多指標聯合檢測在糖尿病腎病早期診斷中的臨床應用

黃顥+韋鳳英+潘國剛+鄧益斌

【摘要】目的探討血清胱抑素C（Cys C）、同型半胱氨酸（Hcy）、β2微球蛋白（β2MG）及尿微量白蛋白（mAlb）聯合檢測在糖尿病腎病（DN）早期診斷中的臨床應用價值。

方法選取264例2型糖尿病（T2DM）患者為研究對象，分為兩個觀察組，即132例糖尿病腎病患者為DN組，132例單純糖尿病患者為T2DM組；另選取132例同期健康體檢者為對照組。在貝克曼庫爾特AU680型全自動生化分析儀上采用乳膠增強免疫散射比濁法測定血清中的Cys C、β2MG及尿液mAlb水平；羅氏Cobas E411型全自動電化學發光免疫分析儀上采用酶動力學法測定血清Hcy水平。對比分析各組指標的檢測結果。

結果與對照組比較，DN組和T2DM組的Cys C、Hcy、β2MG、mAlb四項觀察指標的檢測結果均明顯增高（P<0.01），且DN組的四項指標檢測結果增高更明顯 （P<0.01）；相關性分析結果顯示，Cys C與Hcy呈正相關（r=0.663， P<0.05），Cys C、Hcy與 mAlb均呈負相關（r=-0.712、-0.632， P均<0.05），而Cys C、Hcy、mAlb均與β2MG相關不顯著；ROC曲線分析結果也顯示，Cys C、Hcy、β2MG及mAlb的ROC曲線下面積分別為0.815、0.916、0.807和0.783，標準誤（s〖AKx-D〗）分別為0.050、0.023、0.045和0.018，95%置信區間分別為0.736～0.893、0.875～0.965、0.733～0.885和0.712～0.865；四項指標（Cys C+Hcy+β2MG+mAlb）聯合檢測的陽性率為96.21%（127/132），三項指標（Cys C+Hcy+β2MG）聯合檢測的陽性率為90.15%（119/132），兩項指標（Cys C+Hcy）聯合檢測的陽性率為84.10%（119/132），均明顯高于單項指標（Cys C）檢測的陽性率71.96%（95/132）。

結論定期監測血清Cys C、Hcy、β2MG及尿液mAlb等多項指標變化，有助于了解糖尿病腎病患者的病情發展，其臨床應用價值優于單項觀察指標，值得推廣應用。

【關鍵詞】血清胱抑素C；同型半胱氨酸；β2微球蛋白；尿微量白蛋白；糖尿病腎病

中圖分類號：R446.1文獻標識碼：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2017.02.003

【Abstract】Objective To investigate the clinical value of combined detection of serum cystatin C（Cys C），homocysteine（Hcy），β2microglobulin （β2MG） and microalbuminuria（mAlb） in early diagnosis of diabetic nephropathy（DN）.

Methods 264 cases of type 2 diabetes mellitus（T2DM） patients were selected as research objects and divided into two observation groups，that was，132 DN patients were selected as DN group，and 132 patients with simple diabetes mellitus as T2DM group.And another 132 healthy subjects were selected as control group.And then，serum levels of Cys C，β2MG and mAlb were determined by latex enhanced immune scattering turbidimetry on Beckman Kurt AU680 automatic biochemical analyzer.Serum level of Hcy was measured by enzyme kinetic method on Roche Cobas E411 automatic electrochemiluminescence immunoassay analyzer.Test results of each index were compared and analyzed among all groups.

ResultsCompared with the control group，detection results of Cys C，Hcy，β2MG，mAlb of the DN group and T2DM group all significantly increased（P<0.01），and the detection results of the four indexes of the DN group increased more significantly（P<0.01）.Correlation analysis showed that the Cys C was positively correlated with Hcy（r=0.663，P<0.05），Cys C，Hcy and mAlb were negatively correlated（r=-0.712，-0.632，all P<0.05），while Cys C，Hcy，mAlb were all not significantly correlated with β2MG.ROC curve analysis results also showed that area under the ROC curve of Cys C，Hcy，β2MG and mAlb were 0.815，0.916，0.807 and 0.783，respectively，standard errors（s〖AKx-D〗） was 0.050，0.023，0.045 and 0.018，respectively，95% confidence intervals was 0.736～0.893，0.875～0.965，0.733～0.885 and 0.712～0.865，respectively.The positive rate of combined detection of the four indicators （Cys C+Hcy+β2MG+mAlb） was 96.21%（127/132），that of combined detection of the three indicators （Cys C+Hcy+β2MG） was 90.15%（119/132），and that of combined detection of the two indicators （Cys C+Hcy） was 84.10%（119/132），all significantly higher than that 71.96%（95/132） of single index （Cys C）.

