哮喘患者外周血調節性T細胞和Th1/Th2的變化及與病情的相關性分析

程 思， 邵天波， 郭曉靜

(1.武警云南省總隊醫院檢驗科， 云南 昆明 6501112.昆明醫科大學第一附屬醫院檢驗科， 云南 昆明 650032)

哮喘患者外周血調節性T細胞和Th1/Th2的變化及與病情的相關性分析

程 思1， 邵天波2， 郭曉靜1

(1.武警云南省總隊醫院檢驗科， 云南 昆明 6501112.昆明醫科大學第一附屬醫院檢驗科， 云南 昆明 650032)

目的：：研究并分析哮喘患者外周血調節性T細胞和Th1/Th2的變化及與病情的相關性。方法：選取2013年1月至2016年6月我院收治的哮喘患者100例記為觀察組。另取同期100例健康體檢者為對照組。分別比較兩組人員的外周血調節性T細胞和Th1/Th2水平。此外，根據病情嚴重程度的不同，將哮喘患者分為急性期組(57例)與緩解期組(43例)，對比兩組患者的外周血調節性T細胞和Th1/Th2水平。并進行相關性分析。結果：觀察組的外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平分別為(1.6±0.6)%、(6.3±1.1)%，均低于對照組的(2.3±0.7)%、(11.5±0.9)%，具有顯著性差異(P<0.05)。急性期組外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平分別為(1.2±0.5)%、(4.5±1.0)%，均低于對照組的(1.9±0.6)%、(9.0±1.2)%，具有顯著性差異(P<0.05)。經Spearman相關分析可得，哮喘患者外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平與病情均呈顯著負相關(r=-0.583，P<0.001；r=-0.632，P<0.001)。結論：臨床上通過檢測哮喘患者的外周血Treg水平與Th1/Th2水平可有效評估病情嚴重程度。

哮 喘； 調節性T細胞； 輔助性T細胞

本文通過研究哮喘患者外周血調節性T細胞和Th1/Th2的變化及與病情的相關性并進行分析，目的在于為臨床哮喘患者的診斷、治療及預后評估提供參考依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：選取2013年1月至2016年6月我院收治的哮喘患者100例記為觀察組。納入標準[1]：診斷標準：①所有患者均符合2003年中華醫學會呼吸病學分會制定的哮喘診斷標準。②不伴有感染性疾病；③入院7d前未接受免疫抑制劑治療；④無慢性病史。其中男58例，女42例，年齡35～62歲，平均年齡41.4±3.5歲。另取同期100例健康體檢者為對照組。其中男56例，女44例，年齡33～60歲，平均年齡41.2±3.4歲。兩組人員的年齡、性別等資料比較無顯著性差異(P>0.05)，存在可比性。本研究所有患者均簽署了知情同意書，且經醫院倫理委員會批準。

在下一代交換組網中，軟交換和IMS技術是兩個重要的階段，但是在實現目標方面卻表現出明顯的一致性，都是通過構建下一代交換組網，并且下一代交換組網要體現出分組、層次分明的特征，能實現對控制和承載的分離。

1.2 研究方法：①Treg檢測：所有患者均抽取清晨空腹靜脈血3mL，并取全血100μL，分別加入CD25-PE cocktail以及CD4-FITC各10μL，放置于4℃條件下進行孵育30min。加入1mL紅細胞裂解置10min，同時采用生理鹽水進行反復沖洗3次。隨后加入Fixation/Perm緩沖液1mL進行破膜固定45min，利用洗滌緩沖液反復洗滌2次。然后取10mL鼠抗人Foxp3-PC單克隆抗體(購自美國貝克曼公司)加入其中，并于4℃條件下孵育30min，再次洗滌緩沖液反復洗滌2次。最后用flow cytimetry staining buffer重懸，并利用流式細胞儀(購自美國BD公司)進行檢測。②Th1/Th2檢測：取所有患者全血100μL，加入RPMI 1640中稀釋，稀釋比為1∶1。隨后在各管中加入10μL的刺激劑(購自美國BD PharMingen公司)，在室溫條件下，放置于5%CO2培養箱中培養5h，混勻。加入CD3-PC5以及CD8-PC7各10μL，在室溫、避光條件下孵育15min。各管加入固定液100μL，繼續在室溫、避光條件下孵育15min。各管分別加入PBS 3mL，以1200r/min，離心5min，去除上清液。然后取100μL的破膜與溶血液加入其中，同時加入10μL的IFN-γ、IL-4-PE，在室溫、避光條件下孵育15min。各管分別加入PBS 3mL，以1200r/min，離心5min，去除上清液，以0.5mL PBS重懸，上機檢測。

綜上,采用復方丹參滴丸聯合阿司匹林治療老年不穩定型心絞痛相比阿司匹林單獨用藥,可有效提升治療效果,可考慮作為此類患者的備選方案之一。

2.2 急性期組與緩解期組的外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平對比：急性期組外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平分別為(1.2±0.5)%、(4.5±1.0)%，均低于對照組的(1.9±0.6)%、(9.0±1.2)%，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.3 哮喘患者外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平與病情的相關性分析：經Spearman相關分析可得，哮喘患者外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平與病情均呈負相關。見表3。

