（表2）。結果表明，28種農藥在0.01～5.00μg/mL范圍內線性關系良好（r²>0.99），方法的檢出限（LOD）和定量下限（LOQ）分別為0.008～0.085μg/g和0.027～0.280μg/g，滿足農藥殘留定量分析要求。

2.5方法的回收率與精密度

分別在空白樣品中添加不同濃度水平的混合農藥標準工作溶液，每個添加水平平行分析6次，添加后按“1.3.2”節和“1.3.3”節所述步驟進行提取、凈化、測定，樣品加標回收率、相對標準偏差見表3。結果顯示，在3個加標水平下，28種農藥的平均回收率范圍為71.0%～106.0%，相對標準偏差為0.96%～12.3%，表明該方法準確可靠。

2.6實際樣品測定

利用本試驗方法，分別對來自農貿市場、超市、農戶、枸杞加工企業、生產基地的27個枸杞樣品進行檢測，其中有11個樣品檢出23次農藥殘留。檢出的農藥和檢出量分別為：毒死蜱（0.091～0.275 mg/kg）、丙溴磷（0.528 mg/kg）、聯苯菊酯（0.016 mg/kg）、三氟氯氰菊酯（2.22 mg/kg）、噠螨靈（1.09 mg/kg）、氯氰菊酯（0.194～0.434 mg/kg）、氰戊菊酯（0.284～0.616 mg/kg）、溴氰菊酯（3.11～3.59 mg/kg）、苯醚甲環唑（0.0780～0.212 mg/kg）、甲氰菊酯（0.148 mg/kg）、克螨特（0.145 mg/kg）、戊唑醇（0.412 mg/kg）。

3結論

本研究建立了枸杞中28種農藥多殘留的氣相色譜一質譜聯用檢測方法，包括11種有機磷殺蟲劑、1種有機硫殺蟲劑、1種有機氮殺蟲劑、3種有機氯殺蟲劑、7種擬除蟲菊酯類殺蟲劑、4種含氮殺菌劑、1種除草劑，該方法靈敏度高、結果準確可靠，重復性好，為枸杞中農藥多殘留的測定提供了簡單可靠的前處理方法和檢測手段。