ConclusionRegular monitoring for changes of indexes like Cys C，Hcy，β2MG and urine mAlb can help to understand the development of diabetic nephropathy patients，and its clinical value is better than that of single observation index.Thus， it is worthy of popularization and application.

【Key words】Cys C；Hcy；β2MG；mAlb；DN

根據國際糖尿病聯盟（IDF）的最新統計數據顯示，我國糖尿病患者已高達1.14億，居世界首位。糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病發展過程中導致的終末期病變，是2型糖尿病（T2DM）最常見的嚴重并發癥，其對人體健康的危害程度居慢性非傳染性疾病的第三位[1]。DN隱蔽性強，當患者出現典型臨床癥狀時，通常為時已晚，即使通過治療也難以達到理想效果[2～3]。因此，尋找糖尿病腎病早期診斷指標對早期預防腎功能衰竭具有重要的意義。本文探討血清胱抑素C（Cys C）、同型半胱氨酸（Hcy）、β2微球蛋白（β2MG）、尿微量白蛋白（mAlb）等多指標聯合檢測在DN早期診斷中的應用價值，以期為DN早期診斷與治療提供理論和實驗依據。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2014年2月～2016年9月我院內分泌科收治的2型糖尿病患者264例為研究對象，其中糖尿病腎病患者132例（DN組），男84例，女48例，平均年齡（53.5±8.3）歲，平均病程（6.5±3.3）年；單純糖尿病患者132例（T2DM組），男76例，女56例，平均年齡（52.5±8.6）歲，平均病程（5.1±3.5）年。選取同期健康體檢者132例為對照組，男70例，女62例，平均年齡（55.8±8.9）歲，經糖耐量試驗排除糖尿病，血壓、血脂均正常，無糖尿病及高血壓家族史。三組對象一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05）。

1.2儀器與試劑

Cys C和β2MG檢測試劑盒購自上海執誠生物科技有限公司；Hcy檢測試劑盒購自上海羅氏診斷產品有限公司；mAlb試劑盒購自寧波美康生物科技有限公司；貝克曼庫爾特AU680型全自動生化分析儀購自美國貝克曼庫爾特有限公司；羅氏Cobas E411型全自動電化學發光免疫分析儀購自德國ROCHE有限公司。

1.3入組標準

（1）2型糖尿病的診斷標準符合1999年世界衛生組織（WHO）規定的診斷與分型標準；（2）近期無經常熬夜、吸煙、飲酒、飲咖啡等不良影響因素；（3）排除患有嚴重心、肝、肺、腎、腦等臟器功能不全患者；（4）排除血液系統疾病及急性感染性疾病患者。

1.4方法

所有觀察對象均空腹狀態下采集靜脈血5 ml，留取中段尿2 ml。血液標本2000 r/min離心10 min，取血清檢測；尿液標本2000 r/min離心5 min，取上清液檢測。其中Cys C、β2MG、mAlb采用乳膠增強免疫散射比濁法測定，在貝克曼庫爾特AU680型全自動生化分析儀上樣檢測；Hcy采用酶動力學法測定，在羅氏Cobas E411型全自動電化學發光免疫分析儀上樣檢測。所有檢測項目在實驗前均進行室內質控分析，高、中、低值質控均在控。結果判斷采用試劑盒說明書中的參考范圍：Cys C為0～1.25 mg/L；Hcy為0～15.0 μmol/L；β2MG為0～2.8 mg/L；mAlb為0～30 mg/L。

1.5統計學方法

應用SPSS 19.0統計學軟件進行分析處理。計量資料以均數±標準差（〖AKx-D〗±s）表示，多個樣本均數比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用q檢驗（NewmanKeuls法），計數資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Pearson檢驗；診斷效能評價采用ROC曲線，檢驗水準：α=0.05，雙側檢驗。

2結果

2.1各組觀察指標檢測結果的比較

與對照組比較，DN組和T2DM組的Cys C、Hcy、β2MG、mAlb四項觀察指標的檢測結果均明顯增高（P<0.01），且DN組增高更明顯 （P<0.01）。見表1。

2.2DN組中各觀察指標間的相關性分析

DN組中Cys C與Hcy呈正相關（r=0.663， P<0.05）；Cys C、Hcy與 mAlb均呈負相關（r=-0.712、-0.632，P均<0.05）；Cys C、Hcy、mAlb均與β2MG相關不顯著。

2.3DN組中各觀察指標對DN的診斷效能

根據DN組和對照組的各指標檢測結果繪制出ROC曲線圖，并計算曲線下面積、標準誤和置信區間。結果顯示，Cys C、Hcy、β2MG及mAlb的ROC曲線下面積分別為0.815、0.916、0.807和0.783，標準誤（s）分別為0.050、0.023、0.045和0.018，95%置信區間分別為0.736～0.893、0.875～0.965、0.733～0.885和0.712～0.865，均具有較高的診斷效能。見圖1。