2 結 果

2.1 觀察組及對照組的外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平對比：觀察組的外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平分別為(1.6±0.6)%、(6.3±1.1)%，均低于對照組的(2.3±0.7)%、(11.5±0.9)%，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 觀察組及對照組的外周血調節性Treg細胞和Th1/Th2水平對比

1.3 觀察指標：分別比較不同組別的外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平。

表2 急性期組與緩解期組的外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平對比

表3 哮喘患者外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平與病情的相關性分析

3 討 論

支氣管哮喘主要是發生于兒童時期的一種慢性疾病，其主要病理學特征是氣道重塑以及呼吸道炎性反應[2]。有研究報道顯示，哮喘的發生于機體免疫功能紊亂存在密切相關[3]。而T淋巴細胞及其分泌的多種細胞因子均在哮喘的氣道慢性變應性炎癥中發揮著重要作用[4]。其中Treg屬于一種免疫調節性T細胞，與Th1及Th2細胞存在本質的區別。其主要是通過分泌THF-β、IL-10，從而對Th2細胞分泌IL4，IL-5產生抑制作用，進一步組織了IgE的生成及分泌，最終對嗜堿性粒細胞、嗜酸性粒細胞以及肥大細胞所介導的炎癥反應產生抑制作用，直接抑制了變態反應性疾病的發生。隨著近年來相關研究的不斷深入，輔助性T細胞在哮喘中的作用也日益受到重視，已成為臨床上研究哮喘發病機制的熱點。

建立完善的食品安全監督管理體系。建立健全食品安全監測制度是提升食品安全檢測水平的關鍵所在，政府部門必須要設立從食品原材料到最后食品上市的全過程監督管理機制，利用法律來規范各個環節的質量審查，以此來降低食品安全問題出現的概率，進而提升我國食品的安全性。

本文研究發現：觀察組的外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平均顯著低于對照組。這提示了哮喘患者體內存在Treg細胞免疫功能障礙，且Th亞群之間的平衡發生了失衡。而Treg與Th1/Th2水平的變化可能直接參與了哮喘的發生、發展過程，并在其中具有極其重要的作用。孫德彬等的研究報道顯示[5]，Th1所分泌的IFN-γ以及Th2所分泌的IL-4等細胞因子均在哮喘中起著至關重要作用。Treg水平的變化則會對Th1/Th2細胞因子水平造成影響。與此同時，急性期組外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平分別為(1.2±0.5)%、(4.5±1.0)%，均顯著低于對照組的(1.9±0.6)%、(9.0±1.2)%。這表明可隨著患者病情的不斷加重，其外周血的Treg水平以及Th1/Th2水平均顯著下降，且在此過程中具有較強的一致性。由此我們可初步判斷，哮喘的發病機制可能是伴隨著病情的不斷加重，機體遭受的過敏原刺激程度增加，從而使得患者的外周血中Treg水平下降，免疫調節功能出現障礙。同時，Th2細胞的活性增強，Th1細胞活性則遭受抑制，進一步導致了Th1/Th2失衡，從而使得大量的抑炎因子生成，最終導致了哮喘的發生。其中袁穎志等通過研究也證實了上述觀點[6]：CD4+CD5+Foxp3+Treg細胞在小鼠哮喘模型的脾臟中表達低于正常術，且抑制功能存在明顯的下降，由此認為Treg數量以及抑制功能的降低可能是哮喘發病的主要機制。另有研究報道顯示[7]，Treg細胞可能會對Th2細胞所分泌的一系列細胞因子產生抑制作用，進一步有效降低了多種致炎因子的活性，從而達到降低變態反應性疾病發生的目的。此外，經Spearman相關分析可得，哮喘患者外周血CD4+CD5+Foxp3+Treg和Th1/Th2水平與病情均呈顯著負相關關系。這提示了我們在臨床上對外周血Treg以及Th細胞亞群進行研究，有利于臨床上對哮喘患者進行診斷以及預后評估，同時也可為臨床治療提供指導作用。

[1] 李俊.孟魯斯特治療對支氣管哮喘患者肺功能及Th1、Treg平衡的調節作用[J].臨床肺科雜志,2017,22(1):105～107.

[2] Massoud AH,Charbonnier LM,Lopez D,et al.An asthma-associated IL4R variant exacerbates airway inflammation by promoting conversion of regulatory T cells to TH17-like cells[J].Nat Med,2016,22(9):1013～1022.

[3] 孫美.調節性T細胞在哮喘中的研究進展[J].國際兒科學雜志,2014,41(1):22～25.

[4] 裴復陽,柳明坤,宋曉萍,等.金水寶對支氣管哮喘患者免疫功能的影響[J].航空航天醫學雜志,2016,27(11):1349～1350.

[5] 孫德彬,熊雪芳,周家峰,等.哮喘患者外周血調節性T細胞和Th1/Th2的變化及其與哮喘病情的關系[J].中國現代醫生,2016,54(16):6～9.

[6] Ruan G,Tao B,Wang D,et al.Chinese herbal medicine formula Gu-Ben-Fang-Xiao-Tang attenuates airway inflammation by modulating Th17/Treg balance in an ovalbumin-induced murine asthma model[J].Exp Ther Med,2016,12(3):1428～1434.

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1006-6233(2017)04-0699-04

云南省衛生科技計劃項目，(編號：2015NS32954)

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.04.050