2.4DN組中多項指標聯合檢測與單項指標的陽性率比較

四項指標（Cys C+Hcy+β2MG+mAlb）聯合檢測的陽性率為96.21%，三項指標（Cys C+Hcy+β2MG）聯合檢測的陽性率為90.15%，兩項指標（Cys C+Hcy）聯合檢測的陽性率為84.10%，單項指標（Cys C）檢測的陽性率71.96%，四組診斷陽性率比較差異有統計學意義（P<0.001），單項指標診斷陽性率低于聯合檢測，并且診斷陽性率隨著聯合指標數量增多而有遞增趨勢。見表2。

3討論

Cys C是一種低分子量堿性糖化蛋白質，在所有有核細胞中恒定持續表達，生成速度和循環水平較為恒定，不受肌肉、感染、蛋白排泄率的影響，且與年齡、性別、腫瘤、免疫性和內分泌疾病無關，是腎功能早期損傷較好的內源性標志物[4～5]。Hcy是一種與血管損傷密切相關的氨基酸，DN早期往往會發生血管內皮細胞的損傷，從而導致Hcy增高，是腎功能早期損傷的另一內源性標志物[6]。β2MG是一種小分子量蛋白質，生成量恒定，不與血漿蛋白結合，可自由通過腎小球，幾乎全被近曲腎小管完全吸收，繼而在腎臟進行分解代謝，能較早反映腎小球濾過功能的損傷情況，也作為早期腎功能損傷的敏感指標物[7]。正常情況下，腎小球濾過膜上的負電荷屏障會阻止mAlb通過，尿液中幾乎檢測不到mAlb的存在，但腎損傷早期主要破壞腎小球濾過膜的負電荷屏障，致使尿液中出現大量的mAlb，因此，檢測尿液中的mAlb含量變化也可反映腎功能的早期損傷情況[8]。盡管這些觀察指標都能從不同角度反映腎功能早期變化情況，但單一指標的診斷效能比較低，因此推測，多指標聯合檢測有可能會提高其臨床診斷效能。

本研究結果顯示，與對照組比較，DN組和T2DM組的Cys C、Hcy、β2MG、mAlb四項觀察指標的檢測結果均明顯增高，且DN組的增高更明顯；相關性分析結果顯示，Cys C與Hcy呈正相關，Cys C、Hcy與 mAlb均呈負相關，而Cys C、Hcy、mAlb均與β2MG相關無顯著性。說明當腎小球功能出現輕微損傷時，血漿Cys C、Hcy、β2MG及尿mAlb濃度均可出現異常變化，且會隨著病情加劇不斷加重。ROC曲線分析結果也顯示，Cys C、Hcy、β2MG及mAlb的ROC曲線下面積分別為0.815、0.916、0.807和0.783，標準誤（s〖AKx-D〗）分別為0.050、0.023、0.045和0.018，95%置信區間分別為0.736～0.893、0.875～0.965、0.733～0.885和0.712～0.865，說明這四項觀察指標均具有較高的診斷效能，都可以用于DN的早期診斷，而且四項指標聯合檢測的陽性率（96.21%）明顯高于單項指標檢測的陽性率（71.96%）。

綜上所述，定期監測Cys C、Hcy、β2MG、mAlb等多項指標變化，有助于了解DN患者的病情發展，其臨床應用價值優于單項觀察指標，值得推廣應用。

參考文獻

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[5]Hojs R，Bevc S，Ekart R，et al.Serum cystatin Cbased equation compared to serum creatininebased equations for estimation of glomerular filtration rate in patients withchronic kidney disease[J].Clin Nephrol，2008，70（1）：1017.

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[7]張鵬飛.尿胱抑素C在診斷老年2型糖尿病腎小管早期損傷中的臨床意義[J].中國老年學雜志，2013，33（6）：14041405.

[8]陳翠蘭，張興坤，車樹強，等.糖腎康膠囊對糖尿病腎病Ⅲ期尿微量白蛋白的影響[J].天津中醫藥，2014，31（10）：596598.

（收稿日期：2016-11-23 修回日期：2017-03-27）

（編輯：梁明佩）

基金項目：國家自然科學基金（81460123）；百色市科學研究與技術開發計劃項目（百科計字〔2016〕14號）；百色市右江區科學研究與技術開發計劃項目（右科計字〔2016〕1號）

作者簡介：黃顥，男，主管技師，研究方向：臨床檢驗診斷技術研究與開發。Email：77278652@qq.com

▲通信作者：鄧益斌。Email：dengyb75@163.com